乌骨藤脂肪酸组成成分的GC／MS分析

2013-09-07王晓杰王维彬张佳琦

食品与机械 2013年3期

危晴王晓杰王维彬张佳琦陈亮

（1.北京电子科技职业学院，北京 100029；2.北京化工大学生命科学与技术学院，北京 100029）

乌骨藤又名通光散、通光藤，是萝藦科牛奶菜属植物通光藤（Marsdenia tenacissima （Roxb）Wight et Am.）的干燥藤茎［1］，主要分布在云南、贵州、广东、广西等地，含酚酸类、甾体皂苷类、多糖类、生物碱类等有效成分［2－5］。研究［6－8］表明乌骨藤具有清热解毒、止咳平喘、消炎镇痛、抗肿瘤、抗病毒、调节免疫、保肝利尿等作用，已制成注射剂和片剂等多种剂型应用于临床。张慧［7］、赵陆华等［9］均对乌骨藤的脂溶性成分进行了研究，结果表明乌骨藤脂溶性成分中含有脂肪酸、甾类、醇类、角鲨烯等主要成分，其中脂肪酸中的不饱和脂肪酸具有抗肿瘤的活性成分，脂溶性成分中的角鲨烯也具有抑制肿瘤生长的作用。目前脂肪酸的提取方法主要有超声波辅助提取法［10，11］、超临界提取法［12］、索氏提取法［13］。李双石等［14］采用超临界萃取乌骨藤挥发油的主要成分为二十四烷、油酸、油酸乙酯、二十八烷。王晓杰等［15］采用顶空固相微萃取乌骨藤挥发油，采用干法前处理得到的主要成分为1－氯－4－［（4－硝基苯）磺酰基］苯、α－蒎烯、正丁醇、乙酸乙酯，采用湿法前处理得到的主要成分为1－辛烯－3－醇、苏合香醇、反氧化芳樟醇、苯乙酮。以上方法繁琐且对仪器的要求较高。本试验采用水浴回流提取乌骨藤中的脂肪酸，同时利用气相色谱－质谱（GC－MS）联用技术对乌骨藤脂肪酸中的活性成分进行分析鉴定，探讨不同提取方法对乌骨藤脂肪酸组成的影响，为乌骨藤脂肪酸的提取和开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料与试剂

乌骨藤：购自安徽毫州；

CO2气体：纯度99.5%，北京天佑顺气体有限公司；

石油醚（60～90℃）、氢氧化钾、甲醇、正己烷、无水硫酸钠：分析纯，北京化工厂。

1.1.2 主要仪器设备

气相测谱仪：GC－MS7890A型，安捷伦公司；

质谱仪：5975型，安捷伦公司；

电子天平：AR224CN型，奥豪斯仪器上海有限公司；

恒温水浴锅：HH－S型，江苏省金坛市医疗仪器厂；

旋转蒸发仪：LR4000型，瑞士Buchi公司。

1.2 方法

1.2.1 乌骨藤样品制备

（1）乌骨藤的预处理：将乌骨藤用蒸馏水冲洗后，放入40℃电热鼓风干燥箱中干燥2h，粉碎过40目筛，置于试剂瓶中备用。

（2）水浴回流提取：在250mL圆底烧瓶中加入乌骨藤粉10g，石油醚150mL，放入90℃恒温水浴锅中，回流提取4h，提取液减压蒸馏得挥发油，重量为1.422g。

（3）脂肪酸的甲酯化：取乌骨藤油样50mg，置于10mL具塞试管中，依次加入0.5mL苯、0.5mL乙醚和1.0mL 2%NaOH－CH3OH溶液，45℃水浴酯化20min，冷却后加水定容至10mL，待分层后吸取上清液用于GC／MS分析［16，17］。

1.2.2 GC－MS分析

（1）色谱条件：色谱柱为DB－FFAP柱（30m×0.25mm×0.5μm）；载气：氦气（99.999%）；进样量：1μL；进样口温度：230℃；流速：1.0mL／min；溶剂延迟：5.00min；柱温：升温程序为起始温度100℃，保持2min，以5℃／min速率升到260℃，保持20min。

（2）质谱条件：电子轰击离子源（EI），电离能量为70eV；离子源温度为230℃；四级杆温度150℃；接口温度为250℃；激活电压1.5V；质量扫描范围m／z35～450。

2 结果与讨论

2.1 GC－MS分析乌骨藤中脂肪酸的化学成分

通过对乌骨藤成分进行GC－MS分析，得到总离子流谱图，见图1。

应用色谱峰面积归一法测定各组分的相对含量，鉴定结果见表1。

由表1可知，乌骨藤中共检测出27种成分，占提取物总量的97.36%。其中脂肪酸类16种，占提取物总量的78.36%，烃类9种，占提取物总量的16.31%，醇类2种，占提取物总量的3.14%。脂肪酸中含量较多的为正十六碳酸（18.08%）、（E）－9－十八碳烯酸（16.70%）、（10E，12Z）－十八碳二烯酸（16.38%）、肉桂酸（5.28%）。

图1 乌骨藤水浴回流提取物总离子流图Figure 1 The gas chromatogram of water refluxing extraction of Caulis marsdeniae tenocissimae

表1 乌骨藤提取物的化学成分及相对含量Table 1 Chemical composition and relative content of Caulis marsdeniae tenocissimae

2.2 乌骨藤中脂肪酸生物活性成分分析

水浴回流提取乌骨藤挥发油27种成分中，有多种具有生物活性，如含量较高的不饱和脂肪酸（10E，12Z）－十八碳二烯酸（16.70%）和（E）－9－十八碳烯酸（16.38%）具有抗氧化、抗自由基、抗肿瘤、增强免疫的作用［18］。不饱和脂肪酸中的（10E，12Z）－十八碳二烯酸（16.38%）具有抗动脉粥样化形成，抗糖尿病、抗过敏、调节免疫、促进生长、降低身体脂肪并增加瘦肉量及影响骨骼形成等多种生理作用［19］。饱和脂肪酸中含量较高的十六碳酸具有较强的增强心肌活性的功能［20］。角鲨烯（1.46%）是一种具有抗氧化、增强免疫功能和抑制肿瘤生长的化合物［7］。

3 结论

通过水浴回流法提取乌骨藤中的脂肪酸，利用气相色谱－质谱联用技术进行分析检测，共鉴定出27种化合物，其中6种不饱和脂肪酸（43.77%）、10种饱和脂肪酸（33.53%）、2种醇类（5.18%）、9种烃类（12.48%）。这些化合物中有多种生物活性成分，如含量较高的（E）－9－十八碳烯酸（16.70%）、（10E，12Z）－十八碳二烯酸（16.38%）、十六酸（18.08%）和含量较少的角鲨烯（1.46%）均有抗氧化、抗自由基、抗癌的作用，与乌骨藤的药理活性相一致。乌骨藤挥发油中的其它成分是否有生物活性有待进一步研究。

1 赵陆华，相秉仁，陆红柳.乌骨藤药材HPLC指纹图谱研究［J］.中成药，2008，30（8）：1 093～1 095.

2 王文骊，张雪慧.乌骨藤药材中绿原酸的含量测定研究［J］.现代中医药，2009，29（5）：79～80.

3 张家俊，胡德禹，宋宝安，等.乌骨藤化学成分和生物活性研究进展［J］.贵州大学学报（自然科学版），2007，24（2）：213～216.

4 张慧，裴志东，李春雪，等.乌骨藤的化学成分研究［J］.中国中药杂志，2010，35（23）：3 175～3 177.

5 聂丽华，沈婷，余波，等.乌骨藤多糖的提取及含量测定［J］.安徽医药，2010，14（2）：167～168.

6 张文平，王昌利，仲英，等.乌骨藤及其制剂的研究进展［J］.齐鲁药事，2006，25（5）：293～295.

7 张慧，裴志东，张修亚，等.乌骨藤脂溶性成分抗肿瘤活性及其成分分析［J］.中国中药杂志，2010，35（24）：3 325～3 328.

8 左小东，崔永安，秦叔逵.乌骨藤制剂对人肝癌细胞株VEGF和bFGF表达的影响［J］.临床肿瘤学杂志，2010，15（12）：1 062～1 065.

9 赵陆华，相秉仁，李晓晶，等.乌骨藤脂溶性成分的GC指纹图谱研究［J］.中国中药杂志，2007，32（20）：2 146～2 149.

10 吴远远，孟哲，孙汉文，等.超声波辅助提取决明子中脂溶性成分的GC－MS分析［J］.河北大学学报（自然科学版），2011，31（3）：258～279.

11 孙晓飞，时素珍，杨国红.远志脂肪油成分分析［J］.中药材，2000，23（1）：35～37.

12 韩小金，张荣，毕继诚.超临界CO2萃取红花籽油的实验研究［J］.食品与机械，2007，23（2）：23～26.