松补力口服液质量标准研究

卢晓丽 马庆东 王新宇 田树革

松补力口服液由甘松单味药组成。该方收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册》，是一种具有养心、安神、增强胃功能，用于治疗心悸、神经衰弱，腹痛、胃病等疾病的口服液体制剂［1］。

阿魏酸(ferulicacid)是松补力口服液的有效成分之一，其化学名4-羟基-3-甲氧基肉桂酸，是桂皮酸的衍生物之一。药理学研究表明，阿魏酸具有抗氧化和清除自由基作用，能有效抑制血小板聚集和血栓形成，增加冠脉血流量。临床用于治疗血管栓塞性脉管炎、动脉粥样硬化、急性脑血栓和偏头痛及动脉粥样硬化等症［2］。

中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册中仅对松补力口服液进行了相对密度及pH值的检查，甘松在中国药典2010版中也仅进行了薄层鉴别［3］，为控制本品质量，本实验增加了松补力口服液重金属的检查，对口服液中有效成分阿魏酸、甘松新酮进行薄层鉴别，采用高效液相色谱法(HPLC)对松补力口服液中的阿魏酸进行含量测定，对其控制松补力口服液质量标准提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-6AD高效液相色谱仪，SPD-20A型紫外检测器，CBM-20A色谱工作站(岛津公司，日本)，KQ-200KDE型高功率数控超声清洗器 (超声仪器有限公司，昆山);AL204型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司，上海);薄层显色加热器(武汉药科新技术开发有限公司，武汉);雷磁PHSJ-3F实验室pH计(上海仪电科学仪器有限公司，上海);Millipore超纯水仪(密理博公司，美国)。

1.2 试剂与样品

松补力口服液(规格10 ml/支，天山莲药业有限公司提供批号 02120603、02120602、02120603);阿魏酸对照品(成都领航者生物技术有限公司，批号:YY20100722);甘松新酮对照品(成都曼思特生物科技有限公司，批号:MUST-11090901);甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯;水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 阿魏酸薄层鉴别 取松补力口服液150 ml，用150 ml乙醚萃取，取乙醚层，重复一次，将两次乙醚液混合，70℃水浴蒸干，用10 ml甲醇溶解并定容，即得;称取阿魏酸标准品0.01 g，用甲醇配制成每1 ml含阿魏酸0.1 mg的对照品溶液。取上述溶液各10μl，分别点与同一硅胶G板上，采用薄层色谱法(TLC)(中国药典2010年版一部附录VIB法)以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰乙酸(6∶5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯(365 nm)下观察;供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同荧光斑点。见图1。

2.1.2 甘松新酮薄层鉴别 取松补力口服液50 ml，用50 ml石油醚(60～90℃)萃取，取石油醚层，70℃水浴浓缩约为5 ml，并用石油醚定容至5 ml，即得;甘松新酮对照品溶液制备:称取甘松新酮50 mg用甲醇配制制成每1 ml含甘松新酮0.5 mg的对照品溶液;取上述供试品溶液、甘松对照品溶液10μl，分别点在同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G板上，以石油醚-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂展开，取出，晾干，喷0.5%香草醛浓硫酸显色，在105℃加热至显色清晰;供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同荧光斑点。见图2。

2.2 检查

2.2.1 相对密度 根据2010版中国药典附录VIA相对密度测定法第一种方法比重瓶法测定［3］，相对密度平均值为(1.02±0.0018)，相对标准偏差RSD为0.21%，相对密度应不低于1.02。

2.2.2 pH值 根据2010版中国药典附录VIH pH值测定法测定［3］，pH 值平均值为(4.16±0.0151)，RSD为0.72%，pH值应为3～5之间。

2.2.3 重金属 根据2010版中国药典附录ⅦH重金属检查法第一法检查。三份口服液甲管中颜色比乙管中浅，按药典标准中不得超过20μg/g测定，可判定三份口服液均不超标。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Hypersil ODS C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇∶1%冰乙酸水(22∶78)，流速1 ml/min，检测波长为320 nm，柱温为35℃，进样量20μl。

2.3.2 溶液配制 对照品溶液的制备精确称取0.0101 g阿魏酸标准品，以甲醇定容于10 ml容量瓶中，配成浓度为1 mg/ml的标准溶液，过0.45μm的微孔滤膜，备用。

样品溶液的制备:吸取松补力口服液150 ml，加150 ml乙醚萃取两次，合并两次乙醚液蒸干，移入10 ml容量瓶中加甲醇溶解，并定容到10 ml。过0.45μm的微孔滤膜，备用。

2.3.3 测定法 流动相以:甲醇:1%冰乙酸水(22∶78)，流速 1 ml/min，检测波长为 320 nm，柱温为35℃的色谱条件，进样量20μl，对阿魏酸对照品及松补力口服液样品进行测定。对照品及松补力口服液色谱图见图3、图4。

2.3.4 标准曲线绘制 分别吸取标准溶液20、40、60、80、100、120、140 μg/ml，各进样 5.0 μl，按上述的色谱条件测定色谱峰面积，以阿魏酸对照品浓度为横坐标、测得阿魏酸对照品的色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程Y=2491.2X+116321(r=0.9966)，线性范围20～140 μg/ml。

2.3.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液5.0μl，连续进样5次，按上述色谱条件测定。计算得到RSD为0.83%，结果表明，该方法精密度良好。

2.3.6 稳定性试验 稳定性试验取同一批试品溶液，分别在0，2，4，6，8，24 小时时依法测定。结果峰面积积分值的RSD为1.07%，结果表明，供试品溶液在24小时内基本稳定。

2.3.7 重复性试验 重复性试验量取同一批样品6份，按照样品溶液处理方法及色谱条件操作，测定阿魏酸平均含量为5.38μg/ml，RSD=5.60%，结果表明，该方法重复性良好。

2.3.8 加样回收试验 分别精密量取已知阿魏酸含量的松补力口服液6份，每份150 ml，分别精密加入4μg同一批号阿魏酸对照品，按照3.2样品处理方法处理后测定每份含量，标准曲线法计算含量，见表1。

2.3.9 样品测定 取3批松补力口服液中试产品，吸取松补力口服液150 ml，加150 ml乙醚萃取两次，合并两次乙醚液蒸干，移入10 ml容量瓶中加甲醇溶解，并定容到10 ml。过0.45μm的微孔滤膜，备用。以流动相:甲醇∶1%冰乙酸水(22∶78)，流速1 ml/min，检测波长为320 nm，柱温为35℃的色谱条件，进样量20μl，对松补力口服液样品进行测定。结果见表2。

表1 阿魏酸加样回收率试验结果

表2 3批松补力口服液中阿魏酸含量

3 讨论

本实验增加了对松补力口服液重金属检查、有效成分阿魏酸及甘松新酮的薄层鉴别，对于甘松新酮的薄层鉴别采用2010中国药典一部中甘松中甘松新酮的薄层色谱展开条件［3］，展开效果良好。阿魏酸的薄层条件分别采用。氯仿∶乙酸乙酯∶冰醋酸(6∶4∶1)、甲苯∶三氯甲烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸(8∶4∶2∶1)展开效果不佳，最后经多次试验确定阿魏酸的薄层条件为甲苯∶三氯甲烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸(6∶5∶2∶1)。

目前阿魏酸的含量测定方法主要有高效液相色谱法［4-9］、薄层色谱法［10］、荧光法［11］、气相色谱法［12］等。松补力口服液由甘松一味中药材组成，但是其提取工艺为水蒸气蒸馏法提取，成分复杂，对于口服液处理根据王玉等［13］发表的HPLC测定参芍口服液中阿魏酸含量中的处理方法确定用乙醚萃取两次阿魏酸的含量最佳。流动相选择时，分别以甲醇∶水溶液(30∶70)、甲酸∶1%冰乙酸水溶液(35∶65)、甲醇∶1%冰乙酸水溶液(25∶75)等流动相体系进行试验，制剂中的其他组分与阿魏酸不能有效分离;波长选择时，在200～280 nm、4～12分钟干扰峰众多，无法明确识别阿魏酸峰。因此，采用流动相为甲醇∶1%冰乙酸水(22∶78)，检测波长为320 nm，阿魏酸与其他组分可完全分离，达到较佳的结果。该法简便快捷，测定结果稳定可靠，且重现性好，为制剂的质量控制提供了实验依据。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册［M］.新疆，新疆科技卫生出版社，1999:154.

［2］叶资萍，苑洪忠，赵凯.HPLC法测定养血当归软胶囊中阿魏酸的含量［J］.中国现代中药，2007，9(1):18-19.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:79.

［4］农毅清，林素梅，莫海玲.高效液相色谱法测定加味归芪片中阿魏酸的含量［J］.广西中医学院学报，2009，12(2):58-60.

［5］张国民，齐赤虹，杨工昶，等.高效液相色谱法测定复方益母胶囊中阿魏酸的含量［J］.中国中医药信息杂志，2008，15(2):48-50.

［6］单玉荣.HPLC法测定枣参合剂中阿魏酸的含量［J］.安徽医药，2007，11(6):519-520.

［7］邵玉玲，强百杰，刘专专，等.HPLC法测定浓缩当归丸中阿魏酸的含量［J］.分析测试技术与仪器，2007，13(3):211-214.

［8］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］.2010年版.北京:中国医药科出版社，2010:124.

［9］冯艺戎.TLCS法测定安中养血合剂中阿魏酸的含量［J］.安徽医药，2010，14(6):654-655.

［10］王莹，罗红群，李念兵.荧光法测定当归中阿魏酸的含量［J］.西南大学学报(自然科学版)，2007，29(1):15-19.

［11］李秋怡，干国平，王光忠，等.气相色谱法测定川芎油中阿魏酸的含量［J］.时珍国医国药，2007，18(7):1687-1688.

［12］王玉，侯林中，张熙洁，等.HPLC测定参芍口服液中阿魏酸含量［J］.中国药学杂志，2010，45(11):1674-1675.