温和灸神阙穴对慢性疲劳大鼠肠道菌群的影响

成泽东,陈以国,张涛



温和灸神阙穴对慢性疲劳大鼠肠道菌群的影响

成泽东,陈以国,张涛

(辽宁中医药大学,沈阳 110032)

观察温灸神阙穴对慢性疲劳大鼠肠道菌群的影响。将40只大鼠随机分为正常组、模型组、人参皂甙组、神阙组,每组10只。用饮食失节加冷水游泳制备慢性疲劳大鼠模型,人参皂甙组采用人参皂甙水溶液灌胃治疗,神阙组采用温灸神阙穴治疗。21 d后采用厌氧及需氧菌选择性培养基测定各组大鼠粪便中典型菌群数量。与正常组比较,模型组菌群数量明显减少(＜0.05);与模型组相比较,神阙组和人参皂甙组菌群数量明显增加(均＜0.05);神阙组与人参皂甙组菌群数量与正常组比较,差异均无统计学意义(＞0.05)。慢性疲劳可引起肠道菌群失调,温灸神阙穴可改善由慢性疲劳引起的肠道菌群失调。

灸法;穴,神阙;疲劳综合征,慢性;肠道菌群;大鼠;艾条灸

慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrom,CFS)是指以慢性疲劳持续或反复发作6个月以上为主要表现,同时伴有低热、头痛、咽喉痛、肌痛、神经精神症状等非特异性症状的症候群。1987年由美国疾病控制中心(CDC)正式命名。目前现代医学对CFS的发病机制不十分明确,临床缺乏有效的治疗药物。灸法作为一种绿色疗法在防治亚健康方面有其突出的优势[1-3]。本实验采用饮食失调加冷水游泳的方法建立慢性疲劳大鼠模型,观察温灸神阙穴对模型大鼠肠道菌群数量的影响,探讨其对CFS的治疗作用及对肠道菌群的调整作用。

1 材料和方法

1.1 实验动物及分组

清洁级SD大鼠40只,雌雄各半,体重为(200±20)g,由辽宁中医药大学实验动物中心提供。

1.2 主要仪器、试剂及药品

艾条(南阳汉医艾绒有限责任公司),人参皂甙散(集安万泰参业生物有限公司),TPY琼脂,MRS琼脂,山梨醇麦康凯琼脂,Pfizer选择性肠球菌(EC)琼脂,高压灭菌器(三洋SANYOMLS-3780),厌氧产气袋,氧气指示剂,2.5 L密封培养罐(三菱瓦斯化学株式会社),JA系列电子天平。

1.3 分组及造模

将40只大鼠随机分为正常组、模型组、人参皂甙组、神阙组,每组10只。参照孟宏[4]等的造模方法,即模型组、人参皂甙组、神阙组采用饮食失节加冷水游泳,单日食大白菜,不限量,双日灌精炼猪油,每日2次,每次2 mL,同时每日在水温21℃左右的水中游泳30 min。

1.4 治疗方法

正常组和模型组不给予任何治疗,每只每日空手抓1次,以保持与两治疗组一致。神阙组和人参皂甙组在造模的同时开始治疗。神阙组大鼠仰卧位固定,选定穴位局部脱毛,点燃直径4 mm的艾条垂直距神阙穴2～4 cm处给予温和灸[5],每日于巳时开始灸10 min,连续21 d。人参皂甙组采用人参皂甙水溶液(70 mg/kg/d)灌胃治疗,每日1次,连续21 d。

1.5 取材与样品制备

各组大鼠均被迫采取新鲜粪便0.1 g,置于含0.9 mL生理盐水稀释液和玻璃珠的无菌小瓶内(质量浓度为1:10),200次/min振荡15 min。

1.5.1 培养基制备

①66.24 gMRS乳酸杆菌(LBS)选择琼脂溶入1000 mL蒸馏水配比,并用吸管加入1.32 mL冰乙酸,混匀,加热溶解,不停搅拌,冷至50℃,倾注灭菌培养皿备用;②46.4 gTPY双歧杆菌(BS)琼脂溶入1000 mL蒸馏水配比,分装入三角瓶,于121℃高压灭菌15 min,倾入无菌培养皿备用;③58 gPfizer选择性肠球菌(EC)琼脂溶入1000 mL蒸馏水配比,分装入三角瓶,于121℃高压灭菌15 min,倾入无菌平皿备用;④55 g山梨醇麦康凯琼脂溶入1000 mL蒸馏水配比,分装入三角瓶,于121℃高压灭菌15 min,冷至50℃,每20 mL加入0.05%无菌亚碲酸钾溶液1 mL,倾入无菌培养皿备用。

1.5.2 细菌培养

将振荡好的每份标本各取40mL,分别滴种于MRS乳酸杆菌(LBS)选择琼脂培养基、TPY双歧杆菌(BS)琼脂培养基、Pfizer肠球菌(EC)琼脂培养基、山梨醇麦康凯肠杆菌(EMB)琼脂培养基,用L型棒推匀。自高稀释度向低稀释度滴种,进行10倍稀释至10－6,选择10－4～10－6,每个稀释度向相应培养基滴种2滴,滴管液体量为1/47 mL。将滴种好的培养基静止20 min后,将EMB、EC置于37℃的温箱中,需氧培养24 h,BS、LBS放入厌氧罐中,加入厌氧产气袋和氧气指示剂,置于37℃温箱中,厌氧培养48～72 h。

1.6 观察指标

将各组培养基所长益生菌分别溶于4 mL蒸馏水中,采用比浊法使用酶标仪分别计各组菌落OD值,进行组间差异比较。并同时将各组培养生长的细菌革兰染色。

1.7 统计学方法

2 结果

由表1可见,与正常组比较,模型组菌群数量明显减少(＜0.05);与模型组相比较,神阙组和人参皂甙组菌群数量均明显增加(＜0.05);神阙组与人参皂甙组菌群数量与正常组比较,差异均无统计学意义(＞0.05)。

表1 各组大鼠肠道菌群定量检测结果比较(n=10)(±s,lg cfu/mL)

注:与正常组比较1)＜0.05;与模型组比较2)＜0.05

3 讨论

肠道菌群是影响人体健康的重要因素之一,在人体的胃肠道中形成一个十分复杂而又相对稳定的微生物区系。这个区系栖息的微生物种类繁杂,以肠道细菌多见,数量可达1014个左右,它们构成了人体胃肠道的生物学屏障[6]。存在于肠道的典型菌群为乳酸杆菌(LBS)、双歧杆菌(BS)、大肠杆菌(EMB)和肠球菌(EC)等,在一般情况下,这些微生物互相依存,互相制约,维持平衡,保持一定的数量和比例。肠道菌群的正常组合遭到破坏,就会出现胃肠不适等病理表现,久之,便会使消化、吸收功能降低,出现中医学脾虚证的证候,进而导致慢性疲劳的发生;反之,由慢性疲劳造成的脾虚同样可能引起肠道菌群失调。

目前CFS尚无明确的病因病机,故亦无治疗CFS的特效药物。基于多年来对CFS的疲劳和应激学说的研究,采用抗疲劳,抗应激,提高机体免疫力的方法治疗CFS,取得了一些较显著的成效。人参具有促肾上腺皮质激素样和促性激素样作用,在应激过程中能明显提高机体的耐受力。临床观察发现人参具有强心,提高记忆力,增强免疫力,抗辐射,降低胆固醇等功效。从人参中提取出来的人参皂苷粉是一个多糖总成分,对免疫力低下、疲劳、心脑血管疾病、精神疲乏、癌症等都有很好的改善作用。人参皂甙对神经系统具有双向调节作用,能兴奋垂体-肾上腺系统,增强机体应激反应能力,具有抗疲劳、抗休克作用,能提高机体免疫力。而且人参皂甙能提升胸腺T淋巴细胞ConA增殖反应及增强NK细胞活性。所以,人参皂甙为目前公认的抗疲劳、抗应激药物,因此本研究选用人参皂甙散作为阳性对照药。

《厘正按摩要术》:“脐通五脏,真气往来之门也,故曰神阙。”肚脐是主肾交通的“门户”,与人体经脉和五脏六腑有着密切的生理、病理联系。脐又称“环谷”,与腹膜直接相连,与大肠、小肠、肝、脾、胃、胆、胰等中下焦脏腑距离很近。灸神阙穴主要通过艾的温通作用与火的阳热属性刺激穴位,疏通经络,调理脾气,从而达到补虚泻实,调整脏腑阴阳,使人体各种机能趋于平衡,达到康体愈病的目的。

目前大多数中医微生态学研究还是基于药物治疗方面的,如严梅桢等[7]用黄芪水煎液灌喂老龄小鼠,结果表明黄芪能使衰老小鼠紊乱的肠道菌群得以调整。田碧文等[8]选用了15种传统抗衰老中药对双歧杆菌(BS)进行了体外生长促进实验,结果发现刺五加、五味子、宁夏枸杞子及阿胶对婴儿双歧杆菌(BS)有明显的促进作用。本研究发现,神阙灸可增加肠道中双歧杆菌(BS)、乳酸杆菌(LBS)两种厌氧菌的菌群数量;肠杆菌(EMB)、肠球菌(EC)两种需氧菌的菌群数量。说明神阙灸可改善大鼠腹泻症状,调整由慢性疲劳引起的肠道菌群失调。

[1] Huang QF, Wu HG, Liu J,. Bibliometric analysis of diseases spectrum of moxibustion therapy[J]. J Acupunct Tuina Sci, 2012, 10(6):342-348.

[2] Zeng R, Tang JL. Clinical study on tuina and moxibustion for chronic fatigue syndrome[J]. J Acupunct Tuina Sci, 2012, 10(5):296-299.

[3] Sun DL, Zhang Y, Chen DL,. Effect of moxibustion therapy plus cupping on exercise-induced fatigue in athletes[J]. J Acupunct Tuina Sci, 2012, 10(5):281-286.

[4] 孟宏.电针对慢性应激疲劳证候模型大鼠神经免疫网络调节机制研究[D].中国优秀博硕士学位论文全文数据库(博士),2003.

[5] 王海军,冀来喜.关于大鼠“神阙”穴的定位[J].针刺研究,2007, 32(5):312.

[6] 高峰.胃肠生物学屏障的分子生态学研究进展[J].阴山学刊(自然科学版),2006,20(1):72-74.

[7] 严梅桢,宋红月,谢念祥,等.衰老动物肠道菌群的变化及黄芪的拮抗作用[J].中国中药杂志,1995,20(10):624-626.

[8] 田碧文,胡宏.阿胶,五味子,刺五加,枸杞对双歧杆菌生长的影响[J].中国微生态学杂志,1996,8(2):11-13.

Effect of Point Shenque Gentle Moxibustion on Intestinal Flora in Chronic Fatigue Rats

-,-,.

,110032,

To investigate the effect of point Shenque gentle moxibustion on intestinal flora in chronic fatigue rats.Forty rats were randomly allocated to normal, model, ginsenoside and Shenque groups, 10 rats each. A rat model of chronic fatigue was made by dietary inadequacy and cold water swimming. The ginsenoside group received an oral gavage of a solution of ginsenoside in water and the Shenque group, point Shenque gentle moxibustion. After 21 days, the number of typical fecal bacterial florae was determined using selective media for anaerobic and aerobic bacteria in different groups of rats.The number of bacterial florae decreased significantly in the model group compared with the normal group (＜0.05). It increased significantly in the Shenque and ginsenoside groups compared with the model group (both＜0.05). There was no statistically significant difference in the number of bacterial florae between the Shenque or ginsenoside group and the normal group (＞0.05).Point Shenque gentle moxibustion can relieve rat diarrhea and redress intestinal flora imbalance.

Moxibustion; Point, Shenque; Chronic fatigue syndrome; Intestinal flora; Rats; Moxa-stick moxibustion

1005-0957(2013)01-0056-03

R2-03

A

10.3969/j.issn.1005-0957.2013.01.056

2012-10-06

辽宁省博士启动基金(20081038);高等学校博士学科点专项科研基金新教师类资助课题(20122133120001)

成泽东(1974 - ),女,教授,博士,硕士生导师

陈以国(1957 - )男,教授,博士,博士生导师,E-mail:chenyi guo@tom.com