HPLC法测定蒙药阿那日十四味散中胡椒碱的含量

玉 华

（内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028043）

阿那日十四味散，别名阿那日-14[1]，是蒙医临床常用散剂。由石榴、寒水石（热制）、荜茇、木香、白豆蔻、肉豆蔻、红花、栀子、干姜、草果、肉桂、诃子、芫荽果、光明盐等14味药材组成；具有健脾消食，温中散寒之功能；主要用于脾胃寒湿，胸肋胀满，恶呃痞满，消化不良等症。临床疗效好，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》（1998年版）[1]。其药品标准草案仍缺含量测定项，为补充药品标准草案，对蒙药阿那日十四味散进行含量测定研究，为该药的进一步研究提供试验依据。

1 材 料

1.1 仪器：LC-10ATvp高效液相色谱仪 (日本岛津)，SPO-10Avp检测器(日本岛津)，N3000色谱工作站（浙江大学）；BT25S分析电子天平（d＝0.01mg；Max＝21g，北京）；MiLLi-Q Academic超纯水系统（法国）；KQ-100型超声波清洗器（超声频率20kHz，功率w昆山）。

1.2 试药：蒙药阿那日十四味散分别由内蒙古蒙药股份有限公司、内蒙古库伦蒙药厂、阜新蒙药股份有限公司提供，批号分别为、2120516、120310；胡椒碱对照品（批号-9702），由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯；水为高纯水；所用试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件[2]：色谱柱：DiamonsiLC18（250mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇 -水（77:23）；检测波长：343 nm；流速：0.8mL·min-1；柱温：室温；进样量：10μL。在该色谱条件下，样品中胡椒碱可达基线分离，其它成分对测定无干扰，理论板数（n）按胡椒碱峰计高于1。

2.2 试验溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品10.4mg，置10mL棕色量瓶中，加入无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取上液1.0mL,置50mL棕色量瓶中，加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得（每mL中含胡椒碱.8μg）。

2.2.2 供试品溶液的制备：取阿那日十四味散约0.75g，精密称定，置 mL棕色量瓶中，精密加入无水乙醇mL，密塞，超声处理min，放冷，加入无水乙醇稀释至刻度，过滤，取续滤液，即得。

2.2.3 缺荜茇阴性对照品溶液的制备：取缺荜茇阴性对照样品约0.6g，精密称定，置50 mL棕色量瓶中，照上述2.2.2项下方法制备，即得。

2.3 线性关系及其工作范围的考察：精密吸取胡椒碱对照品溶液.5、5.0、7.5、10.0、12.5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积（A）。并以峰面积（Y）对胡椒碱的进样量（X）进行线性回归，得回归方程：Y=290X-206，r=0.999。结果表明，胡椒碱对照品进样量在0.052μg～0.26μg范围内，与峰面积具有良好的线性关系。

2.4 精密度试验：精密吸取同一份供试品溶液10μL，在上述色谱条件下依法重复进样6次，记录色谱图，测定其峰面积积分值。结果其RSD为1.90%，表明精密度良好。

2.5 稳定性试验：同一份供试品溶液，分别于、2、4、6、8、10h，精密吸取μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积积分值。结果其RSD为0.90%，表明供试品溶液在10h内测定稳定性良好。

2.6 重复性试验：称取样品约.75g，共份，精密称定，照上述2.2.2项下方法制得供试品溶液6份，按含量测定方法，分别精密吸取μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积。结果RSD为1.78%。表明该含量测定方法具有良好的重复性。

2.7 回收率试验：取已知含量的样品约0.40g，计6份，精密称定，分别加入一定量的胡椒碱对照品贮备液，照上述2.2.2项下方法制得供试品溶液后进样测定峰面积，并计算回收率。结果（见表），胡椒碱平均回收率为99.77%、RSD为.50%。

表1 回收率试验结果

2.8 样品测定：照高效液相色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI D）测定。精密吸取对照品溶液(每1mL中含胡椒碱0.0208mg)与供试品溶液各μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积值，计算胡椒碱(C17H19NO3)含量。结果见表2。

3 讨论

3.1 检测波长的选择，将胡椒碱对照品溶液在200～400nm波长范围内进行光谱扫描。结果在343nm处有最大吸收，经HPLC法对阿那日十四味散样品进行分析，在343nm处无干扰，故选择并确定此波长为检测波长。

表2 阿那日十四味散中胡椒碱的含量（n=6）

3.2 在本试验所确定的色谱条件下，理论板数按胡椒碱峰计算高于；并且胡椒碱基线分离（R>1.5）；T（0.95～1.05）。

3.3 本试验用无水乙醇提取蒙药阿那日十四味散，能使样品中的胡椒碱得到良好的分离。此方法简便、快捷、准确、重复性好，可用于该药中胡椒碱的含量测定，也能够定量控制该制剂。

[1]中华人民共和国卫生部．中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册[S].北京:1998．116．

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:2010:219．