黄花夹竹桃中强心苷类成分的UPLC-QTOF/MS快速鉴定

文 屏 郭巧技 黄晓炜 王建文 王春华

（1．深圳市药品检验所，广 东 深 圳 518057；2．天津中医药大学， 天 津 300457）

黄花夹竹桃[Thevetia peruviana(Pers.)K.Schum.]别名夹竹桃、台湾柳、酒杯花、树都拉[1]，是夹竹桃科(Apocynaceae)黄花夹竹桃属植物。主产于广西、广东、福建、台湾、云南等地[2]。本品味辛、苦，性温；有大毒。归心经。强心利尿，适用于多种心脏病引起的心力衰竭，阵发性室上性心动过速和阵发性心房纤颤。种子、果仁、皮、枝、叶中均含有多种强心苷。近年来主要研究黄花夹竹桃中强心苷类化合物，主要有黄夹甙甲、乙(ThevetinA、B)均为三糖甙，其水解产物单糖甙有黄夹次苷甲(Peruvoside)、黄夹次甙乙(Neriifolin)、黄夹次甙丙(Ruvoside)、单乙酰黄夹次甙乙 (Cerberin)、黄夹次甙丁(Perusitin)[3,4]。但近几年类似报道逐渐减少，由于目前我国治疗心力衰竭的主要强心药均依赖进口，为了充分利用祖国中草药资源，逐步减少或取消强心药的进口，鉴于黄花夹竹桃在我国各地有广泛的分布[5]，且监控其他市售的强心中药中混入黄花夹竹桃，因此，本实验应用超高效液相色谱-高分辨质谱联用方法（UPLC-QTOF/MS）对黄花夹竹桃枝中的强心苷类成分进行速鉴定，为黄花夹竹桃的综合利用以及含有黄花夹竹桃的复杂混合样品的快速分析提供一种有效的方法。

1 仪器与试药

液相色谱-质谱联用仪（美国Waters AQUITYUPLC/Q-TOF micro），超声波清洗器（上海之信仪器有限公司/DL-360A），旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂/RE52C），电热恒温水浴锅（上海博迅实业有限公司医疗设备厂/HHS型），循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司公司/SHZ-D(III)）。柱色谱填料：D101大孔吸附树脂（安徽三星树脂公司）。

黄花夹竹桃 [Thevetia peruviana(Pers.)K.Schum.]采于广州华南植物园，经本单位中药室鉴定为正品药材；甲醇（色谱纯）购于美国Fisher公司，水为娃哈哈纯净水，甲醇（分析纯）、95%乙醇及石油醚均购于天津市大茂化学试剂厂。

2 方法与结果

2.1 总强心苷的提取及样品制备：黄花夹竹桃枝（500 g）烘干粉碎后，用甲醇冷浸h，回流浓缩后得粗提取物45 g，将粗提物混悬于水中，用等体积石油醚脱脂。水层除有机溶剂后上D101大孔吸附树脂柱（Φ.0×29.0 cm），依次用水、30%、50%、70%和%乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱液，回收溶剂，冷冻干燥，得到总强心苷成分15 g。取总强心苷20 mg，精密称定，用色谱甲醇定容至100 mL，配成样品浓度为5 mg/mL，待测。

2.2 测试条件：色谱柱：Thermo Quest C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），流动相 A：0.1%甲酸水溶液，流动相 B：乙腈，线性梯度洗脱程序：0~15 min，10%B→60%B，15~16 min，60%B→100%B； 流 速 ：0.3 ml·min-1，柱温：40℃，检测波长：220 nm，进样量：1μL。

正离子模式检测进行一级高分辨质谱分析。质谱检测器参数：ESI源，雾化鞘气（N2）流速：80 a.u，雾化辅助其（N2）流速：15 a.u，毛细管温度：350℃，源电压：3.5 KV，碰撞气体：氦气，毛细管电压：-5 V，离子扫描范围：100～1300(m/z)，所有数据采集和处理采用 Mass-Lynx.1软件。

2.3 总强心苷类成分的结构鉴定：采用UPLC-QTOF/MS所给出的分子质量，结合文献调研分别推测出了6个主要色谱峰的化合物结构，分别为黄夹苷B、黄夹次苷D、黄花夹竹桃次苷甲、黄夹臭蚁醛苷、黄花夹竹桃次苷乙以及单乙酰次苷乙（表1），同时还测定了这种强心苷类成分的相对含量分别为.02%、7.5%、6.8%、8.9%、16.2%和14.1%，占总峰面积的54.52%。

图1 黄花夹竹桃中强心苷类成分的紫外液相谱图及总离子流图谱

表1 鉴定的主要强心苷类化合物

3 讨论

超高效液相色谱(UPLC)，与传统的HPLC技术相比，提供了更高的效率，因而具有更强的分离能力，大幅度地改善了液相色谱的分离度、样品通量和灵敏度。高效液相色谱与串联质谱联用技术是近年来发展起来的一种先进分析方法，与传统的高效液相色谱与质谱联用技术相比，具有更高分离度、更高速度、更高灵敏度的优点。

本课题是在前人研究的基础上，首次采用超高效液相-高分辨质谱联用仪技术，针对黄花夹竹桃中强心苷类成分进行了快速分析鉴定，经分析其中的1~6号色谱峰分别为黄夹苷B、黄夹次苷D、黄花夹竹桃次苷甲、黄夹臭蚁醛苷、黄花夹竹桃次苷乙以及单乙酰次苷乙，这6种强心苷类成分的峰面积占总峰面积的54.52%，其中黄花夹竹桃次苷乙和单乙酰次苷乙更是黄花夹竹桃中的主含成分，它们可能就是黄花夹竹桃发挥强心作用的重要物质。本研究为黄花夹竹桃的进一步研究开发和质量控制提供了更加充分的依据。

[1]杨仓良．毒药本草[M]．北京∶中国中医药出版社．1993．

[2]江苏新医学院．中药大辞典[M]．上海∶上海科技出版社,1986．

[3]孙南君．黄花夹竹桃中强心甙的研究I．Thevetin A,thevetin B,peruvoside，neriifolin 的提取和分离[J]．药学学报,1962,9(6)：359-369．

[4]郎惠英,孙南君．黄花夹竹桃中强心甙的研究 II．cerbe rin,ruvoside和新强心甙perusitin的分离和鉴定[J]．药学学报,1964,11(7)：464-472．

[5]梁金照,陈镇辉,方尚杰,等．黄花夹竹桃和夹竹桃对21例心力衰竭患者的治疗观察[J]．海峡药学,1995,7(2)：30-31．