虎杖蒽醌化合物的分离及抗氧化活性的研究

袁晓，舒楚金，龚二兰，高俊飞，袁萍

（中国科学院武汉植物园，湖北武汉 430074）

虎杖为蓼科植物Polygonum CuspidatumSieb.et Zucc.的干燥根和根茎，为多年生草本植物，产于江苏、浙江、江西、安徽、陕西、四川等地[1]。主要成分为蒽醌类和芪类化合物[2]。这类蒽醌具有抗炎、抑菌[3]、抗病毒[4]及抗肿瘤[5]的作用，芪类化合物主要有白藜芦醇与白藜芦醇苷，二者具有明显的抗氧化活性[6]，总蒽醌类也具有一定的DPPH抗氧化活性[7]，本文针对虎杖蒽醌类化合物的分离及抗氧化活性进行研究。

1 材料与方法

虎杖药材经中科院武汉植物园李建强鉴定为蓼科植物虎杖，硅胶（安徽良辰），反相硅胶C18（20 μm），DPPH（二苯代苦味酰基自由基，分析纯，日本东京化成工业株式会社），BHA（丁基羟基茴香醚，南京迈康化工），其它试剂均为分析纯。

超声波清洗器：合肥金尼克；日立液相色谱仪：Hitachi Pump L-2130，Hitachi Autosampler L-2200，HitachiColumn OvenL-2300，HitachiDiodeArray Detector L-2455；D-2000 Elite工作站。中低压制备系统FLASH：上海利穗；分析天平电子分析天平（万分之一）：奥豪斯仪器（上海）有限公司。

1.2 方法

虎杖脂溶性化合物的制备：取1 kg虎杖药材用3倍量95%酒精超声提取3次，每次30 min，所得流浸膏加用水和乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯层浸膏，用硅胶拌样，经过硅胶和反相硅胶C18的反复柱层析，等到化合物 I-VI，并用 IR，UV，NMR，MS 和 UV将其鉴定。

1.3 色谱条件：

色谱柱：YMC-ODS-AQC18（4.6mm×250mm，5μm），流动相：A为乙腈，B为0.2%磷酸水溶液，A∶B为15∶85（体积比）；流速 1.0 mL/min，温度 25℃，检测波长280 nm。

1.4 抗氧化活性测定方法

采用DPPH法测定清除自由基活性[8-9]，以BHA作为参照。取一定量的DPPH用95%乙醇配成浓度为0.022 5 mg/mL的溶液，A试管中加入2.5 mL上述DPPH溶液，B试管为1 mL不同浓度的待测样品或BHA，A与B混合放置30 min，然后用分光光度计测试吸光度，测试波长517 nm，空白对照为95%乙醇溶液。用下列公式计算清除率（A0-A1）/A0×100%，式中：A0为A管中溶液的吸光度；A1是A与B管反应后的吸光度。

2 试验结果

2.1 虎杖药材的HPLC色谱分析

虎杖药材的HPLC色谱分析，其分析结果见图1。对照品的HPLC色谱分析，其分析结果见图2。

图1 虎杖药材的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatography of Polygonum Cuspidatum

图2 虎杖药材对照品的HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatography of reference substances

2.2 化合物鉴定

EI-MS（m/z）：270；13CNMR158.4（C-1），124.3（C-2），147.6（C-3），122.5（C-4），108.6（C-5），164.6（C-6），108.2（C-7），164.7（C-8），186.4（C-9），12.1（C-10），134.1（C-4a），118.6（C-10a），110.3（C-8a），134.2（C-9a），22.1（-CH3），101.8（C1′），73.6（C2′），76.1（C3′），70.0（C4′），77.4（C5′），61.1（C6′），与文献中的大黄素甲醚-1-β-D-glu数据一致，化合物I为大黄素-1-β-D-glu。

EI-MS（m/z）：270；13CNMR 161.6（C-1），124.6（C-2），147.4（C-3），119.7（C-4），108.8（C-5），164.7（C-6），108.8（C-7），162.2（C-8），186.9（C-9），1816（C-10），132.6（C-4a），137.0（C-10a），114.9（C-8a），113.8（C-9a），21.9（-CH3），101.3（C1′），73.8（C2′），76.9（C3′），70.0（C4′），77.8（C5′），61.1（C6′），与文献中的大黄素-8-β-D-glu数据一致，化合物II为大黄素-8-β-D-glu。

EI-MS（m/z）：284（M-180）；13CNMR 161.8（C-1），124.3（C-2），147.2（C-3），119.5（C-4），107.4（C-5），164.8（C-6），106.6（C-7），160.7（C-8），186.5（C-9），182.0（C-10），136.4（C-4a），132.1（C-10a），114.5（C-8a），114.5（C-9a），21.5（-CH3），56.2（-OCH3），100.7（C1′），73.3（C2′），76.6（C3′），69.9（C4′），77.5（C5′），60.8（C6′），与文献中的大黄素甲醚-8-β-D-glu 数据一致，化合物III为大黄素甲醚-8-β-D-glu。

EI-MS（m/z）：260；13CNMR 179.4（C-1），160.3（C-2），109.5（C-3），188.2（C-4），160.8（C-5），125.4（C-6），146.2（C-7），121.3（C-8），137.5（C-9），113.0（C-10），134.1（C-4a），118.6（C-10a），18.9（-CH3），58.0（-OCH3）与文献中的2-甲氧基-6-乙酰基-7-甲基胡桃醌数据一致，化合物IV为2-甲氧基-6-乙酰基-7-甲基胡桃醌。

EI-MS（m/z）：270；13CNMR 161.4（C-1），120.4（C-2），148.2（C-3），124.1（C-4），108.8（C-5），165.5（C-6），107.9（C-7），164.4（C-8），189.6（C-9），181.2（C-10），132.7（C-4a），135.0（C-10a），108.8（C-8a），113.3（C-9a），21.5（-CH3），与文献中的大黄素数据一致，化合物V为大黄素。

EI-MS（m/z）：284；13CNMR 165.2（C-1），121.3（C-2），148.4（C-3），124.5（C-4），108.2（C-5），162.5（C-6），106.8（C-7），166.5（C-8），190.8（C-9），180.1（C-10），13.2（C-4a），135.2（C-10a），110.2（C-8a），113.7（C-9a），22.2（-CH3），56.1（-OCH3），与文献中的大黄素甲醚数据一致，化合物VI为大黄素甲醚。

2.3 抗氧化测试结果

表1为虎杖中分离得到的6个化合物的抗氧化活性，图3为有抗氧化活性的物质与BHA的对比图。

综合来看虎杖药材蒽醌苷类都具有一定的抗氧化活性，其中大黄素-8-β-D-glu与大黄素-1-β-D-glu抗氧化活性相当，抗氧化比BHA强，大黄素甲醚-8-β-D-glu的活性与BHA接近，游离蒽醌则基本无明显抗氧化活性。

表1 抗氧化测定数据结果Table 1 Results of antioxidant test

图3 抗氧化活性物质与BHA对DPPH清除率对比图Fig.3 Comparision the capability of components from Polygonum Cuspidatum and BHA of free DPPH radicals

3 讨论

虎杖化合物及活性研究传统上集中于芪类和游离蒽醌，本文侧重于虎杖中蒽醌类化合物的分离，及初步的清除DPPH自由基的活性筛选，发现虎杖中结合蒽醌类是其重要的一部分，具有借鉴意义。

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