6%羟乙基淀粉130/0.4对大鼠脓毒症早期的干预作用

骆喜宝，刘志贵，陈 燕

(桂林医学院附属医院，广西 桂林 541001)

研究表明，炎症因子的瀑布式释放和凝血/纤溶系统障碍等因素共同导致了脓毒症的发生、发展，其中促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在炎症和凝血环节中起关键作用［1］。6%羟乙基淀粉(HES)具有良好的扩容效应及持续时间，无论在体内还是体外实验中，HES从多个层面表现出对炎症反应的抑制效果［2］，现已广泛用于脓毒症等危重患者的容量替代治疗。但6%HES对脓毒症的炎症反应、凝血功能的影响有待于明确。2012年1～8月，我们采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制造大鼠腹腔感染的脓毒症模型，动态观察了大鼠凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、血小板(PLT)、TNF-α及肺组织病理变化，探讨了6%HES对大鼠脓毒症早期的干预作用，为临床治疗脓毒症提供理论依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 健康、雄性SD大鼠72只，鼠龄40～60 d，体质量220～300 g，购于桂林医学院动物实验中心，许可证号:SCXK(桂)2007-0001。Sysmex KX-21血常规分析仪、Sysmex CA-1500凝血四项分析仪(日本SYSMEX公司)，ELX-800酶标仪(美国宝特公司)、超低温冰箱(青岛海尔)、台式微量高速离心机(长沙俊逸实验仪器公司)、752型分光光度计(上海元析仪器公司)。TNF-α试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)，6%HES 130/0.4(北京Fresenius Kabi)。

1.2 方法

1.2.1 动物分组、模型制备及处理 按随机数字表法随机将大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(SEP组)、HES处理组(HES组)，每组24只。大鼠适应性饲养1周后，参照Wichterman等［3］方法改良制造脓毒症模型(1%氯胺酮100 mg/kg腹腔注射麻醉后，沿腹部正中切开2 cm腹壁，暴露盲肠，回盲瓣远端结扎盲肠，结扎长度为10 mm，然后用18号穿刺针单次穿刺被结扎盲肠，由穿刺孔挤出粪便进入腹腔，后将盲肠送回原位，关腹)。当大鼠出现身体卷曲、反应迟钝、饮食减少、毛色灰暗、呼吸急促、口唇紫绀、颜面浮肿等情况，即可认为造模成功。Sham组仅翻动盲肠，SEP组行盲肠结扎并穿孔，HES组于成模后3 h经阴茎背静脉注射6%HES 130/0.4注射液15 mL/kg，SEP组同时间点注射等量生理盐水。

1.2.2 观察指标 每组均在 CLP后6、12、24 h心脏取血2 mL，每个时间点取大鼠8只，采用全自动血常规分析仪检测 PLT、全自动血凝分析仪检测PT、APTT;另留取抗凝血2 mL，2000 r/min离心10 min，取上层血浆，采用双抗体夹心 ELISA法检测TNF-α。大鼠处死后，制作大鼠肺组织标本，经固定、切片、HE染色后，光镜下观察肺病理组织学改变。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件，计量资料以表示，结果比较采用方差分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组 PT、APTT、PLT及TNF-α 变化 见表1。

表1 各组不同时点PT、APTT和PLT的变化()

表1 各组不同时点PT、APTT和PLT的变化()

注:与Sham组CLP同时间比较，*P＜0.05;与SEP组CLP同时间比较，#P ＜0.05

Sham组24 CLP 6 h 821.69 ±2.20 38.13 ±1.24 838.2 ±18.3 20.56 ±0.23 CLP 12 h 821.64 ±3.16 38.16 ±1.23 836.2 ±18.3 21.34 ±0.89 CLP 24 h 822.21 ±6.02 38.20 ±1.24 838.3 ±18.8 22.30 ±1.34 SEP组 24 CLP 6 h 826.51 ±6.19 40.32 ±2.63 744.3 ±16.9 33.43 ±1.25 CLP 12 h 849.52 ±5.46* 48.53 ±2.03* 674.3 ±34.1* 45.32 ±2.34*CLP 24 h 846.98 ±8.82* 48.32 ±1.88* 472.1 ±33.5* 46.68 ±2.33*HES组 24 CLP 6 h 824.97 ±3.09# 39.53 ±2.14 781.8 ±36.1 34.18 ±2.12 CLP 12 h 836.89 ±7.59*#43.65 ±1.55*#695.5 ±38.9*#36.15 ±1.03*#CLP 24 h 838.04 ±2.43*#43.23 ±1.63*#577.9 ±47.9*#36.53 ±2.11*#

2.2 各组肺组织病理学改变 Sham组肺泡结构清晰，肺泡腔和肺间质无水肿、出血、炎性浸润;SEP组可见肺间质大量中性粒细胞浸润，肺泡壁增厚、毛细血管充血，肺泡腔变窄、闭塞，肺泡腔内有大量中性粒细胞浸润，肺泡出血;HES组肺泡壁充血、水肿、中性粒细胞浸润程度较SEP组减轻。

3 讨论

在脓毒症发生过程中，炎性细胞因子的瀑布样释放，致使凝血因子的级联反应激活了凝血系统，凝血系统活化可刺激炎症介质的释放，加重炎症反应;反过来炎症介质又进一步促进凝血过程，二者相互作用，形成恶性循环，诱发弥散性血管内凝血(DIC)、脓毒症，甚至 MODS［4］。

TNF-α是炎症早期重要的促炎细胞因子，在炎症反应中可激活细胞因子级联反应，TNF-α还可诱导内皮细胞表达组织因子，激活凝血过程，触发凝血级联反应［5］。在脓毒症级联反应中占有主要地位，在细菌或内毒素休克中的血管变化时起到中心性作用。本实验结果表明，CLP后大鼠肺组织充血、水肿和中性粒细胞大量浸润，且造模后 6、12、24 h SEP组和HES组大鼠血浆TNF-α含量均明显升高。同时，内毒素刺激单核/巨噬细胞可引起TNF-α迅速合成与释放，进一步诱导其他细胞因子的产生，启动了炎症反应中复杂的网络效应，导致失控性炎症反应的发生［6］。并且TNF-α与血管内皮细胞相互作用，导致内皮细胞表面凝血与抗凝血机制之间的平衡失调，出现促凝血机制占优势，引起DIC和血液动力学紊乱。随着DIC的发展，促使血小板和凝血因子消耗，导致本实验SEP组大鼠PLT的减少及APTT的延长。

HES具有良好的扩容效应及持续时间，现已广泛用于手术、创伤、失血、脓毒症等危重患者的容量替代治疗。HES可作用于中性粒细胞和内皮细胞，参与炎症反应的多个环节，具有抗炎特性，从而对感染和非感染引起的炎性反应造成的毛细血管渗漏、组织器官损害有保护作用，显示出扩容作用以外的新用途［7］。本实验中，HES组可明显抑制血浆中TNF-α的上升幅度，同时凝血指标PLT和APTT均较SEP组明显改善，其机制可能与6%HES 130/0.4在一定程度上降低肺毛细血管通透性、下调促炎因子、上调抗炎因子的表达，抑制了中性粒细胞的浸润，从而改善微循环、减少内皮激活、降低内皮损伤、减少炎症反应［8］。另一方面，TNF-α的过度表达，减轻器官炎症反应，同时又能有效缓解感染动物产生高凝状态，预防凝血紊乱的发生，从而阻断炎症级联与凝血级联的恶性循环，防止脓毒症的进一步发生。肺组织病理学结果表明，6%HES 130/0.4可通过抑制中性粒细胞的浸润，抑制炎症反应抑制毛细血管渗漏，抑制了毛细血管通透性的增加，减轻肺组织水肿［9］。HES组肺泡壁充血、水肿、中性粒细胞浸润程度较CLP组减轻。因此，提示6%HES 130/0.4对大鼠脓毒症可产生有益的作用。

综上所述，早期应用6%HES 130/0.4能减轻大鼠脓毒症早期炎症反应，改善凝血指标，改善肺功能，且不加重肺组织损伤。

［1］李银平，乔佑杰，武子霞，等.血必净注射液对脓毒症大鼠组织肿瘤坏死因子-α及凝血功能的影响［J］.中国中西医结合急救杂志，2007，14(2):104-107.

［2］冯智英，郑树森.羟乙基淀粉的抗炎作用及其机制的研究进展［J］.国际麻醉学与复苏杂志，2007，28(6):552-555.

［3］Wichterman KA，Baue AE，Chaudry IH.Sepsis and setic shock-a review of laboratory models and a proposal［J］.J Surg Res，1980，29(2):189-201.

［4］周慧君，程尉新，林洪远，等.弥散性血管内凝血临床治疗进展［J］.中国危重病急救医学，2000，12(10):635-636.

［5］Napoleone E，Di Santo A，Bastone A，et al.Long pentraxin PTX3 upregulates tissue factor expression in human endothelial cells:a novel link between vascular inflammation and clotting activation［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2002，22(5):782-787.

［6］高原，吕长俊，王晓芝，等.小剂量肝素对脓毒症大鼠早期的干预作用［J］.滨州医学院学报，2010，33(2):95-98.

［7］Rittoo D，Gosling P，Bonnici C，et al.Splanchnic oxygenation in patients undergoing abdominal aortic aneurysm repair and volume expansion with eloHAES［J］.Cardiovasc Surg，2002，10(2):128-133.

［8］Dieterich HJ，Weissmuller T，Rosenberger P，et al.Effect of hydroxyethyl starch on vascular leak syndrome and neutrophil accumulation during hypoxia［J］.Crit Care Med，2006，34(6):1775-1782.

［9］封小美，朱娟，邵芹，等.羟乙基淀粉130/0.4对脓毒症大鼠肺毛细血管通透性、炎性细胞因子及NF-κB表达的影响［J］.中华麻醉学杂志，2007，27(4):360-363.