原发性高血压患者子代人群载脂蛋白E基因多态性与高血压的关系

容春莉，于 薇，姚文静，李如意，曹东平，彭应心

(河北省人民医院，石家庄 050051)

载脂蛋白E(ApoE)是一种多态性蛋白，参与脂蛋白的转化与代谢过程，其基因可以调节许多生物学功能。研究表明，ApoE基因多态性与原发性高血压的发生、发展有关，但其与血压正常的原发性高血压患者子代人群的关系国内外鲜见报道。2009年3月～2010年2月，我们对原发性高血压患者子代人群ApoE基因多态性与高血压的关系进行了分析。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 同期选择我院健康体检者120例，经相关检查未发现糖尿病、高血压、冠心病及其他影响血脂代谢的全身性疾病。根据有无高血压家族史分为2组:原发性高血压子代组60例(研究组)，男39 例、女21 例，年龄(48.7 ±10.8)岁;入选标准:父母双方或一方有原发性高血压，高血压诊断标准符合1999年WHO/ISH规定的标准，除外继发性高血压、冠心病、缺血性脑病及肝肾系统疾病者。正常对照组60例(对照组)，男36例、女24例，年龄(46.6±9.3)岁，入选标准:父母双方均无高血压、冠心病、缺血性脑病及肝肾系统疾病者。两组性别、年龄具有可比性。研究对象均为无血缘关系的中国北方汉族人。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集 详细记录所有研究对象的年龄、性别等，并测量身高、体质量，计算BMI;采用台式血压计于每日10:00测量右上肢血压3次，取其平均值作为收缩压、舒张压。采血前12 h禁食烟、酒、茶、咖啡等，于清晨空腹抽取肘静脉血5 mL，置入含有1/10体积0.109 mol/L枸橼酸钠抗凝液的试管中，分离血清，用于测定血脂指标，血细胞用于测定ApoE基因型。

1.2.2 ApoE基因型的检测 ①DNA提取:采用经典法分离提取血细胞DNA。②目的序列PCR扩增:PCR扩增DNA，PCR引物参照Tsai等［1］的报道设计(上游引物序列:5'-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3';下游引物序列:5'-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3')。将扩增反应体系以6000 r/min离心5 min，97℃预变性180 s，95℃变性45 s，68℃退火30 s，72℃延伸30 s，共循环35次，最后72℃延伸120 s。③PCR产物测序:经酶切后在凝胶成像分析系统下观察ApoE基因型:在48、72 bp处显现2条区带者为E4/4，在81、91 bp处显现2条区带者为E2/2，在48、91 bp 处显现 2 条区带者为 E3/3，在 48、72、91 bp处显现3条区带者为E3/4，在48、81、91 bp处显现3 条区带者为 E2/3，在48、72、81、91 bp 处显现4条区带者为E2/4。

1.2.3 血脂水平检测 血标本处理后，采用同一台Beckman全自动生化分析仪检测两组血脂水平。以胆固醇氧化酶法测定总胆固醇(TC)、甘油激酶法测定甘油三酯(TG)，直接法测定低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。以上4项指标均由专人操作。

1.2.4 统计学方法 采用 SPSS11.0统计软件，计量资料以表示，结果比较采用t检验和方差分析;基因频率用基因计数法计算，比较采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床资料比较 两组BMI、血压、血脂指标比较差异均无统计学意义(P均＞0.05)。见表1。

2.2 两组ApoE基因型及等位基因比较 所有研究对象的PCR片段均得到满意扩增，检测到6种ApoE基因型，与用Hardy-Weinberg平衡推导出的预期基因型频率基本一致，均达到连锁平衡(χ2=4.26，P ＞ 0.05)，具有群体代表性。见图 1。将ApoE基因型分为三组:ε2等位基因携带者E2/X(E2/3+E2/2基因型)、ε3等位基因携带者(E3/3基因型)、ε4等位基因携带者E4/X(E3/4+E4/4基因型)，E2/4因中性作用而排除在外。两组ApoE基因型及等位基因频率的分布见表2。两组均以ApoE3/3基因型为优势基因型，与对照组相比，研究组 ApoE4/4基因型高于对照组(χ2=4.68，P＜0.05)。两组均以ε3等位基因频率最高，ε2等位基因频率最低。研究组ε4等位基因频率高于对照组(χ2=12.42，P ＜0.05)。

表1 两组临床资料比较()

表1 两组临床资料比较()

组别 n BMI(kg/m2)收缩压(mmHg)舒张压(mmHg)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)研究组 60 20.08 ±0.17 128 ±10 82 ±7 4.42 ±0.92 1.39 ±0.30 1.41 ±0.44 2.87 ±0.59对照组 60 24.60 ±0.34 124 ±11 76 ±9 4.28 ±0.67 1.28 ±0.54 1.17 ±0.30 2.98 ±0.87

图1 ApoE各基因型凝胶电泳图

表2 两组ApoE基因型及等位基因频率的分布

3 讨论

ApoE具有转运胆固醇和调节脂质代谢的作用，在血脂代谢中具有重要意义。ApoE基因位于人类第19号染色体p13～q13区，并与ApoCⅠ、CⅡ共同形成基因簇，在功能上发挥协同作用。ApoE基因多态性与高脂血症、动脉粥样硬化及高血压的发生密切相关［2，3］。因此，ApoE 基因多态性与原发性高血压的关系越来越受到人们的关注［4］。

ApoE的合成是由位于同一基因位点上的3个等位基因(ε2、ε3、ε4)所控制，分别编码血浆中 3 种主要异构体(E2、E3、E4)，构成6种不同的基因型，即3 种纯合子(E2/2、E3/3、E4/4)、3 种杂合子(E3/2、E4/3、E4/2)。不同人群ApoE等位基因最常见的是E3，E2和E4可能是母体形式在人类进化过程中单一核苷酸点突变的结果。不同国家、民族ApoE等位基因频率不同，存在明显的种族差异［5］。有研究显示，在中国人群中 ε2、ε4等位基因频率为0.084、0.064，而 ε3 为 0.852。本研究发现，研究组与对照组均以E3/3表型及ε3等位基因最为常见，ε2和ε4相对少见，与多数研究结果相符，说明中国北方汉族人群，无论有无高血压家族史，ApoE ε3等位基因频率的分布最高。

有研究表明，ApoE4/4基因型和ε4等位基因频率在原发性高血压患者中是增加的，提示ε4可能是高血压相关的遗传因素之一。Yilmaz等［6］对88例高血压患者和63例正常健康者研究发现，ε4等位基因携带者的高血压患者有很高的靶器官损害危险，如左室肥厚和左房扩大，且与血压高低相平行。但到目前，关于原发性高血压患者子代人群ApoE基因多态性的研究鲜见报道。本研究测定了60例血压正常的原发性高血压患者子代的ApoE基因型，并计算ApoE等位基因频率。结果显示，原发性高血压患者子代的ε4等位基因频率高于对照组，推测原发性高血压患者子代人群高血压的易感基因为ApoE ε4等位基因。但高血压病是一种多因素、多基因疾病，ApoE基因多态性与血压之间的关系颇为复杂，可能通过基因—基因及基因—环境间的相互作用［7］，以某些直接或间接的方式影响血压，故原发性高血压患者子代人群是否发生高血压受遗传、环境等多种因素的影响。

总之，进一步扩大样本量，研究遗传易感因素在血压正常的原发性高血压患者子代人群中的作用，尽早发现高血压，早期干预治疗，有助于减少高血压在这些人群中的发病率，提高生活质量。

［1］Tsai MY，Suess P，Schwichterberg K，et al.Determination of apolipoprotein E genotypes by single-strand conformational polymorphism［J］.Clin Chem，1993，39(10):2121-2124.

［2］Viitanen L，Pihlajamaki J，Miettinen R，et al.Apolipoprotein E gene promoter(-219G/T)polymorphism is associated with premature coronary heart disease［J］.J Mol Med(Berl)，2001，79(12):732-737.

［3］Imazu M，Yamamoto H，Toyofuku M，et al.Association of apolipoprotein E phenotype with hypertension in Japanese-American:data from the Hawaii--Los Angeles-Hiroshima Study［J］.Hypertension Res，2001，24(5):523-529.

［4］Li X，Du Y，Du Y，et al..Association of apolipoprotein E gene polymorphism with essential hypertension and its complications［J］.Clin Exp Med，2003，2(4):175-179.

［5］Seet WT，Mary Anne TJ，Yen TS.Apolipoprotein E gene genotyping in the Malay，Chinese and Indian ethnic groups in Malaysia-a study on the distribution of the different apoE alleles and genotypes［J］.Clin Chim Acta，2004，340(1-2):201-205.

［6］Yilmaz H，Isbir T，Agachan B，et al.Is epsilon4 allele of apolipoprotein E associated with more severe end-organ damage in essential hypertension［J］.Cell Biochem Funct，2001，19(3):191-195.

［7］Hagberg JM，Ferrell RE，Dengel DR，et al.Exercise training-induced blood pressure and plasma lipid improvements in hypertensives may be genotype dependent［J］.Hypertension，1999，34(1):18-23.