RP-HPLC法测定槐角丸中柚皮苷的含量

李学红 巩长芹 周利章

（临沂市药品检验所，山东 临沂 276001）

RP-HPLC法测定槐角丸中柚皮苷的含量

李学红 巩长芹 周利章

（临沂市药品检验所，山东 临沂 276001）

目的建立RP-HPLC法同时测定槐角丸中柚皮苷含量的方法。方法色谱柱： ZORBAX SB-C18柱，流动相：甲醇-1%冰醋酸（37.5∶62.5）；检测波长283nm；柱温：35℃。结果柚皮苷进样量在0.1012～0.7591μg（r=0.99999）范围内线性关系良好；平均回收率为97.0%，RSD为0.62%。结论该方法简便、快速、准确，适用于槐角丸中柚皮苷的含量测定。

高效液相色谱法；柚皮苷；含量测定；槐角丸

槐角丸[1]收载于《中国药典》2010年版一部，由槐角（炒）、地榆炭、黄芩、枳壳（炒）、当归、防风六位药材组成。具有清肠疏风，凉血止血之功效。主要用于血热所致的肠风便血、痔疮肿痛。药典规定含量测定以黄芩苷为指标成分，枳壳的含量未作规定，亦未见有关文献报道。本文采用RP-HPLC法测定枳壳中柚皮苷的含量，方法简便、分离度好，结果准确，适用于槐角丸的质量分析。

1 仪器与试药

Agilent1260高效液相色谱仪（配在线脱气机、G1311C四元泵、G1329B自动进样器、G1315DDAD检测器，美国Agilent公司）；Agilent-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；XS205DU电子分析天平（梅特勒-托利多生产）；KQ3200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；柚皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110722-201111，含量以93.2%计）；槐角丸（西安正大制药有限公司，批号：120403；药都制药集团股份有限公司，批号：100701，120601）；甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇-1%冰醋酸（37.5∶62.5）为流动相，流速为1.0mL/min；柱温为35℃；进样量为5μL。柚皮苷的分离度为2.4；理论塔板为7606。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

精密称取柚皮苷对照品5.43mg，置100mL量瓶中，加50%甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液

取本品适量，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量。过滤，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性溶液

按槐角丸中处方比例精密称取全方中除枳壳以外的其他药材，按“2.2.2供试品溶液”的条件制备成阴性溶液。

2.3 干扰试验

取对照品溶液、供试品溶液、缺枳壳的阴性溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别进样分析。结果在供试品溶液色谱图中，有与对照品柚皮苷保留时间一致的特征峰，保留时间分别为10.20min，阴性溶液无此特征峰，表明阴性样品对所测组分无干扰，见图1。

图1 槐角丸的RP-HPLC法

2.4 线性关系考察

取“2.2.1”项下的对照品溶液2、4、8、10、12、15μL，按“2.1”项下色谱条件，分别自动进样，记录色谱图。以峰面积Y为纵坐标，进样量X（μg）为横坐标作图，得柚皮苷回归方程：Y柚皮苷=1641.2593X-4.4824 r=0.99999，结果表明，柚皮苷进样量在0.1012～0.7591μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

取“2.2.1”项下的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，自动重复进样6次，进样量5μL，记录色谱图。结果柚皮苷峰面积平均值为412，RSD为0.14%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取供试品（批号：120403）溶液，室温下放置，分别于配制后0、2、4、6、8、10、12、24h，进样1次，进样量5μL，记录色谱图。结果柚皮苷峰面积平均值为606，RSD为0.84%，表明供试品溶液24h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

分别精密称取同一批号样品（批号：120403）6份，按“2.2.2供试品溶液”的条件制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别进样，进样量5μL，记录柚皮苷峰面积。结果柚皮苷平均含量为3.70mg/g，RSD为0.13%，表明方法重复性良好。

2.8 加样回收试验

取已知含量的同一批号槐角丸（批号：120403）6份，每份约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，每份分别精密加入柚皮苷对照品。按“2.2.2供试品溶液”的条件制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别进样，进样量5μL，记录色谱图。结果见表1，柚皮苷平均回收率为97.0%，RSD为0.62%。

2.9 含量测定

取3批样品，按“2.2.2供试品溶液”的条件制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别进样，进样量5μL，记录柚皮苷峰面积，按外标法计算含量。结果批号为120403、100701、120601的样品中柚皮苷的含量分别为3.70、3.38、3.39mg/g。

表1 柚皮苷加样回收试验结果（n=6）

3 讨 论

3.1 波长的选择

通过对柚皮苷进行紫外吸收光谱扫描得到柚皮苷在283nm处有最大吸收，因此选择了283nm作为测定波长。

3.2 流动相的选择

参考《中国药典》2010年版一部中橘红颗粒含量测定的流动相[1]，通过调整比例，结果以甲醇-1%冰醋酸水溶液（37.5:67.5）为流动相，峰形好，分离度高，阴性无干扰。

3.3 提取方法的选择

试验中考察了超声20min、30 min、60min，热回流20min、30min、60min，结果发现超声30min与60min，无明显差异；热回流与超声的结果基本一致；因此选择超声30min提取样品，操作简单方便。

[1] 中国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2010：1182-1225.

R927.2

B

1671-8194（2013）16-0115-02