豚鼠过敏试验影响因素探讨

管志美，张德波

（1.湖南省药品审评认证与不良反应监测中心，长沙 410013；2.成都市食品药品检测中心，成都 610000）

使用豚鼠研究药物的过敏反应是常规实验手段，但豚鼠全身主动过敏反应发生率是否与试验动物性别有关、在药物中添加过敏原对药物过敏反应发生率有无影响、过敏试验中能否采用再一次激发的方式来增加过敏反应发生率等问题却是需要深入研究和探讨的。本文对上述问题作了研究与探讨，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试药与试剂

注射用炎琥宁，性状：淡黄色块状物，规格80 mg，批号：A－080704；注射用阿奇霉素，性状：白色疏松块状物，规格0.125g，批号：A－080702。均由峨眉山通惠制药有限公司生产并提供。

5%葡萄糖注射液，规格250mL，批号：00706009，青岛华仁药业股份有限公司产品；灭菌注射用水，规格500mL，批号：A060313，四川科伦药业股份有限公司产品；卵白蛋白，批号：BP0124，Sigma公司产品。

1.2 实验动物

英国种豚鼠，体质量300～350g，雌雄均用，由四川省实验动物专委会养殖场提供。正常饲养5～7d后选择健康活泼者使用。饲料：全价营养饲料，四川省医科院医学实验动物中心生产供应部提供。试验在成都市药物研究所药理实验动物室进行。上述供货单位均拥有合法资质。

1.3 实验方法

1.3.1 急性毒性试验 取禁食不禁水12h健康活的雄性豚鼠随机分为卵白蛋白5mg／mL组、注射用炎琥宁16mg／mL组、注射用阿奇霉素20mg／mL、10mg／mL、5mg／mL组，每组3只。各组动物由趾静脉注射相应的药液进行毒性试验，注射剂体积均为1mL／只。注射后正常饲养，观察24h，记录动物发生的毒性反应及死亡情况［1］。

1.3.2 不同性别豚鼠过敏反应发生率比较 取豚鼠，随机分为阴性对照组（雌雄各半）、阳性雌性组、阳性雄性组，每组10只。阴性对照组动物给予5%葡萄糖注射液，阳性组均给予用5%葡萄糖注射液配制的0.15mg／mL卵白蛋白液。各组动物均采用腹腔注射法致敏，隔日1次，共4次，每次剂量均为0.5mL／只。于末次致敏后第11天，各组动物分别由趾静脉注射相应的药液进行激发，剂量均为1 mL／只。激发注射药液后观察60min，并记录动物反应情况及死亡情况。

1.3.3 药物中添加与不添加过敏原试验比较 1）动物分组及致敏：取雄性豚鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、注射用炎琥宁＋卵白蛋白组、注射用炎琥宁组、注射用阿奇霉素组＋卵白蛋白组、注射用阿奇霉素组，每组10只。阴性对照组动物给予5%葡萄糖注射液，阳性组均给予5%葡萄糖注射液配制的0.15mg／mL卵白蛋白液。药物添加过敏原组均采用药物中添加卵白蛋白的方法配制，药物不添加过敏原组均直接用5%葡萄糖注射液配制。各组动物采用腹腔注射法致敏，隔日1次，共4次，每次剂量均为0.5mL／只。2）动物激发方法：每组动物在末次致敏后第11天由趾静脉注射给药激发，各组动物激发剂量均为1mL／只。共激发3次。第1次激发：阴性对照组给予5%葡萄糖注射液；注射用炎琥宁组、注射用炎琥宁＋卵白蛋白组均给予用5%葡萄糖注射液配制的4mg／mL注射用炎琥宁液；注射用阿奇霉素组、注射用阿奇霉素＋卵白蛋白组均给予用5%葡萄糖注射液配制的2mg／mL注射用阿奇霉素；阳性组均给予5%葡萄糖注射液配制的0.15mg／mL卵白蛋白液。激发注射后，观察3h。第2次激发：第1次激发观察后的注射用炎琥宁＋卵白蛋白组、注射用阿奇霉素＋卵白蛋白组，再用5%葡萄糖注射液配制的卵白蛋白液激发，激发注射后观察1h［2］。第3次激发：第2次激发观察后的注射用炎琥宁＋卵白蛋白组、注射用阿奇霉素＋卵白蛋白组存活动物，再用5%葡萄糖注射液配制的卵白蛋白液激发；阴性、阳性对照组也用相应供试液激发，激发剂量均为2mL／只。激发注射后再观察3 h。激发后立即观察并记录反应情况及死亡情况［3］。

2 结果

2.1 豚鼠急性毒性试验

实验表明：卵白蛋白5mg／mL、注射用炎琥宁16mg／mL、注射用阿奇霉素10mg／mL供试液对豚鼠静脉注射1mL／只不会引起动物发生毒性反应，可用不大于该量的剂量进行过敏试验（见表1）。

2.2 不同性别豚鼠过敏反应发生率比较研究

实验结果表明，不同性别的豚鼠过敏反应发生率没有明显区别，激发后过敏反应发生的时间及过敏反应的程度均无明显区别（见表2）。

表1 豚鼠急性毒性试验结果

表2 不同性别豚鼠过敏反应发生率比较

表3 药液中添加与不添加过敏原试验（第1次激发）

表4 药液中添加与不添加过敏原试验（对第1次激发存活动物用卵白蛋白激发）

表5 药液中添加与不添加过敏原试验（对第2次激发存活动物再次用卵白蛋白激发）

2.3 药物中添加与不添加过敏原试验比较

实验结果表明，阴性组动物激发后无过敏反应发生；阳性组动物激发后全部出现过敏反应，并且大部分出现极强阳性（死亡）；药物＋卵白蛋白组动物用药液激发后，动物无过敏反应发生（见表3）；药物＋卵白蛋白组动物用卵白蛋白液激发后均出现过敏反应，并且部分动物出现极强阳性致死亡（见表4）；药物＋卵白蛋白组存活动物再次用卵白蛋白液激发后，动物无明显过敏反应发生；阳性组存活动物再次出现过敏反应（见表5）。

3 讨论

本研究对豚鼠全身主动过敏试验的供试品均先做了急性毒性试验，确保过敏试验动物在激发注射后所产生的反应不是供试品毒性作用引起的。本研究对两种药品进行了溶血与凝聚试验，注射用炎琥宁7mg／mL、注射用阿奇霉素5mg／mL，恒温3h均未产生溶血与凝聚作用，结果表明小于该浓度的药液直接静脉使用不会引起动物发生溶血与凝聚作用。性别试验表明，豚鼠的性别与过敏反应发生率并无明显相关性；但本研究所用的过敏原卵白蛋白的剂量较大，能使动物发生强烈的过敏反应，当过敏原剂量较小，刚能引起动物轻微过敏反应时，是否会发生因动物性别不同而过敏反应发生率不同的现象，值得研究［4］。本研究进行了药物中添加与不添加过敏原试验，目的为：1）考查添加已知的过敏原是否会引起药物过敏反应发生率增加；2）如果添加过敏原对药物过敏试验无影响，能否在常规检验时将药物组与阳性对照组合二为一，节约动物使用数量。添加与不添加过敏原的试验结果表明，添加的过敏原－卵白蛋白对注射用炎琥宁和注射用阿奇霉素的过敏试验无影响，但用卵白蛋白液激发时过敏反应程度与阳性组比较有明显差别，可能是这两种药物对混合于供试液中的卵白蛋白有分解或破坏作用，导致供试液中卵白蛋白量减少，因此添加卵白蛋白组动物的致敏效果不如阳性组好。本研究的结果并不能说明其他药物中添加过敏介质，或炎琥宁和阿奇霉素中添加其他过敏原对药物的过敏试验无影响。本研究对激发后3h未死亡的动物进行了再激发，主要是考查当提高激发量时，会不会使动物过敏反应更强烈，结果阳性组动物再激发后又出现了剧烈的过敏反应，表现出过敏反应与激发量多少有正相关性，这与笔者以前的研究结果一致。而添加过敏原的药物组却未出现这种情况，表明过敏反应是否出现，除了与激发量有较大关系外，还与致敏量有较大关系，提示我们在进行过敏试验时，无论是致敏还是激发，试验剂量都要尽可能的大［5］。

目前，有部分血管内使用药品进行安全性试验或按标准进行检验时动物均未出现过敏反应，但临床应用时却有过敏现象发生，是否是动物的试验剂量或标准中规定的检验剂量偏小造成的，值得我们研究。

［1］中华人民共和国药典委员会.中国药典（一部）［S］.2005年版，北京：化学工业出版社，2005，附录116.

［2］化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则课题研究组.化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则［S］.国家食品药品监督管理局，2005，3：5，18.

［3］张德波，杨幼琪，冯诚，等.过敏反应与致敏剂量和致敏时间的关系研究［J］.中国药品标准，2007，8（3）：18－20.

［4］张德波，蒲旭峰，杨奎，等.豚鼠过敏试验方法探讨［J］.中国药品标准，2009，10（2）：112－116.

［5］杨伟峰，余学钊，何萍，等.丹参滴注液及其组分致豚鼠过敏反应的实验研究［J］.中国中药杂志，2012，37（13）：1894－1897.