HPLC法测定蒙成药寒水石-21味丸中的胡椒碱的含量

2013-09-11张凤有王丽娟

中国民族医药杂志 2013年4期

张凤有王丽娟

（内蒙古锡盟药品检验所，内蒙古锡林浩特 026000）

蒙成药寒水石-21是由寒水石（凉制）、石榴、益智、荜茇、土木香、芫荽果、香青兰、蓝盆花、酸梨干、沙棘、栀子、瞿麦、柯子、连翘、麦冬、木香、牛黄、地丁、降香、五灵脂、木鳖子（制）组成，疏肝和胃，制酸消胀。用于肝胃气滞、痞闷不舒、噎膈反胃、恶心吐酸、消化不良等症[1]。为有效控制其成品质量，本文建立起对处方中荜茇中成份胡椒碱作为定量分析的指标成份[2]。高效液相色谱法具有灵敏、准确、分离度好等优点，实验表明该方法操作简便，专属性强，重现性好，可作为寒水石-21中的胡椒碱的含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器:岛津LC-2010A HT型高效液相色谱仪，BP121-S型电子天平（d=0.1mg），BP211-D型电子天平(d=0.01mg)，AS20500A型超声振荡器,岛津 UV-1700型紫外分光光度计。

1.2 试剂与试药:胡椒碱对照品 (批号:0775-200203)中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯;水为高纯水;其它试剂均为分析纯。

2 色谱条件

色谱柱:色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶,本实验研究采用kromasiL-C18柱（250×4.6mm，5μm），柱号；流动相:甲醇 -水(68:32)为流动相；流速:1mL.min-1；柱温:40℃,检测波长：343nm，进样量均为μL。

3 方法和结果

3.1 对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品适量，加无水乙醇制成每1mL含20μg的溶液,即得。

3.2 供试品溶液的制备：取本品20粒，精密称定，研细，精密称取本品细粉约1.8g,置50mL棕色量瓶中,加入无水乙醇mL,超声处理(功率W,频率KHz)30min,放冷,加无水乙醇至刻度，摇匀,滤过,精密量取续滤液10mL，置mL棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。

3.3 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。。

3.4 专属性考察：阴性对照试验:按对照品、供试品制备方法制备供试品溶液和对照品溶液,另取按处方比例并以相同工艺制备的缺荜茇的阴性对照,按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液,分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10μL,分别注入液相色谱仪,测得结果为阴性对照色谱图中,在与胡椒碱对照品以及供试品色谱相应的保留时间处无色谱峰出现。表明处方中其它组份对胡椒碱测定无干扰。色谱图见图1、2、3。

图1 对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 阴性对照品色谱图

3.5 线性关系考察：精密称取胡椒碱对照品11.42mg,置100mL量瓶中,加无水乙醇使溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取上述对照品溶液各.5、1.0、2.0、2.5、3.0、5.0 mL分别置10mL量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,各取μL进样,按上述色谱条件测定,以峰面积对进样量进行回归分析,结果胡椒碱在0.0571～0.5710μg范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=55692x-2042，r=0.9993。

3.6 稳定性实验：取同一份供试品溶液,分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h、进样测定峰面积,结果 RSD=0.55%，表明胡椒碱在24h内的峰面积积分值基本稳定不变。

3.7 精密度试验:取同一批号(批号120616022)供试品6份,各精密称取约1.80g,分别按含量测定项下方法操作制得供试品溶液；另精密称取胡椒碱对照品11.42mg依法制成每1mL含胡椒碱22.84μg的溶液作为对照品溶液。分别精密吸取上述溶液各10μL注入色谱仪测定每份供试品含量,结果平均含量=0.3285mg/丸，RSD=1.6%。

3.8 加样回收试验:取同一批供试品（批号120616022）9份,各约0.90g,精密称定,按对照品、供试品制备方法操作,其中3份分别精密加入胡椒碱对照品溶液(0.6852mg·mL-1)1.0mL,另3份分别精密加入上述胡椒碱对照品溶液2.0mL,其余3份分别精密加入上述胡椒碱对照品溶液3.0mL,分别按含量测定法项下方法操作,测定每份含量,计算回收率,结果见表1。3.9 样品测定：取样品批(批号,120526003,120802020)按对照品、供试品制备方法及测定法项下的方法处理并测定,3批样品的测定结果见表2。