乌鲁木齐无偿献血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV检测结果分析*

周丽君 郭伟鹏 王丽鸿 李旭(乌鲁木齐市血液中心，新疆 乌鲁木齐 830000)

输血除能治疗疾病外，也可能引起患者一些不良反应和并发症，最重要的是血液或者血液制品中易携带并传播多种病原体，使人类在接受输血时也遭受着感染其他病毒性疾病的危险，HBV、HCV、HIV是输血传播疾病中感染率最高、危害最为严重的3种病毒［1］，严重威胁我国输血安全，因此输血相关传播病原体的预防和控制特别是预防经输血传播病毒已经成为全世界关注的焦点，目前检验方法是ELISA和NAT，ELISA是卫生部规定的双筛检测方法，NAT不是卫生部规定的检测项目，本中心前期申请了基金项目，使用NAT进行检测，取得了相应的成果［2］。新疆位于祖国西北，经济相对落后，民族众多，各族人民大杂居、小聚居，人员素质参差不齐，对传染性疾病的预防和控制相关知识匮乏，乌鲁木齐是乙型肝炎、艾滋病高发地区，而且艾滋病感染者向一般人群传染呈上升趋势［3］，存在较高的输血风险。血液中心对献血者血样进行HBV、HCV和HIV的高灵敏度、高特异性检测是防止医源性感染的重要途径，将检测ELISA和NAT结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2011年3月～2011年10月本中心无偿献血者14 696例;其中男性8 692例，女性6 004例，年龄范围18～55岁，平均27.7岁，为保护献血者隐私所有标本均采用13位数条码。

1.2 试剂和仪器 质控品来自卫生部临床检验中心。ELISA用2种不同试剂厂家检测2遍。HBsAg(上海科华;北京金豪);抗-HCV(北京万泰;北京金豪);抗-HIV(北京万泰;生物梅里埃);HBV-HCV-HIV荧光PCR(上海科华)。加样枪、生物安全柜、离心机、STAR全自动加样仪、FAME全自动酶免分析仪、核酸提取仪器、荧光PCR、仪冷藏柜。

1.2 血清学检测 献血者血液标本按照卫生部要求HB-sAg、抗-HCV、抗-HIV用ELISA方法检测检测2遍，前处理用全自动加样仪(STAR)进行加标本、阴性对照、阳性对照、标准质控品，使用1次性加样尖，避免污染;后处理用全自动酶免分析仪(FAME)检测，所有试剂和标本均扫描条码。结果均阳性、或1种试剂检测结果阳性用该种试剂双孔复测试管和血辫，仍至少1孔阳性、HBsAg、抗HCV设立80%的灰区，抗HIV设立70%的灰区，均按照阳性处理。

1.3 NAT检测 病毒核酸提取采用磁珠分离、纯化技术，磁珠法提取核酸具有操作简便、所需时间短、易于自动化、对核酸标本的回收率高和纯度好等优势;扩增检测采用荧光TaqMan PCR探针技术，HBV-HCV-HIV单人份检测。

1.4 病毒核酸提取 病毒核酸提取采用磁珠法。在加有去抑制剂磁珠溶液混合物的核酸提取模板1各孔中依此从A1至H1，A2至H2以此类推，加入100 μL待测标本，再加入130 μL已加入内标的裂解液，将板1～5按照程序提示放入KHB DP-1000磁珠分离仪，进行分离、清洗和洗脱。裂解:破碎病毒蛋白外壳释放核酸;分离纯化:将模板从裂解液中分离提纯，去除杂质。加入裂解液释放标本中的核酸后，核酸会和包裹有二氧化硅的磁珠微粒相结合，通过特制的磁棒吸附、试剂溶液置换和释放磁珠，从而实现核酸的纯化，避免了人工操作液体处理的过程，提高了自动化程度和准确程度。

1.5 扩增检测 核酸扩增利用体外合成的方法，把待检基因大批量复制后检测，取试剂盒中HBV、HCV、HIV项目的PCR 反应液A、PCR 反应液B、PCR 反应液C，按A∶B∶C=8∶6∶1，用移液器分装至PCR反应板各孔中，每孔15 μL，再加入15 μL已处理好的模板标本，贴上盖膜后转移到扩增检测区，使用A7500荧光PCR扩增仪进行扩增检测，指导特定的DNA序列合成，并使该区段迅速得到大量扩增，利用温度的升降来控制DNA的变性和复性;变性(92～94℃)，高温使DNA变性，即双链DNA解链为单链;退火(40～60℃)温度降低，使引物和DNA片段结合复性;延伸(72℃)，以引物片段为启动片段，在DNA聚合酶和dNTPs存在下、完成基因片段的延伸，一般进行25～40个循环，每一循环可以使靶序列增加1倍。

1.6 结果判断 每个反应管内的荧光信号到达设定的域值线时所经历的循环数被称为Ct值(threshold value)。检测标本CT值＜40.0者判为阳性;CT值≥55.0的标本判为阴性;CT值在40～50的标本为灰区标本，重新测量，并以重测结果为准。

1.7 统计方法 所有数据采用SPSS17.0统计软件进行分析，数资料检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果(表1～2)

表1 不同性别、年龄、民族与学历HBV、HCV、HIV阳性率比较

表2 不同献血次数HBV、HCV、HIV阳性率比较

3 讨论

ELISA与NAT检测HBV、HCV、HIV阳性标本共154例，阳性率1.05%，阳性率显著高于北京、昆明、杭州等地［4，5］，ELISA检测阳性共152例:HBsAg阳性率为0.52%，抗-HCV阳性率为0.37%，抗-HIV阳性率为0.16%。NAT检测阳性共71例:HBV DNA阳性率0.22%，HCV RNA阳性率为0.18%，HIV RNA阳性率为0.10%;检测结果与ELISA不完全一致，因为这2种方法检测原理不同;虽然本地区HBV在采血前用“金标法”已经筛查，但是ELISA阳性比例还是很高;同时有2例HBsAg检测阴性，HBV DNA检测阳性经过追踪分析［9］，是“窗口期”和隐匿性乙型肝炎的感染，说明乌鲁木齐地区乙型肝炎的预防和控制是重要的公共卫生问题之一。不同性别、年龄、民族、学历、献血次数的阳性率进行比较，说明不同性别、年龄献血者阳性率比较(P＞0.05);不同民族献血者阳性率比较(P＜0.01)，由于部分少数民族对传染病知识了解匮乏，同时，也可能与资料的标本数有关，少数民族标本量较小，不能够很真实地反映总体情况。此外，乌鲁木齐居住着汉、维吾尔族、回、哈萨克、蒙古等13个民族，少数民族人口占26.87%［10］，维吾尔民族中Rh阴性所占比例较高，而乌鲁木齐地区临床医疗机构70%的维吾尔族患者来自于南疆、北疆地区，造成RH阴性血的供不应求，此外，本研究献血者中少数民族所占比例为13.19%，其中维吾尔族为5.19%，回族6.95，哈萨克族0.69，主要原因可能是少数民族对于献血知识了解少，语言交流少数困难等，少数民族特别是维吾尔族无偿献血工作应该着力加强。不同学历的阳性率显示结果有统计学意义，中专、大专献血者所占比例较大，是主力军，与西安地区无偿献血者结果一致［11］。学历高的阳性率较低，文化程度越高者，综合素质也越高，掌握医学相关知识相对就越多，对无偿献血理解能力越强。献血次数的阳性率有差异，献血次数越多，阳性率越低，这和很多地区的研究结果均一致，重复献血者阳性率显著低于首次献血者，献血次数≥2次的无偿献血者，其血液检测不合格率明显低于初次献血者，本研究献血次数4次以及以上者，阳性率为0。因此，采供血机构要大力加强无偿献血的宣传力度，最大限度地把初次献血者发展成为重复、固定的无偿献血者，这就要求采供血工作人员的以优质服务和感恩的心来赢得献血者的信任，并且贯彻到献血前咨询、采前、采中、采后的护理、回访，加深与献血者的沟通。因此，招募一支低危的、固定的无偿献血者队伍会提高输血安全，降低输血疾病残余风险。

［1］ 高峰.临床输血与检验.2版，北京:人民卫生出版社，2007:220-240.

［2］ 周丽君，李旭，姚华.乌鲁木齐地区无偿献血者HBV核酸检测结果分析.中国输血杂志，2013，26(3):149-151.

［3］ 谭晓华，郭淑霞，张景玉，等.新疆某市暗娼人群艾滋病相关知识和行为调查.中华预防医学杂志，2011，45(4):369-370.

［4］ 张磊，戴苏娜，张荣华，等.北京地区无偿献血前后血液检测结果分析.中华医院感染学杂志，2009，19，(12):1524-1526.

［5］ 任芙蓉，王憬惺，赵海燕，等.我国5城市合格献血者血液HIV及HCV残余风险研究.中国输血杂志，2007，20(6):469-475.

［6］ 周丽君，姚华，郭伟鹏.乌鲁木齐无偿献血者HBsAg阴性HBV DNA阳性的追踪分析.中国卫生产业，2012，9(2):91-92.

［7］ 乌鲁木齐年鉴，新疆人民出版社.2004，

［8］ 吴霞，陈纲.西安市无偿献血人群分布特点及结构分析.中国医师杂志，2003，5(8):1144-1145.