GC测定苗药大果木姜子中1，8-桉叶素的含量△

戴玮，肖苏萍，郭凯，王继永，赵润怀

(中国药材公司，北京 100195)

GC测定苗药大果木姜子中1，8-桉叶素的含量△

戴玮，肖苏萍，郭凯，王继永，赵润怀*

(中国药材公司，北京 100195)

目的：采用气相色谱法建立大果木姜子中指标性成分1，8-桉叶素的含量测定方法。方法：Agilent DB-624毛细管(30 m×0.25 mm，1.4 μm)色谱柱，载气为高纯氮气，进样口温度为200 ℃，检测器温度为250 ℃，程序升温：50 ℃保持5 min，5 ℃·min-1升温至150 ℃保持1 min，10 ℃·min-1升温至250 ℃，保持20 min。结果：1，8-桉叶素在0.307 8～3.078 mg·mL-1与峰面积呈良好线性关系，Y=364.287 47X+2.816 98(r=0.999 9)，平均加样回收率为99.14%(RSD=3.14%)。结论：本方法操作简便、灵敏准确，可用于大果木姜子的质量控制。

1，8-桉叶素；大果木姜子；气相色谱

苗药大果木姜子为樟科植物米槁CinnamomummigaoH.W.Li的干燥成熟果实[1]，味苦、辛，性温，能够散寒祛湿、行气止痛，临床用于治疗胸腹疼痛、胸闷腹胀、哮喘等[2]。大果木姜子是一些治疗冠心病、心绞痛、胃脘疼痛苗药制剂的主要原料[3]，另据研究发现其在治疗偏头痛方面具有广阔的应用前景。目前该药被收录在《贵州省中药材、民族药材质量标准》中，作为地方标准仅有薄层色谱鉴别项目[4]，为了建立准确、可靠的大果木姜子指标性成分的含量测定方法，提升药材质量标准，作者采用气相色谱法建立大果木姜子药材中指标性成分1，8-桉叶素的含量测定方法，并对不同采集时间、不同产地的药材进行了含量测定和质量比较。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent7890A气相色谱仪；Agilent7693自动进样器；氢火焰离子化检测器；氮氢空发生器(上海析友分析仪器有限公司)；DENVER电子分析天平(十万分之一，北京赛多利斯仪器系列有限公司)；KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。

1.2 试药

1，8-桉叶素对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号20120412，纯度>99%)；无水乙醇为分析纯。

大果木姜子16批，分别采集自贵州罗甸、册亨、贞丰、望谟及广西天峨等地，经贵阳中医学院江维克教授鉴定为樟科樟属植物米槁CinnamomummigaoH.W.Li的干燥果实。凭证标本保存于中国药材公司科技研发部。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱(30 m ×0.25 mm，1.4 μm)；载气：高纯氮气(N2)；流速：1.5 mL·min-1；进样量：1 μL；分流比：25∶1；进样口温度：200 ℃；升温程序：50 ℃保持5 min，5 ℃·min-1升温至150 ℃保持1 min，10 ℃·min-1升温至250 ℃，保持20 min；检测器温度：250 ℃。对照品溶液及供试品溶液色谱图如图1。

2.2 对照品溶液的制备

取1，8-桉叶素对照品适量，精密称定，加无水乙醇配制成6.156 mg·mL-1的溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取大果木姜子适量，粉碎过四号筛，取约1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入无水乙醇8 mL，称定重量，浸泡1 h，超声处理30 min，放置至室温，补足失重，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

A.1,8-桉叶素对照品 B.大果木姜子供试品图1 大果木姜子供试品及对照品GC图

2.4 线性关系考察

取1，8-桉叶素对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1 mL含6.156 mg的溶液，分别精密吸取1，8-桉叶素对照品储备液5.0，4.0，1.5，1.0，0.5 mL至10 mL量瓶中，分别加无水乙醇至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液按上述色谱条件进行分析，以对照品峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=364.287 47X+2.816 98(r=0.999 9)，结果表明，1，8-桉叶素在0.307 8～3.078 mg·mL-1与峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

取1，8-桉叶素对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，记录峰面积，经计算RSD=0.9%，表明本方法精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，12 h进样，测定1，8-桉叶素峰面积，结果RSD=0.5%，表明供试品溶液中1，8-桉叶素含量在12 h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取同一批大果木姜子样品6份，按供试品溶液的制备方法制备，按照上述色谱条件测定，结果样品中1，8-桉叶素平均含量为17.82 mg·g-1，RSD=1.2%，说明本法重复性良好。

2.8 回收率试验

取已知1，8-桉叶素含量的大果木姜子6份，每份0.5 g，精密称定，分别加入已知量对照品(8.244 mg)，按供试品溶液制备方法操作，按上述色谱条件进行分析，计算平均回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定

取不同产地、不同采收时间的大果木姜子样品，按供试品制备方法处理，按上述色谱条件进行含量测定，结果见表2。

表1 1，8-桉叶素加样回收率试验

表2 不同产地及采收时间大果木姜子中1，8-桉叶素含量测定

3 结论与讨论

1，8-桉叶素具有解热、消炎、镇痛等作用，与大果木姜子的临床功效相似，而且药材中含量较高[5]。文献报道以该药为主的中药制剂均以其中的1，8-桉叶素成分作为质量控制指标[6-7]，故本研究采用1，8-桉叶素作为大果木姜子质量控制的指标性成分。

目前，大果木姜子挥发油的提取方法主要有CO2超临界萃取、水蒸气蒸馏提取、乙醇超声提取。CO2超临界萃取对仪器设备要求较高，水蒸气蒸馏法耗时较长、需要高温加热，乙醇超声提取大果木姜子挥发油操作简单、提取效率高。有文献报道[8]，以正交试验结合面积归一化法考察大果木姜子挥发油的提取工艺，优选出最佳提取工艺为加8倍量溶剂、浸泡1 h、超声提取30 min。本研究采用上述提取方法，可以充分提取大果木姜子中的指标性成分。

文献报道采用气相色谱面积归一化法测定大果木姜子中1，8-桉叶素含量[8]，该方法要求所有组分都要出峰，且不同组分检测器响应不同，无法准确定量。本研究采用外标法建立含量测定方法，操作简单，可以准确定量。

前期采用HP-5毛细管色谱柱建立含量测定方法，此时1，8-桉叶素与其他成分色谱信号叠加，无法完全分离。经考察，DB-624毛细管柱能够有效分离1，8-桉叶素与挥发油中的其他成分，可以用于大果木姜子中1，8-桉叶素的定量分析。

实验结果表明，样品采集时间对1，8-桉叶素含量影响较大，成熟果实中1，8-桉叶素含量明显高于未成熟果实。由于大果木姜子主要以挥发油部位入药，储存年限对其质量影响较大，随着储存时间增加，1，8-桉叶素含量明显降低。故以大果木姜子入药宜选用当年10月新采的成熟果实，建议其1，8-桉叶素含量不低于10.00 mg·g-1，以确保药效。

通过前期实地考察，大果木姜子主要应用于贵州南部、西南部及广西北部的苗族、布依族聚集区，在主产地以外的药材市场普遍存在以香樟子、木姜子等作为大果木姜子销售的现象。经本方法检测，香樟子、木姜子等混用品种中均不含1，8-桉叶素，故该方法可以作为鉴别大果木姜子真伪的辅助方法。通过表2数据发现，相同采收时间不同采收地点的大果木姜子中1，8-桉叶素含量差异较大。以2012年10月采收的样品为例，1，8-桉叶素含量在15.51～20.90 mg·g-1，说明除采收时间外还有其他因素影响药材质量，有待进一步深入研究。

致谢：感谢样品采集和实验过程中贵阳中医学院周涛老师和实习生王梓宁的支持与帮助。

[1] 李锡文.中国樟科植物志资料[J].植物分类学报，1978，16(2)：90-92.

[2] 郑亚玉，邱德文，梁光义，等.贵州苗药大果木姜子的研究及产业化[J].世界科学技术-中医药现代化，2005，7(2)：112-114.

[3] 周涛，杨占南，江维克，等.民族药大果木姜子果实挥发油成分的变异及其规律[J].中国中药杂志，2010，35(7)：852-856.

[4] 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[S].贵阳：贵州科技出版社，2003：36.

[5] 张永萍，邱德文，郑亚玉，等.大果木姜子挥发油的GC-MS分析[J].中国医药学报，2003，18(2)：119-120.

[6] 刘宏伟，邱德文.苗药心胃止痛软胶囊质量标准的研究[J].湖南中医药大学学报，2007，8(27)：250-252.

[7] 李江，刘英波，邱德文.苗药大果木姜子油口服乳剂的质量标准研究[J].时珍国医国药，2008，19(5)：1143-1144.

[8] 张永萍，林亚平，邱德文，等.大果木姜子挥发油的提取工艺研究[J].中国中药杂志，2005，30(14)：1120-1122.

Determinationof1，8-cineoleintheMiaoEthnicHerbCinnamomummigaoH.W.LibyGasChromatography

DAI Wei，XIAO Su-ping，GUO Kai，WANG Ji-yong，ZHAO Run-huai*

(ChinaNationalCorp.ofTraditional&HerbalMedicine，Beijing100195，China)

Objective：To establish a method of GC for the content determination of 1，8-cineole in the miao ethnic herbCinnamomummigaoH.W.Li.Methods：The sample was separated on an Agilent DB-624(30 m×0.25 mm，1.4 μm)fused silica capillary column with helium as the carrier gas.The inlet temperature was 200 ℃ and the FID temperature was 250 ℃.Temperature programming was started at 50 ℃，holding for 5min，then increased to 150 ℃ at a rate of 5 ℃·min-1.After holding for 1min，increased to 250 ℃ at a rate of 10 ℃·min-1，holding for 20 min.Results：The calibration curve of 1，8-cineole was linear in the range of 0.307 8-3.078 mg·mL-1，r=0.999 9.The average recovery of 1，8-cineole was 99.14%(RSD=3.14%).Conclusion：The method was simple，sensitive，accurate，and could be used for the quality control of Fructus Cinnamomi.

1，8-cineole；CinnamomummigaoH.W.Li；Fructus Cinnamomi；GC

2013-02-17)

国家重大新药创制科技重大专项(2011ZX09102-003-05)

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赵润怀，E-mail：zhaorunhuai@gmail.com