罗氏电化学发光检测系统乙型肝炎表面抗原定量检测方法学评价及性能验证

吴文清，黄志基（复旦大学附属华山医院检验科，上海 200040）

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测的临床应用极为广泛。随着检测技术的发展，HBsAg的定量检测也以逐步应用于临床，对判断乙型肝炎病毒（HBV）感染患者免疫应答状态、抗病毒疗效评价及制订治疗方案等方面有着重要意义［1］。早期用于HBsAg定量检测的方法仅能检测原倍血清，且检测线性范围很小，检测上限一般为130～250IU／mL，使其临床应用严重受限。罗氏公司Elecsys MODULAR ANALYTICS E－170电化学免疫分析系统（简称E－170分析系统）可用于HBsAg定量检测，且检测上限可达52 000IU／mL。笔者根据美国病理学家协会（CAP）和ISO15189对实验室质量的管理要求和实验室认可的要求［2－3］，对E－170分析系统进行了 HBsAg检测方法学评价和性能验证，结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 临床标本来源 收集高、低浓度水平新鲜血清标本用于批内重复性测定和批间重复性测定。

1.2 仪器与试剂 罗氏公司E－170分析系统及配套HBsAg定量检测试剂（批号165611）、HBsAg定标液（批号165611）和其他试剂。以自制混合血清（高值6 157.77IU／mL，低值1 580.88IU／mL）作为质控品。

1.3 方法

1.3.1 标本检测每日校准、定标后进行高、低值质控品检测，共20d，计算均值和标准差，确认本系统质控范围。每次检测标本前先进行质控品检测，确认在控后进行标本检测。

1.3.2 不精密度评价 （1）批内不精密度评价：选择高浓度、低浓度混合血清1份，连续检测20次，计算标准差和批内变异系数，评价批内不精密度。（2）批间不精密度评价：选择高浓度混合血清1份，分装为20份，－30℃保存，每天检测1份，连续检测20d，计算标准差和批间变异系数，评价批间不精密度。

1.3.3 分析测量范围（AMR）验证 按EP6－P2文件要求［4］，取低浓度（22.075IU／mL）和高浓度（48 158.25IU／mL）血清各1份，按体积比3∶1、1∶1、1∶3混合，制备混合血清标本3份，连同未混合的血清标本共5份，每份标本检测4次，计算均值，以理论值和测试均值作回归分析，计算回归方程，按α＝1.00±0.05、r≥0.97为标准进行AMR验证。

1.3.4 可报告低限值（LoQ）验证 选择HBsAg浓度接近1∶400稀释检测低限值（20IU／mL）的血清样本1份，每天检测1次，连续检测12d，计算均值、标准差和变异系数，以变异系数不超过20%为标准，验证LoQ。

1.3.5 仪器自动稀释正确度验证 选择11份HBsAg浓度即可用原倍血清检测，又可自动稀释检测的标本，分别检测原倍血清和1∶400自动稀释血清，计算其偏差，以偏差小于20%为标准，验证自动稀释正确度。

2 结 果

2.1 不精密度评价 高浓度标本（26 222.35IU／mL）批内不精密度评价的标准差为520.76IU／mL，变异系数为1.99%；低浓度标本（40.69IU／mL）标准差为0.91IU／mL，变异系数为2.23%。高浓度标本（27 005.80IU／mL）批间不精密度评价的标准差为853.59IU／mL，变异系数为3.16%；低浓度标本（42.47IU／mL）标准差为1.71IU／mL，变异系数为4.03%。

2.2 AMR验证 5份待测标本理论值由高到低依次为48 158.25、36 124.21、24 090.16、12 056.12、22.075IU／mL，实测值均值由高到低依次为48 158.25、34 527.00、22 511.00、10 805.75、22.075IU／mL，经回归分析计算回归方程为Y＝0.997 1X－815.92，r2＝0.998 1，符合判断标准的要求，故本系统检测HBsAg的AMR为22.075～48 158.25IU／mL。

2.3 LoQ验证 12次检测结果均值为24.905IU／mL，标准差为0.934IU／mL、变异系数为3.751%，符合判断标准的要求，故可认为本系统检测HBsAg的LoQ为24.905IU／mL。

2.4 仪器自动稀释正确度评价 11份标本原倍和1∶400稀释液检测结果均值分别为77.8、83.3IU／mL，偏差值的均值为7.06%，符合判断标准的要求，故本系统自动稀释检测HBsAg具有较高正确度。

3 讨 论

E－170分析系统为封闭检测系统，所有试剂和耗品均为罗氏公司产品，说明书提供的所有参数均为厂家在国外的最佳条件下进行试验所获得的，而每个实验室的外部条件与最佳条件存在较大差异，包括水质、电压稳定性、环境温湿度、人员操作习惯等均有所不同。因此，每个实验室都必须对检测系统建立符合自身条件的方法学参数。此外，说明书只提供了原倍血清的方法学参数，即0.05～130IU／mL之间检测结果的验证，而需要进行HBsAg定量检测以监控疗效患者，其血清HBsAg浓度往往达到该浓度范围的几十至几百倍，即需进行仪器1∶400稀释。因此，本次方法学评价主要基于1∶400稀释度，评价结果为：HBsAg定量检测批内精密度（以变异系数表示）分别为2.23%和1.99%，批间精密度（以变异系数表示）分别为4.03%和3.16%，均与说明书提供的参数基本一致，符合美国临床和实验室标准协会（CLSI）文件EP5－A，完全能够满足临床诊断的要求［4－5］。

AMR验证的目的是验证检测系统的最高检测值和高低检测值之间是否呈线性关系，实验室应为每个系统建立各自的线性参数，不应直接引用厂家提供的线性范围［5－6］。本次验证HBsAg定量检测的最高检测值为48 158.25IU／mL，且高低检测值呈线性关系。

目前多是实验室将说明书提供的分析灵敏度作为检测系统的最低检测限，这不仅存在着上述的系统差异，更可能存在着引用错误。按最新的观点，功能灵敏度才是检测系统的最低检测限，但大部分厂家未提供功能灵敏度，即使提供，每个实验室也应建立自己的灵敏度或对其进行验证。本次验证结果表明，E－170分析系统HBsAg定量检测的功能灵敏度为24.91 IU／mL。

当临床标本的检测值超过线性范围时，临床一般要求报告确切值。因此，对于超过线性范围的标本，实验室一般会进行稀释后检测。但是否存在稀释效应，应通过试验来证实。临床可报告范围评价就是了解检测项目的最大可稀释度［7］。本次验证结果显示，以1∶400稀释时，原倍血清和稀释血清检测结果的整体偏差为7.02%，与理论值基本相符。因此，可认为厂商提供的E－170分析系统HBsAg定量检测最高1∶400稀释度可以使用。

综上所述，E－170分析系统定量检测HBsAg的性能符合CAP、IOS15189实验室认可及临床的要求；部分性能指标评价结果与厂家提供的参数不完全相同，说明厂家提供的方法学参数不能全部直接引用，各实验室应建立自己的分析性能指标。

［1］Chan HLY，Wong VWS，Tse AML，et al.Serum hepatitis B surface antigen quantitation can refluent hepatitis B virus in the liver and predict treatment response［J］.Clin Gastroenterol Hepatol，2007，5（10）：1462－1468.

［2］ College of American Pathologists.Clinical immunology checklist［M］.Washington，USA：CAP，2006.

［3］丛玉隆，冯仁丰，陈晓东.临床实验室管理学［M］.北京：中国医药科技出版社，2004：72－73，89－102，123－129.

［4］ National Committee of Clinical Laboratory Standard.EP5－A Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices［S］.Wayne，PA，USA：NCCLS，1999.

［5］ National Committee of Clinical Laboratory Standard.EP6－P2Evaluation of linearity of quantitative analytical methods.Proposed guideline－second edition［S］.Wayne，PA，USA：NCCLS，1996.

［6］ National Committee of Clinical Laboratory Standard.EP9－A Method comparison and bias estimation using patient samples［S］.Wayne，PA，USA：NCCLS，1995.

［7］ National Committee of Clinical Laboratory Standard.EP10－A Preliminary evaluation of quantitative clinical laboratory methods［S］.Wayne，PA，USA：NCCLS，1998.