酶联免疫吸附法在沙门氏菌检测中临床应用

盛小皓

四川省阿坝州九寨沟县疾病预防控制中心 623400

为了探讨酶联免疫吸附法在沙门氏菌检测中临床应用效果，本研究于2012年1月～2012年6月对我院接受的临床样本应用沙门氏菌特异性单抗3～47～26建立竞争ELISA法来进行沙门氏菌检测，通过与国标法对样品进行比较检测，分析该方法在沙门氏菌检测中的敏感性、特异性和准确性，现将分析结果报道如下。

资料与方法

样本来源:2012年1月～2012年6月选择我院接受的临床粪便样本105份。

检测方法:①用碳酸盐缓冲液(0.05mol/L pH9.6)稀释肠炎沙门氏菌LPS～poly～L～Lysine 80g/L包被96孔酶标板，100μl/孔，用封板膜封板后置37℃温育1h。②小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。③取未致敏的40孔酶标板，将样品和酶标抗体室温作用90min［1］。④取包被好的酶标板，小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。⑤将作用后的样品与酶标抗体混合液移入包被板，每样加两孔，100μl/孔。留下3孔分别设阳性、阴性、空白对照。用封板膜封板后置37℃温育1h。⑥取包被好的酶标板，小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。⑦取出酶标板，迅速加入50μl终止液，加入终止液后应立即在酶标仪上测定OD490光吸收读值。⑧以国标法作为金标准进行ELISA方法的敏感性和特异性分析，另外采用稀释法进行国标法和ELISA试验的检测限测定［2］。

数据处理:所有统计均在Windows SPSS17.0中完成，以抑制率的大小判定样品的阴阳性，抑制率按以下公式计算样品抑制率(%)=(阴性对照 OD值 ～样品 OD值)/阴性对照 OD值 ×100%。敏感性为真阳性/(真阳性+假阴性)，特异性为真阴性/(真阴性+假阳性)，准确性为(真阳性+真阴性)/总数。

结 果

检测限的确定结果:国标法的检测限为4.9×101CFU/g粪便;C～ELISA为5.0×104CFU/g粪便。

样品的检测结果:ELISA法检测的敏感性为94.4%，特异性为97.7%，准确性为97.1%。见表1。

表1 样品的ELISA检测结果［份］

讨 论

沙门氏菌(Salmonella)沙门氏菌病属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌，是中一种重要的人畜共患病原菌，是细菌性食物中毒的重要致病菌［3］。沙门氏菌属有的专对人类致病，有的只对动物致病，也有对人和动物都致病。可以使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎和食物中毒，给国家经济造成巨大损失，同时严重威胁着人们的身体健康。所以，沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一;在公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和出入境检验检疫中均有重要意义。酶联免疫吸附法(Enzyme linked immnosorbent assay，ELISA)是1971年ENGVELL等建立在免疫酶基础上的一种新型免疫测定技术，是目前最常见的检测手段之一。为了探讨酶联免疫吸附法在沙门氏菌检测中临床应用效果，本研究于2012年1月～2012年6月对我院接受的临床样本应用沙门氏菌特异性单抗3～47～26建立竞争ELISA法来进行沙门氏菌检测，通过与国标法对样品进行比较检测，分析该方法在沙门氏菌检测中的敏感性、特异性和准确性。研究结果显示国标法的检测限为4.9×101CFU/g粪便;C～ELISA为5.0×104CFU/g粪便。ELISA法检测的敏感性为94.4%，特异性为97.7%，准确性为97.1%。上述研究结果表明酶联免疫吸附法在沙门氏菌的临床检测中具有良好的特异性、准确性和敏感性，值得推广使用。

1 石颖，杨保伟，师俊玲，等.陕西关中畜禽肉及凉拌菜中沙门氏菌污染分析［J］.西北农业学报，2011，20(7):22 ～27.

2 张江英.沙门氏菌检测方法的研究进展［J］.家禽科学，2012(10):47～50.

3 孙园园，赵鹏，刘骏，等.沙门氏菌检测方法研究进展［J］.中国畜牧兽医，2011，38(1):218 ～221.