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用酶联免疫试剂盒检测鸡肉中的金刚烷胺

2018-02-14樊秀敏

畜牧兽医科技信息 2018年3期
关键词:金刚烷胺工作液稀释液

樊秀敏

(辽宁省朝阳市建平县畜产品安全监察所,辽宁 朝阳 122400)

金刚烷胺为禁止用于兽用的抗病毒药品。金刚烷胺具有神经毒性,能使中枢神经系统受刺激或中毒,在食品中残留,对心肺及肾功能不全者,还容易导致蓄积毒性。

1 酶联免疫试剂盒准备

金刚烷胺酶联免疫试剂盒(Ⅳ型)。北京维德维康生物技术有限公司生产。

2 原理

鸡肉中的金刚烷胺与酶标板上固定的金刚烷胺特异性竞争抗体,当鸡肉中不含金刚烷胺或金刚烷胺含量很少时,更多的抗体就会与酶标板上的金刚烷胺结合,结合物被固定在酶标板上,加入酶标记物以后,底物被催化显色,根据显色的深浅来判断鸡肉中金刚烷胺的含量。显色越深,含量越少,显色越浅,含量越多。

3 工作液准备

3.1 样品提取液 1份浓缩样品提取液加19份去离子水。

3.2 样品稀释液 1份浓缩样品稀释液加9份去离子水。

3.3 洗涤工作液 1份浓缩洗涤液加19份去离子水。

3.4 酶标记物工作液 1份酶标记物浓缩液加10份酶标记物稀释液。

4 鸡肉前处理

4.1 称取2±0.05g均质后的鸡肉于50mL离心管中。

4.2 加入4mL样品提取液充分涡动5min。

4.3 离心机4000g以上,离心5min。

4.4 取0.2mL上清液于干净离心管中,加入0.2mL样品稀释液充分涡动10s。

4.5 取50μL进行检测。

5 检测

5.1 根据样品数量的多少取出相应数量的酶标板条固定在酶标板架上,要求做两个平行样,标记清楚标准品和样品的滴加位置。未使用的酶标板条用自封袋密封后,立即保存期于2~8℃环境中。

5.2 将 50μL 各标准品工作液(0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ppb)和50μL各样品溶液分别加入对应的酶标板孔中。

5.3 各孔均加入50μL酶标记物工作液,枪头不能接触到酶标板孔中的液体。

5.4 把酶标板用盖板膜盖好,轻轻振荡酶标板10s,使溶液充分混匀,在室温(25±2℃)下避光反应30min。

5.5 揭开盖板膜,把酶标板孔中的液体倒净,在每个孔中分别加入260μL洗涤工作液,充分洗涤4次,每次浸泡10~20s。

5.6 洗涤完毕后,倒掉酶标板孔中洗涤工作液,将酶标板倒倒置于吸水纸上,轻轻拍打到拍干。(用干净的枪头戳破孔底的气泡,为防止交叉污染戳气泡时要更换枪头)

5.7 立即在每个孔中分别加入100μL底物A、B的混合液(底物A、B按1:1比例混合,混合液使用不能超过5min)。

5.8 把酶标板用盖板膜盖好,轻轻振荡酶标板10s,使溶液充分混匀,在室温(25±2℃)下避光反应10min。

5.9 揭开盖板膜,各孔中分别加入50μL终止液,轻轻振荡酶标板10s,使溶液充分混匀。

5.1 0 加入终止液5min内,用酶标仪在双波长450nm、630 nm下读取酶标板吸光度值。

6 注意事项

6.1 试剂盒贮存于2~8℃环境中,切勿冷冻。

6.2 使用试剂盒前,应仔细阅读说明书。

6.3 请勿使用过期试剂盒,不同批号试剂盒中的试剂不能混用。

6.4 使用试剂盒前,将盒内各组份放在实验台上恢复至室温25±2℃。

6.5 样品处理前先恢复至室温,处理完毕后应立即检测。

6.6 避免使用金属类物质盛装和搅拌试剂。

6.7 各试剂在使用前应摇匀,混合时避免出现气泡。

6.8 酶标板孔中加入样品溶液、酶标记物工作液、AB混合液、终止液各步骤时间不得超过3min。

6.9 终止液中含有强酸物质,若不小心溅到皮肤或衣物上请立即用水冲洗。

6.1 0 检测过程中所用枪头不得重复使用。

做酶联免疫检测实验是一项认真谨慎的工作,把握好每一个环节都显得尤为重要,只有严格按照操作要求去做,才能保证检测结果的准确性,同时对监控违禁药品的使用也具有重要意义。

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