百会透曲鬓对脑出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的影响

2013-06-12邹伟刘思妤韩海伟蒋大伟

上海针灸杂志 2013年11期

邹伟,刘思妤,韩海伟,蒋大伟

邹伟1,刘思妤2,韩海伟2,蒋大伟2

(1.黑龙江中医药大学附属第一医院,哈尔滨 150040;2.黑龙江中医药大学,哈尔滨 150040)

通过观察百会透刺曲鬓针刺法对脑出血急性期模型大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的动态变化的影响,探讨头穴透刺治疗脑出血可能的作用机制。选取60只健康雄性Wistar大鼠,将其中54只随机分为模型组、模型＋针刺组(针刺组)、模型＋茴拉西坦组(西药组)3组。每组再分为出血后1 d、3 d和7 d3个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,制备脑出血(ICH)大鼠模型,剩余6只大鼠作为备用。采取酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中VEGF和ICAM-1水平。针刺组与模型组相比,大鼠血清内VEGF在3 d、7 d均有显著上调(均＜0.05)。针刺组与西药组相比,出血后1 d,西药组对大鼠血清内VEGF上调显著大于针刺组(＜0.05);出血后7 d,针刺组对大鼠血清内VEGF上调显著大于西药组(＜0.05)。针刺组与模型组相比,大鼠血清内ICAM-1在不同时间点均有显著下调(＜0.05)。针刺组在出血后3 d、7 dICAM-1较西药组有显著下调(＜0.05)。百会透曲鬓针刺法可以调整脑出血大鼠血清中VEGF、ICAM-1的含量,是针刺百会透刺曲鬓治疗脑出血的可能机理之一。

针刺疗法;脑出血;穴,百会;穴,曲鬓;脑出血;血管内皮生长因子;细胞间黏附分子-1;大鼠

脑出血(ICH)指原发性非外伤性脑实质内出血,发病率约为每年60～80/10万,在我国约占全部脑卒中的20%～30%[1],是脑血管病中病情较重、发病较急、变化多端的疾病,病死率与致残率均较高。因此,寻找有效的治疗方法显得格外重要。血管内皮生长因子(VEGF)是一种具有肝素活性的生长因子,可以特异性地促进血管内皮细胞增殖,参与血管生成并提高血管通透性,是对血管新生有特异作用的生长因子。细胞间黏附分子-1(ICAM-1)是一种介导细胞相互黏附的膜表面糖蛋白,是一种促炎因子,可导致血管堵塞及损伤,在正常状态下仅有低水平表达。本实验采用自体血注入法制备脑出血大鼠模型,以针刺百会透曲鬓为干预方法,观察针刺后脑出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的变化规律,从脑出血区脑血管修复与损伤的角度,探讨百会透曲鬓治疗脑出血的作用机制,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

健康清洁级雄性Wistar大鼠60只,体重为(350±20)g,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供,实验前适应性饲养l星期。造模前禁食12 h,禁水6 h。将其中54只随机分为模型组、针刺组、西药组3组。每组再分为1 d、3 d和7 d3个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,制备ICH大鼠模型,剩余6只大鼠备用。

1.2 脑出血模型的制备

参照Rosenberg等[2]报道的方法制作ICH大鼠模型,将大鼠用10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉,俯卧位固定于立体定位仪上,取头皮正中,备皮消毒,正中切口,骨膜剥离器剥离骨膜,暴露前囟及冠状缝,取前内点旁开3.5 mm,后O.2 mm定点,用牙科钻钻开直径为1.0 mm的圆孔,深达硬脑膜表面,鼠尾乙醇消毒,距尾端3 cm处剪断鼠尾,用微量注射器取血50mL,将微量注射器固定于立体定位仪上,沿钻孔垂直进针约6 mm,将未肝素化的自体血50mL以25mL/min速度推进尾壳核,留针约2 min,缓慢出针。留针期间乙醇棉球包扎鼠尾断端伤口,术后局部喷洒庆大霉素,用牙科水泥封闭颅骨伤口,缝合头皮,局部皮肤采用碘酚消毒,防止局部感染影响指标观察。

1.3 筛选成功模型的方法

大鼠造模完成待大鼠清醒后,采用Berderson评分法[3]筛选成功模型动物,即轻抓大鼠尾巴,提起高于桌面10 cm,正常大鼠前爪伸直。0分为无神经功能缺损;1分为脑部病变对侧腕关节、肘关节屈曲,肩内收屈曲;2分为上述体征＋向麻痹侧推阻力下降;3分为活动时向麻痹侧打圈(呈追尾状)。以1～3分为准,将不符合者剔除,且增补相应数量大鼠。

1.4 实验动物干预方法

1.4.1 模型组

于ICH造模后,给予类西药组生理盐水1 mL灌胃,每日3次。此外,类针刺组相同捆绑,每日30 min。

1.4.2 针刺组

于ICH造模后,大鼠捆绑固定。采用0.35 mm×25 mm毫针针刺患侧百会透曲鬓穴,取穴方法参照华兴邦等[4]制定的大鼠穴位图谱,进针0.8寸,留针30 min,期间捻转3次,每次5 min,要求以每分钟200转的速度捻针。针刺患侧百会透曲鬓穴,每次30 min,每日1次。此外,给予类西药组生理盐水1 mL灌胃,每日3次。

1.4.3 西药组

于ICH造模后,给予类针刺组相同捆绑每日30 min,并给予茴拉西坦稀释液1 mL灌胃(按人:大鼠体重为200:1配置)治疗,每日3次。

1.5 标本的采集

各脑出血组均于发病后1 d、3 d、7 d抽取大鼠在相应时相点过量水合氯醛麻醉,将大鼠仰卧固定在固定板上,剪去心前区部位的被毛,用碘酒、乙醇消毒皮肤,切开动物胸部,将注射器直接刺入心脏抽吸血液。取血至离心管后,将离心管室温静置1 h,后将其置于4℃冷藏过夜。于次日将离心管取出,于4℃、5000 r/min冷冻离心10 min后将上清液吸至新的离心管。

1.6 指标测定

采取酶联免疫吸附法(ELISA)测定VEGF和ICAM-1水平。应用固相夹心法测定标本中VEGF和ICAM-1水平。先将VEGF和ICAM-1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记的HRP。在经过温育和洗涤,去除结合的酶结合物,然后加入底物AB,与酶结合物同时作用后产生颜色,颜色的深浅和样品中的VEGF和ICAM-1的浓度成正比例关系。