加味天麻胶囊质量标准研究

温立义，温博，董慧，姜泽*

(1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.吉林省职业病防治院，吉林 长春 130000；3.中国人民解放军装甲兵技术学院 门诊部，吉林 长春 130000)

加味天麻胶囊质量标准研究

温立义1，温博2，董慧3，姜泽1*

(1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.吉林省职业病防治院，吉林 长春 130000；3.中国人民解放军装甲兵技术学院 门诊部，吉林 长春 130000)

目的：完善加味天麻胶囊的质量标准。方法：采用TLC法对方中天麻、羌活、当归进行了鉴别；采用HPLC测定了天麻中天麻素的含量。结果：样品TLC色谱中，天麻、羌活、当归的鉴别斑点清晰，重现性好；含量测定中天麻素在0.01～0.296 μg呈良好线性关系(r=1.000 0)，天麻素的平均回收率为98.18%，RSD=1.02%(n=6)。结论：实验方法结果准确，操作简便，为该制剂的质量控制和标准提升提供了科学依据。

加味天麻胶囊；TLC；HPLC；质量标准

加味天麻胶囊是由天麻、玄参、羌活、木瓜、独活、地黄、牛膝、穿山龙、杜仲(盐炒)、千年健、当归、鹿骨(制)、白鲜皮、地骨皮、附子(制)15味中药组成，收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第二册，具有强筋骨，祛风湿，舒筋通络，活血止痛功能。用于中风经络引起的风湿痹痛，肢体拘挛，手足麻木，腰腿酸痛等症[1]。为有效地控制其内在质量，作者以天麻素作为指标性成分，采用反相高效液相色谱法测定加味天麻胶囊中天麻素的含量。并对天麻、羌活、当归进行了薄层色谱鉴别。

1 仪器与试药

Agilent 1200 series高效液相色谱仪，硅胶G薄层板(青岛海洋化工分厂，批号：20090903)。

试剂均为色谱纯及分析纯；天麻素对照品(批号：0807-200205，供含量测定用)、羌活对照药材(批号120935-200405，供鉴别用)、当归对照药材(批号120927-200613，供鉴别用)，购自中国食品药品检定研究院；水为经MILLIPOR纯水器所得纯化水。

加味天麻胶囊共收集了3个企业9个批次的样品，分别为通化东宝药业股份有限公司(批号：110902，110904，110302)；葵花药业集团(佳木斯)有限公司(批号：201108002，201109003，201109001)；清华德人西安幸福制药有限公司(批号：110603，110604，110201)，规格均为0.25 g/粒。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 天麻的鉴别 取本品20粒内容物，研细，加乙醇50 mL，置水浴上加热回流2 h，滤过，取滤液蒸干，加水2 mL溶解，置已处理好的D101型大孔吸附树脂柱(内径1 cm，填充高度12 cm)上，用10 mL水洗脱(流速：0.5 mL·min-1)，弃去洗脱液，再用10%乙醇60 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液；另取天麻素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μL，对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(8∶3.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。

1～3.供试品(批号：110902，110904，110302) 4.天麻素对照品 5.缺天麻阴性样品图1 天麻薄层色谱图

2.1.2 羌活的定性鉴别 取本品10粒内容物，研细，置回流瓶中，加乙醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至0.5 mL，作为供试品溶液。另取羌活对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述2种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙醚-醋酸(10∶10∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视，供试品色谱中，在与羌活对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图2。

1～3.供试品(批号：110902，110904，110302) 4.羌活对照药材 5.缺羌活的阴性样品图2 羌活薄层色谱图(紫外254 nm)

2.1.3 当归的定性鉴别 取本品10粒，研细，加乙醚20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点[2]。见图3。

1～3.供试品(批号：110902，110904，110302) 4.当归对照药材 5.缺当归阴性样品图3 当归薄层色谱图(紫外365 nm)

2.2 天麻含量测定[3]

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在80 ℃减压干燥1 h的天麻素对照品适量，加流动相制成每1 mL含0.02 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20粒内容物，研细，取2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 mL，称定重量，加热回流3 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置水浴上蒸干，用流动相溶解，转移至25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按照处方量制得不含天麻的阴性对照溶液，依2.2.2方法制备溶液。

2.2.4 系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01%磷酸溶液(2∶98)为流动相；检测波长为220 nm[4]；理论板数按天麻素峰计算应不低于5 000。精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL[5]，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，色谱图见图4～6。

图4 天麻素对照品HPLC图

图5 加味天麻胶囊样品HPLC图(批号：110904)

图6 缺天麻的阴性样品HPLC图

2.2.5 标准曲线制备 精密称取天麻素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.0147 8 mg的溶液，分别精密吸取1，5，10，15，20 μL测定，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程Y=2 570.5X+1.100 2，r=1.000 0。结果表明天麻素进样量在0.01～0.296 μg呈线性关系，符合外标法定量测定的要求。

2.2.6 精密度试验 对同一份供试品溶液(批号：110904)，按2.2.4的色谱条件，连续测定6次，结果天麻素的平均峰面积为533.756，RSD=1.53%，结果表明仪器的精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 对同一份供试品溶液(批号：110904)，按正文拟定的色谱条件，每隔2 h测定1次，共考察32 h，测定了5次，结果5次测定天麻素平均峰面积为537.481，RSD=1.42%(n=5)。试验表明，供试品溶液在32 h内稳定。

2.2.8 重复性试验 取加味天麻胶囊(批号：110904)样品，按2.2.2方法制备供试品溶液，共6份，在2.2.4色谱条件下测定，结果天麻素平均含量为0.305 mg/粒，RSD=0.34%，表明本法的重复性良好。

2.2.9 回收率试验 取加味天麻胶囊(批号：110904，天麻素含量为1.219 6 mg·g-1)1.0 g，共6份，精密称定，置已分别精密加入对照品溶液(0.251 6 mg·mL-1)5 mL(挥干溶剂)的具塞锥形瓶中，每份分别精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流3 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10 mL，蒸干，用流动相溶解并稀释至25 mL容量瓶中，制成6份供试品溶液。在2.2.4色谱条件下测定，计算回收率，结果符合定量分析的要求，见表1。

表1 天麻素回收率试验

2.2.10 样品含量测定 取不同生产批号的样品，分别按2.2.2方法制备溶液，在2.2.4色谱条件下测定9批样品，结果见表2。

表2 加味天麻胶囊天麻素含量测定结果(n=2) mg/粒

3 讨论

3.1 薄层鉴别

分别对方中天麻、羌活、当归在21 ℃、相对湿度(RH)47%，4℃、RH 27%，30℃、RH 72%条件下进行薄层色谱鉴别及方法学验证，结果表明阴性对照无干扰，耐用性良好。

3.2 含量测定

比较稀乙醇回流提取3 h、甲醇超声提取30 min，甲醇回流提取3 h，结果表明超声提取方法含量较低，稀乙醇回流提取与甲醇回流提取的含量无明显差异，且稀乙醇回流提取的杂质较多，故选择用甲醇回流提取3 h为本法提取方法。对色谱柱Agilent-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Kromasil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)和Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)进行了比较，3种色谱柱均达到方法系统适用性的要求，证明该方法耐用性良好。

实验所建立的方法简便可行，重现性好，对控制和评价加味天麻胶囊产品质量提供了依据。

[1] 国家药典委员会.卫生部药品标准·中药成方制剂[S].第二册.1990：87.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：54.

[3] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：124.

[4] 赵慧，肖燕.天麻胶囊的质量标准研究[J].中国医药指南，2012(24)：59-60.

[5] 周立，贾俊，王凌，等.加味天麻胶囊中天麻素的含量测定[J].贵阳中医学院学报，2009(5)：79-80.

QualityStandardStudyofJiaweitianmaCapsule

WEN Li-yi1，WEN Bo2，DONG Hui3，JIANG Ze1*

(1.JilinInstituteforFood&DrugControl，Changchun130033，China；2.OccupationdiseasepreventionandcontrolcenterofJilinProvince，Changchun130061，China；3.ArmourTechniqueInstituteofPLA，Changchun130000,China)

Objective：Perfecting the quality standard of Jiaweitianma capsule.Methods：Gastrodiae Rhizoma，Notopterygii Radix et Rhizoma，and Angelica Radix et Rhizoma were identified by TLC method.The content of gastrodin in Gastrodiae Rhizoma was determined by HPLC method.Results：In TLC chromatography，the spots of Gastrodiae Rhizoma，Notopterygii Radix et Rhizoma，andAngelica Radix et Rhizoma were clear and had a good reproducibility.In the content determination experiments，gastrodin had a good linear relationship in 0.01-0.296 μg (r=1.000 0).The average recovery of gastrodin is 98.18%，RSD=1.02%(n=6).Conclusion：The method is accurate and convenient，which provide a scientific basis for the quality control and standard enhancing of Jiaweitianma capsule.

Jiaweitianma capsule；TLC；HPLC；Quality standard

2013-01-21)

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姜泽，E-mail：jiangze119@hotmail.com