茯砖茶与红茶对酒精性肝损伤的保护作用研究

瞿绍明刘仲华刘 扬

QU Shao－ming1，2 LIU Zhong－hua1，2 LIU Yang1，2

（1.国家植物功能成分利用工程技术研究中心，湖南 长沙 410128；2.湖南农业大学茶学教育部重点实验室，湖南 长沙 410128）

大量研究［1－5］表明茶叶具有减肥、降血压、降血糖、降血脂、抗氧化等多种保健功效。茯砖茶和红茶同属发酵茶，近年来越来越受到人们的喜爱。茯砖茶是湖南主产的一种黑茶，在加工过程中其儿茶素、黄酮类及茶多酚的含量有一定的降低［6］，但其降血脂、抗氧化、减肥的功效依旧明显，能降低高脂血症大鼠血清TC、TG的含量［7］。茶多酚具有很强的抗氧化性［8，9］，红茶中茶多酚的含量较高。酒精性肝损伤属于临床中常见的肝脏疾病，是由于长期饮酒而导致的肝脏损伤疾病，包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化、酒精性肝硬化，这几种形式可以单独存在也可以同时存在［10，11］。酒精对肝脏的长期作用可导致肝细胞内的脂质代谢紊乱，造成肝脏脂质积累［12］。ALT、AST、TC、TG广泛存在于肝细胞中，当肝细胞受损时，血清中ALT、AST、TC、TG的含量就会升高，肝脏受损伤的程度常用ALT、AST、TC、TG的含量来衡量。本实验室之前对茯砖茶的降脂减肥功能进行了一系列的研究［13－15］，但目前茶对酒精性肝病的保护作用研究报道还比较少。本研究拟通过对茯砖茶提取物和速溶红茶提取物对试验小鼠谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）、丙二醛（MDA）、肝系数等指标的影响，探究茯砖茶和红茶对酒精致小鼠肝损伤的保护作用效果并比较其保护作用，旨在为茯砖茶和速溶红茶的进一步开发和利用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

全自动生化分析仪：TBA－40FR型，日本株式会式三广医疗公司；

全波长多功能酶标仪：Thermo VARIOSKAN FLASH型，美国Thermo Scientific公司；

超低温冰箱：NU－6613w35型，美国Nuaire Receo公司；

电子天平：PB302－N型，瑞士 Mettler Toledo公司；

高速冷冻离心机：MIKRO.22R型，德国Hettich公司。

1.2 试剂材料

白酒：55%（V／V），吉林东北坊酒业有限公司；

茯砖茶提取物、红茶提取物（速溶红茶）：长沙飞拓植物制品有限公司；

凯西莱：河南省新谊制药；

ALT、AST、TC、TG、GSH－Px、SOD、MDA 检测试剂盒：南京建成生物工程研究室；

喂养试验小鼠的基础饲料：湖南斯莱克景达实验动物有限公司。

1.3 动物试验

1.3.1 试验动物 SPF级昆明小鼠，雄性，体质量28～32g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，卫生许可证号：SCXK（湘）2009－0003。

1.3.2 灌胃造模剂量 灌胃剂量设定：茶叶的成人（按60kg标准）推荐剂量为9.0g／d，折合为每千克体重剂量为0.15g／kg，本研究选择人体推荐剂量的一定倍数为给药剂量，设定试验所用低浓度剂量为70mg／kg，中浓度剂量为140mg／kg，高浓度剂量为280mg／kg，凯西莱阳性对照组为60mg／kg剂量。每只小鼠的不同剂量的茯砖茶和红茶提取物的灌胃体积均为0.5mL／d。

1.3.3 动物分组与处理 根据前期确定的剂量标准和灌胃时间情况90只小鼠在室温19～26℃，光照12h／d及相对湿度45%～70%的环境下饲养，5d后随机分成9组，每组10只，首次称重并开始进行造模试验，以后每隔5d称量1次体重，观察外形及毛色，分组的9组试验组别分别为正常组、模型组、阳性对照组、茯砖茶低剂量组、茯砖茶中剂量组、茯砖茶高剂量组、红茶低剂量组、红茶中剂量组、红茶高剂量组，试验前15d阳性组、茯砖茶和红茶各剂量组每次灌胃设定浓度的试剂，正常组和模型组灌胃等量的蒸馏水，15d后先进行前面相同的灌胃处理，1h候后，模型组，阳性对照组和各给药组用55%（V／V）的东北坊白酒灌胃，灌胃体积为0.4mL／d，正常对照组灌胃等量的蒸馏水。灌胃2周，定期称量体重。

1.3.4 测定指标 末次灌胃12h后，禁食不禁水，12h后摘眼球取血，血液于4℃以2 000r／min离心10min，分离血清，取上清测定AST、ALT、TC、TC。采血后，迅速断颈处死小鼠，解剖小鼠，观察肝脏，称量总肝脏重量，计算肝系数，取肝脏右叶，常规制取肝匀浆测定SOD、GSH－Px、MDA，血清ALT、AST、TC、TG，按照试剂盒要求进行测定，肝脏SOD、GSH－Px、MDA按照试剂盒进行测定。

1.4 数据处理与分析

所有试验数据利用 EXCEL 2007和SPSS 19.0统计软件进行数据的统计及方差分析，结果计数以平均值±标准差（x±s）表示，组间差异及特性比较采用LSD法。

2 结果与分析

2.1 对酒精性肝损伤小鼠体重的影响

图1为各组试验小鼠体重变化的情况。各试验组小鼠在试验过程中体重总体呈上升趋势，其中正常组小鼠体重增长最明显，其次为模型组和阳性对照组，给药试验组中，各组别小鼠体重变化有明显区别，从一开始灌胃造模，小鼠的体重增长就显示出明显不同，从低、中、高剂量组增长速度依次变缓，其中茯砖茶低剂量组、红茶低剂量组小鼠体重增长和正常组相比缓慢，茯砖茶中剂量组、红茶中剂量组次之，茯砖茶高剂量组、红茶高剂量组最缓慢，这说明茯砖茶和红茶有抑制小鼠体重增长的效果，并且这种效果不是由于食物的原因引起的。灌胃15d后，试验小鼠增加灌胃酒精造模后，除未灌胃酒精的正常组外，其他灌胃酒精的试验组，体重都呈一定量的减轻情况，茯砖茶高剂量组、红茶高剂量组减轻的最明显，茯砖茶中剂量组、红茶中剂量组次之，茯砖茶低剂量组、红茶低剂量组变化更弱，而阳性对照和模型组的变化最弱，说明酒精的摄入一定程度上导致了小鼠体重的减小。结合表2，与模型组比较茯砖茶红茶各剂量组均能明显降低小鼠肝系数（P＜0.01），表明各剂量组小鼠体重变化情况与小鼠肝系数、肝脏受损程度有一定关系。

图1 各组试验小鼠体重变化情况Figure 1 Different groups of mice weight changes

2.2 对酒精性肝损伤小鼠血清AST、ALT、TC、TG的影响

试验结果表明（见表1），与正常组比较，模型组小鼠血清AST、ALT、TC、TG均显著性增高（P＜0.01），与模型组比较，茯砖茶、红茶、阳性对照组在一定程度上都能明显降低小鼠血清AST、ALT、TC、TG的含量，其中茯砖茶低、中剂量组，红茶高剂量组对ALT的降低作用极其明显（P＜0.01），茯砖茶高剂量组、红茶高剂量组中ALT的含量与模型组比较有显著性降低（P＜0.05）；茯砖茶高、中剂量组，红茶高剂量组对AST的降低作用明显（P＜0.01）；茯砖茶高、中剂量组对TC的降低作用明显（P＜0.01），红茶高剂量组中TC的含量比模型组明显的低（P＜0.05）；茯砖茶高，中剂量组对TG的降低作用明显（P＜0.01），红茶高、中剂量组中TG的含量明显降低（P＜0.05）。

表1 造模期各组小鼠血清AST、ALT、TC、TG的比较†Table 1 AST，ALT，TC and TG of each group in the period of model building ／（mmol·L－1）

2.3 对酒精性肝损伤小鼠肝脏SOD、GSH－Px、MDA和肝系数的影响

试验结果表明（见表2），与正常组比较，模型组小鼠肝脏中SOD和GSH－Px的含量显著性降低（P＜0.01），MDA和肝脏系数均含量显著升高（P＜0.01），与模型组比较，茯砖茶、红茶、阳性药组在一定程度上均能降低小鼠肝脏MDA的含量和肝脏系数，升高SOD和GSH－Px的含量。红茶高剂量组对SOD和GSH－Px的含量的升高作用极其明显（P＜0.01），茯砖茶高剂量组、红茶中剂量组与模型组比较SOD和GSH－Px的含量显著升高（P＜0.05）；茯砖茶高剂量 MDA的含量有显著的降低（P＜0.01），红茶高、中剂量组对 MDA的含量降低作用明显（P＜0.05）；茯砖茶与红茶各剂量组对肝脏系数的降低作用明显（P＜0.01）。

表2 造模期各组小鼠肝脏SOD、GSH－Px、MDA和肝系数的比较†Table 2 SOD、GSH－Px、MDA and liver index in the liver of each group in the period of model building

3 讨论

酒精进入人体内后，其转移路径除了少部分经肺、肾排出体外，大部分在肝脏中代谢，酒精在机体内的代谢途径主要有：① 微粒体乙醇氧化体系（MEOS）；② 乙醇脱氢酶（ADH）乙醇氧化体系；③ 黄嘌呤氧化酶－过氧化氢酶体系；④NADPH氧化酶－过氧化氢体系。其中前两种途径为最主要代谢途径［16］。酒精性肝病的发病机理情况还比较复杂，目前最广泛接受的是Day和James提出的酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝病共同存在作用的“二次打击”机制学说［17］，该学说指出对酒精性肝病的形成起重要作用的因素有脂质过氧化、氧化应激和多种炎症细胞因子的释放等。

酒精性肝损伤的发病机制与许多因素有关，一方面是与酒精代谢相关的酶如ALDH、ADH、CYUP2E1有关，另一方面是氧化应激因子、信号传导关键核因子及内毒素水平等，氧化应激及脂质过氧化受阻在酒精性肝损伤的过程中作用明显［18］，SOD和GSH－Px是机体内重要的抗氧化的物质，能够清除代谢产生的大量自由基，保护肝脏。MDA是脂质过氧化反应的终产物，其含量的高低能在一定程度上反应肝脏受损的情况，酒精肝损伤与肝脏内脂质代谢紊乱密不可分［19］。本研究结果显示红茶高剂量组对SOD和GSH－Px的含量的升高作用非常明显（P＜0.01），茯砖茶高剂量组、红茶中剂量组与模型组比较SOD和GSH－Px的含量显著升高（P＜0.05）；茯砖茶高剂量 MDA的含量有显著的降低（P＜0.01）。茯砖茶和红茶具有明显的抗氧化，清除体内自由基的作用。

4 结论

茯砖茶和红茶在一定程度上都能明显降低小鼠血清AST、ALT、TC、TG的含量，也能明显提高小鼠肝细胞SOD和GSH－Px的活性，降低MDA的含量，对小鼠的肝脏起到了良好的防护作用。茯砖茶和红茶各剂量组小鼠体重明显比其他组别的小鼠体重轻，说明茯砖茶和红茶有明显的降脂减肥功能，各试验组的小鼠肝系数明显比模型组小，表明茯砖茶和红茶对小鼠的肝脏物质代谢有明显的促进作用。本试验结果也表明茯砖茶和红茶具有明显的抗氧化功能，对肝功能的各项指标有改善作用，对小鼠酒精性肝损伤都有明显的防护作用，但是茯砖茶和红茶对酒精性肝损伤的保护作用效果差别不大。

1 Martins F，Noso T M，Porto V B，et al.Matétea inhibits in vitro pancreatic lipase activity and has hypolipidemic effect on high－fat diet－induced obese mice［J］.Obesity，2010，18（1）：42～47.

2 Lee S M，Kim C W，Kim J K，et al.GCG－rich tea catechins are effective in lowering cholesterol and triglyceride concentrations in hyperlipidemic rats［J］.Lipids，2008，43（5）：419～429.

3 Kao Y H，Chang H H，Lee M J，et al.Tea，obesity，and diabetes［J］.Molecular Nutrition ＆ Food Research，2006，50（2）：188～210.

4 Jian L，Xie L P，Lee A H，et al.Protective effect of green tea against prostate cancer：A case‐control study in southeast China［J］.International Journal of Cancer，2003，108（1）：130～135.

5 傅冬和，刘仲华，黄建安，等.同通量筛选研究茯砖茶降脂功效［J］.茶叶科学，2006，26（3）：209～214.

6 傅冬和，刘仲华，黄建安，等.茯砖茶加工过程中主要化学成分的变化［J］.食品科学，2008，29（2）：64～67.

7 王蝶，黄建安，叶小燕，等.茯砖茶减肥作用研究［J］.茶叶科学，2012，32（1）：81～86.

8 于新蕊，曲军.茶叶的化学成分及药理作用研究进展［J］.中草药，1995，26（4）：219～221.

9 侯冬岩，回瑞华，刘晓媛，等.红茶茶多酚及抗氧化性能测定［J］.食品科学，2005，26（8）：67～70.

10 黄哲，田德录，原爱红.酒精性肝病的实验动物模型的研究［J］.华人消化杂志，1998，6（8）：474～478.

11 李春燕.东北岩高兰对大鼠酒精性脂肪肝的预防作用研究［D］.哈尔滨：黑龙江中医药大学，2009.

12 Kang L，Chen X，Sebastian B M，et al.Chronic ethanol and triglyceride turnover in white adipose tissue in rats inhibition of the anti－lipolytic action of insulin after chronic ethanol contributes to increased triglyceride degradation［J］.Journal of Biological Chemistry，2007，282（39）：28 465～28 473.

13 徐小江，黄建安，肖力争，等.茯砖茶及其配方对脂肪变性L－02肝细胞中 TG 含量的影响［J］.茶叶科学，2011，31（3）：247～254.

14 袁勇，黄建安，徐小江，等.茯茶中 “金花”孢子粉提取物对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞内甘油三酯代谢的影响［J］.茶叶科学，2011，31（2）：129～135.

15 傅冬和，刘仲华，黄建安.茶叶降脂减肥作用研究进展［J］.中国茶叶，2004，26（2）：8～10.

16 江义墩.新马地区酒精性脂肪肝的证候特点及利湿化瘀解毒通降法干预的研究［D］.北京：北京中医药大学，2008.

17 Itoga S，Nomura F，Harada S，et al.Mutations in the exons and exon－intron junction regions of human cytochrome P ‐4502E1gene and alcoholism［J］.Alcoholism：Clinical and Experimental Research，1999，23（4）：13～16.

18 陈湘宁，郭琳博，李宇华，等.酒精性肝病发病机制及防治机理研究［J］.食品与机械，2011，27（6）：265～268.

19 高爱红，童华荣.天然食用色素——花青素研究进展［J］.保鲜与加工，2001，17（3）：75～78.