胡芦巴总皂苷降低非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平及肝内脂质沉积

张 瑜 张䶮之 毛新民

本实验旨在观察胡芦巴总皂苷（Trigonella foenum greacum，L Saponin，TFGs）对非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平的影响。

材料与方法

一、动物与试剂 健康Wister大鼠，雌雄各半，体重180～220g，由新疆医科大学实验动物中心提供。TGFs干燥粉末（昌吉卫生学校药学组提供），易善复（北京安万特制药有限公司提供），胆固醇（天津市光复精细化工研究所提供），猪胆酸（北京奥博星生物技术责任有限公司提供），丙二醇（天津市化学试剂三厂提供），吐温-80（上海山浦化工有限公司提供）。

二、非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立[1～7]将大鼠按体重和性别均衡地随机分为6组，即盐水组（10只）、模型组（10只）、易善复组（10只）和小、中、大剂量TFGs组（各10只）。易善复治疗组大鼠给予易善复（142.5 mg.kg-1.d-1）灌胃，TFGs组大鼠给予不同剂量的 TFGs（60mg.kg-1.d-1、90mg.kg-1.d-1、120mg.kg-1.d-1）灌胃。盐水组大鼠给予生理盐水15ml.kg-1灌胃，其余各组大鼠给予高脂乳剂[8，9]（脂肪乳成分：每100ml脂肪乳中含10g胆固醇，30g猪油，3g胆酸，10ml吐温-80，20ml丙二醇，蒸馏水加至 100ml）15ml.kg-1灌胃，每日下午一次，连续70天。自第71天起，对盐水组和模型组大鼠在继续每天下午给予高脂乳剂的同时，每天上午给予生理盐水15ml.kg-1.d-1灌胃，易善复组大鼠给予易善复（142.5 mg.kg-1.d-1）灌胃，小、中、大剂量TGFs组给予胡芦巴总皂苷60mg.kg-1.d-1、90mg.kg-1.d-1、120mg.kg-1.d-1灌胃，持续 35天。实验周期共105天。

三、肝指数测定 在末次给药后，动物禁食（不禁水）12小时。在称体重后处死动物，打开腹腔，取出完整肝脏，用生理盐水冲洗干净，随后称重，以肝脏重量（g）/大鼠体质量（g）作为肝指数（g/g）。

四、血清和肝匀浆脂质测定 采用酶比色法检测（上海科华生物工程股份有限公司）。

五、肝组织病理学检查 常规进行。

六、统计学处理 采用SPSS15.0统计软件，计量资料以（±s）表示，各组间均数的比较采用方差分析，检验水准为α＝0.05。

结果

一、胡芦巴总皂苷对大鼠肝脂肪变的影响 肉眼观，模型组动物肝脏体积增大，颜色浅黄，切面油腻感。在光镜下，可见肝细胞内出现大小、数量不等的类圆形脂滴，呈灶状或片状分布，占50%～60%，肝小叶中央区肝细胞脂肪变性严重，出现肝细胞点状坏死，有嗜中性粒细胞浸润（图1、2）。

图1 模型组大鼠肝组织病理学表现（HE，250×）

图2 大剂量TFGs处理组大鼠肝组织病理学表现（HE，250×）

二、胡芦巴总皂苷对非酒精性脂肪肝大鼠肝指数及肝匀浆脂质的影响 见表1。

表1 TFGs对非酒精性脂肪肝大鼠肝指数及肝匀浆脂质（±s）的影响

表1 TFGs对非酒精性脂肪肝大鼠肝指数及肝匀浆脂质（±s）的影响

与盐水组比，①P<0.01；与模型组比，②P<0.01

?

三、TFGs对非酒精性脂肪肝大鼠血脂含量的影响 见表2。

表2 TFGs对非酒精性脂肪肝大鼠血脂（±s）的影响

表2 TFGs对非酒精性脂肪肝大鼠血脂（±s）的影响

与盐水组比，①P<0.01；与模型组比，②P<0.05

?

讨论

非酒精性脂肪肝的发病机制复杂，至今尚缺乏充分解释其所有临床现象的理想学说，目前的研究认为主要与脂肪代谢异常、胰岛素抵抗、脂肪异位、脂肪激素和脂肪因子、游离脂肪酸、线粒体功能障碍、氧应激、肠道菌群紊乱和遗传等因素有关[10，11]。其中脂肪代谢异常与饮食诱发的非酒精性脂肪肝密切相关。肝合成游离脂肪酸增加或由碳水化合物合成TG，脂肪酸在肝线粒体β氧化减少，极低密度脂蛋白合成和分泌减少均可破坏脂肪组织及脂肪细胞与肝细胞之间脂肪代谢的动力循环平衡[12]，使脂肪在肝脏中异常沉积，而血脂与脂肪肝的关系密切已经成为共识。血脂升高以TG升高为主[13～15]，而TG升高与脂肪肝的程度无明确的线性关系。本实验采用的高脂乳剂灌胃制造大鼠非酒精性脂肪肝动物模型，说明与饮食诱发的非酒精性脂肪肝关系密切。

模型组大鼠肝细胞内出现大小和数量不等的类圆形脂滴，呈灶状或片状分布，肝小叶中央区肝细胞脂肪变性明显，出现肝细胞点状坏死，有嗜中性粒细胞浸润，说明建立的非酒精性脂肪肝模型成功。我们还直接检测了大鼠肝组织脂质含量，发现模型组大鼠肝组织TC和TG含量显著高于正常组大鼠，血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量均明显高于正常组大鼠，提示该模型为伴有高脂血症性非酒精性脂肪肝动物模型。

TFGs对非酒精性脂肪肝大鼠的治疗作用表明，TFGs能显著降低模型组大鼠肝指数，且随剂量的增加有剂量依赖的趋势，说明TFGs能减轻肝肿大。TFGs能显著降低模型组大鼠血清 TC、HDL-C、LDL-C含量，同时病理结果发现TFGs可使模型组肝细胞脂肪变在程度和范围上均较模型组大鼠明显减轻，且肝细胞水肿亦减轻，说明TFGs主要通过改善机体脂质代谢紊乱，改善大鼠肝脏中脂质沉积，但TFGs不能降低血清TG，原因不清。

本模型中存在高密度脂蛋白升高的问题，可从以下两个方面考虑：①据许敏等报道，高密度脂蛋白可分为5种亚型，即 HDL-2a、HDL-2b、HDL-3a、HDL-3b、HDL-3c[17]。而徐燕华等报道，高脂血症患者血清中前 β-1HDL、前 β-2HDL、HDL-3c、HDL-3a、HDL-3b含量显著增加，而HDL-2a、HDL-2b含量显著减少。高脂血症患者血清TG含量与前β-1HDL、前β-2HDL、HDL-3a、HDL-3b水平呈正相关，而与HDL-2a、HDL-2b水平呈负相关；TC含量与前β-1HDL、HDL-3b水平呈正相关，而与HDL-2b水平呈负相关；LDLC含量与HDL-3b水平呈正相关[15]。高脂乳剂造成大鼠血清TC、TG、LDLC含量显著增加，会引起 β-1HDL、前 β-2HDL、HDL-3a、尤其 HDL-3b的增加，使总胆固醇增加。而可能大鼠血清中这些HDL亚型的比例与人不同，HDL-2a、HDL-2b比例偏低，两者的减少量不能抵消其它HDL亚型的增加量。②血清中TC含量的升高，能上调高密度脂蛋白受体，使肝细胞膜高密度脂蛋白受体活性升高[18]，从而反馈调节使血清高密度脂蛋白升高，以便更多地把体内胆固醇转运至肝脏代谢。

[1]万燕萍，胡冰，秦威，等.单纯性肥胖儿童高脂血症与脂肪肝的关系. 中华儿科杂志，1997，11（35）:577-578.

[2]史江华，李多伟，逄敏杰，等.胡芦巴研究新进展.西北药学杂志，2007，22（3）:163-155.

[3]陈君，丁万隆，陈霞，等.不同种源胡芦巴生长发育特性初步观察. 中国中药杂志，2001，26（4）:237-240.

[4]沃兴德，崔小强，唐利华，等.姜黄素对食饵性高脂血症大鼠血浆脂蛋白代谢相关酶活性的影响.中国动脉硬化杂志，2003，11（3）:223-227.

[5]张馨木，曲绍春，睢大员，等.人参Rb组皂苷对高脂血症大鼠血脂代谢的影响及其抗氧化作用.中国中药杂志，2004，29（11）:1084-1089.

[6]张晓刚.肝脂酶与脂蛋白代谢.国外医学:临床生物化学与检验学分册，2002，23（1）:48-49.

[7]刘明，董超仁，苏静怡.一种简易实用的大鼠高脂血症模型.中国药理学通报，1989，5（2）：119－120.

[8]阎明，孟繁立，董春霞，等.非诺贝特和辛伐他汀对酒精性脂肪肝血清游离脂肪肝谱的影响.中国药理学报，2003，19（11）：1290－1294.

[9]张瑜，李琳琳，张嫣之，等.非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立.新疆中医药，2007，25（2）：7-9.

[10]Chen J，Song W，Redinger R.Effects of dietary cholesterol production of lipids and lipoproteins in isolated hamster liver.Hepatology，1996，24（2）:424-431.

[11]范建高，曾民德，王国良，等.脂肪肝的发病机制.世界华人消化杂志，1999，7（1）：75－76.

[12]Bachman AL，Dubin MD，Moukarzel AA.Choline deficiency，a cause of hepatic steatosis during parenteral nutrition that can be reverse with intravenous choline supplementation，Hepatology，1995，22:1399-1405.

[13]王妍，熊浩伟，李婷，等.民航非酒精性脂肪肝飞行员血清瘦素、血糖和血脂变化的研究.中华航空航天医学杂志，2011，22（4）：270-273.

[14]谢霞，梁圣彬，李世存，等.脂肪肝超声诊断与血脂、血糖和肥胖的相关性分析. 第四军医大学学报，2007，28（4）：331-332.

[15]周磊，范茂丹，陆鸣.脂肪肝与血脂参数的相关性分析.中国疗养医学，2011，20（3）：214-215.

[16]许敏，刘秉文.人血浆高密度脂蛋白的不均一性.国外医临床生物化学与检验分册，1999，20（1）:1-4.

[17]徐燕华，傅明德.高脂血症患者血清HDL亚类的组成.四川大学学报（医学版）2003，34（2）:238－241.

[18]方定志，刘秉文.高胆固醇饲养对家兔肝细胞膜高密度脂蛋白受体的影响. 中国动脉硬化杂志，2000，8（2）：140-142.