西藏部分地区藏猪弓形虫血清学调查研究

2013-08-25落桑阿旺索朗斯珠

中国畜牧兽医文摘 2013年2期

关键词：胶体金弓形虫阴性

贡嘎普琼落桑阿旺米玛索朗斯珠*

（1.西藏农牧学院，林芝 860000；

2.西藏日喀则地区中等职业技术学校，日喀则 857000）

西藏部分地区藏猪弓形虫血清学调查研究

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（1.西藏农牧学院，林芝 860000；

2.西藏日喀则地区中等职业技术学校，日喀则 857000）

为了掌握藏猪弓形虫感染情况，本试验应用间接血凝试验（ⅠHA）、酶联免疫吸附试验法（ELⅠSA）及弓形虫胶体金检测卡，对西藏部分地区藏猪血清进行了弓形虫抗体检测。结果表明：在检测的195份藏猪血清样品中ⅠHA检出率为3.1%，ELⅠSA 检出率为5.1%，胶体金检测卡检出率为1%。说明西藏部分地区藏猪群中存在不同程度的弓形虫感染。

藏猪弓形虫血清学调查

*通讯作者：索朗斯珠（1971－），女，藏族，教授，预防兽医学博士，研究方向：人兽共患病。

弓形虫病是由刚地弓形虫引起的一种人兽共患性寄生虫病，该病在全世界广泛流行。西方国家人群平均感染率高达15%左右[1]，我国人体平均感染率达8%[2]。此病主要引发母猪死胎、流产，仔猪发热、呼吸困难、衰竭等症状，导致生产性能下降或死亡，当与免疫抑制性病原共同感染时，将会造成更为严重的经济损失。为了摸清西藏地区藏猪弓形虫感染情况，作者于2011～2012年初步对西藏拉萨、林芝部分地区藏猪进行猪弓形虫病血清学检测。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品采集

从西藏拉萨市堆龙县、墨竹工卡县、林周县、达孜县、尼木县、曲水县，林芝地区米林县、林芝县等地个体养猪户共采集藏猪血样195份，分离血清待检。

1.1.2 检测试剂

弓形虫间接血凝试验（IHA）试剂盒购自中国农业科学院兰州兽医研究所，IHA抗原批号是120301，阳性对照血清批号是110925，阴性对照血清批号是110925，稀释液批号是2030；猪弓形虫抗体（IgG）诊断试剂盒（酶联免疫法）、弓形虫胶体金检测卡均购自深圳市绿诗源生物技术有限公司。

1.1.3 仪器

酶标分析仪，型号：RT-6100，恒温培养箱等。

1.2 检测方法

1.2.1 间接血凝试验（ⅠHA）

按照中华人民共和国农业行业标准NY/T573-2002的规定，在96（12×8）孔l10V形有机玻璃板上进行检测，弓形虫IHA诊断制剂按瓶上标示毫升数加入灭菌蒸馏水稀释摇匀，15 000r/min离心5～10min，弃上清液，加等量的稀释液摇匀，置4℃静置24 h后使用。

1.2.1.1 操作方法

在96孔1100V 型反应板中每孔加入75μl稀释液。在反应板的第1孔加待检血清、阳性对照血清、阴性对照血清各25μl。稀释至第3孔，第4孔为稀释液对照。将诊断液摇匀，每孔加25μl诊断液后置微型振荡器上振荡2min，盖上玻璃于37℃作用2h后观察结果。

1.2.1.2 判定标准

在阳性对照血清效价不低于1∶1 024，阴性对照血清除第1孔允许有前滞现象“+”外、其余各孔均为“-”，稀释对照为“-”的前提下，对待检血清进行判定，否则重做。待检血清效价≥1∶64，判为阳性，反之为阴性。

1.2.2 酶联免疫吸附试验（ELⅠSA）

1.2.2.1 操作方法

加样：设阴性对照、阳性对照各2孔，分别加入不稀释的阴、阳性对照血清100μl于相应孔中。其余为样本孔，每孔加100μl样本稀释液，再分别加入样本10 μl。温育：加好样后振荡10s，充分混匀，置37℃温育30 min。洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应板孔，洗涤5次，每次停留1 min，最后一次洗后晾干。加酶：每孔加酶标记物100 μl。温育：置37℃温育30 min。洗板：同上。显色：每孔加显色剂A、显色剂B各50μl，振荡混匀，37℃避光反应15 min。终止：每孔加终止液50 μl，振荡10 s，充分混匀。终止后5～30 min内读数。

1.2.2.2 结果判定

临界值（CO.）=0.15。样本A值（S）/临界值（CO.）≥1，判定为TOX-IgG阳性；S/CO.＜1，判定为TOX-IgG阴性。阴性对照血清A值应小于0.10，阳性对照A值应大于0.70，否则试验不成立，需重新做。

1.2.3 弓形虫胶体金检测卡

1.2.3.1 操作方法

在检测卡的加样孔内加入2滴（100μl）待检血清样品。将检测卡平放于桌面上，在室温下静置5～20min内判定结果。超过20min的结果只能作为参考。

1.2.3.2 结果判定

阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区（C）同时出现紫红色线。弓形虫抗体滴度越高，检测线（T）颜色越深。弱阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区（C）同时出现紫红色线。阴性：在观察孔内，只有对照线区（C）出现一条紫红色线。失效：在观察孔内，对照线区（C）和检测线区（T）都不出现红色线；或仅检测线区（T）出现红色线。

2 结果

血清学检测结果详见表1。

2.1 IHA法检测结果

从个体养猪户收集猪血清195份，IHA方法检测到6份为抗体阳性，抗体阳性率为3.1%。

2.2 酶联免疫法检测结果

从个体养猪户收集猪血清195份，ELISA方法检测到10份为抗体阳性，抗体阳性率为5.1%。

2.3 胶体金检测结果

从个体养猪户收集猪血清195份，胶体金检测卡检测到2份为抗体阳性，抗体阳性率为1%。

表1 血清学检测结果

表2 西藏部分地区藏猪弓形虫感染率与国内部分地区的比较[3-7]

3 讨论

3.1 感染区域比较

弓形虫是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病，该病的流行程度因当地的风俗文化、卫生设施和状况、地理位置及民族饮食习惯等诸多因素的不同而有所差异。而有关西藏地区弓形虫血清学调查文献报导甚少，故只能通过与其他省份进行比较和讨论。从表2可以看出，本次调查结果与国内某些省份相比较低。但西藏猪弓形虫病的流行情况及其危害性与其他的地区相比是高还是低，需要更多方面的统计数据，有待进一步分析。