骨桥蛋白在胸腺瘤组织中的表达及临床病理意义

林春华，黄 明

（1.赣州卫生学校护理系外科护理教研室；2.赣南医学院第三附属医院泌尿外科，江西 赣州 341000）

骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是在恶性转化的上皮细胞株中发现的一种与肿瘤的发生发展密切相关的磷酸蛋白，表达于多种肿瘤组织中［1-2］。 关于OPN 在胸腺瘤组织中的表达情况的报道尚少。 笔者采用免疫组织化学SP 法检测OPN 在胸腺瘤组织及正常胸腺组织中的表达情况，分析其与胸腺瘤临床病理特征及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集2003 年1 月至2011 年6 月胸腺瘤切除标本的完整病例60 例（资料来源于赣州市人民医院、赣南医学院第一附属医院、赣州市肿瘤医院）。 其中男37 例，女23 例，年龄21～70 岁，平均50.2岁。60例病例术前行胸部高分辨率CT 检查均诊断为前上纵隔肿瘤，均未行放疗和（或）化疗。 术后按Masaoka分期标准［3］分为：Ⅰ期35 例、Ⅱ期14 例、Ⅲ期8 例、Ⅳ期3 例。 根据WHO 胸腺瘤组织分型标准［4］分型：A 型14 例、AB 型23 例、B 型21 例、C 型2 例。取同期18 例正常胸腺组织 （取自心脏病患者手术时）作为对照，其中男10 例，女8 例，年龄35～65岁，平均48.7 岁。

1.2 试剂

一抗兔抗人OPN 单克隆抗体、二抗生物素标记羊抗兔IgG 试剂盒、DAB 显色试剂盒等试剂均购自武汉谷歌生物科技有限公司。

1.3 实验方法

全部标本经10%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋。制成4 μm 厚的连续切片2 张，一张供免疫组织化学染色，一张供HE 染色复核诊断。免疫组织化学采用SP 法，依据试剂盒说明书步骤进行；HE 染色按常规进行操作。

1.4 免疫组织化学结果判断方法

采用双盲法，由2 位病理科高年资医师在光学显微镜下观察免疫复合物沉积部位及免疫反应强度，当细胞膜和（或）细胞质出现棕黄色沉积视作阳性反应。 在400 倍视野下每张玻片选取5 个视野，采用武汉同济千屏病理科图文综合信息管理系统HMIAS-2000 高清晰度彩色医学图文分析系统免疫组织化学测量程序测定阳性颗粒的平均灰度和阳性单位值。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 病理学结果

免疫组织化学SP 法检测显示OPN 主要表达在胸腺瘤肿瘤细胞的细胞膜上和细胞质中，少量弥散表达在炎症细胞、肿瘤周围基质及血管内皮细胞胞质中，见封四图1。

2.2 OPN 在胸腺瘤组织不同分期及不同分型的表达

OPN 在胸腺瘤组织不同分期及不同分型中的阳性表达的差异均有统计学意义（均P＜0.01），见表1—2。

表1 OPN 在胸腺瘤组织不同分期中的表达情况

表2 OPN 在胸腺瘤不同分型中的表达情况

3 讨论

胸腺瘤是成人最常见的前上纵隔肿瘤，约占50%［5］。目前临床主要采用Masaoka 分期法［3］。Ⅰ期：包膜完整，镜下无包膜浸润；Ⅱ期：侵犯周围胸膜或脂肪组织，或镜下包膜浸润；Ⅲ期：侵犯邻近器官(心包、大血管、肺等)；Ⅳa 期：胸膜或心包播散；临床Ⅳb期：淋巴道或血道转移。 其中Ⅰ期为非侵袭性胸腺瘤，Ⅱ—Ⅳ期为侵袭性胸腺瘤。 而组织学分型主要根据2004 年正式的WHO 的胸腺肿瘤组织学分型标准［4］。 A 型：髓质型；AB 型：兼具A 型和B 型胸腺瘤样成分；B 型：混合型（B1 型：皮质为主型，器官样；B2 型：皮质型；B3 型：鳞状上皮样、分化好的胸腺癌）；C 型：胸腺癌。 其中A、AB 型为低度恶性，B、C 型为高度恶性。由于胸腺组织学结构复杂，细胞多样化，单纯从细胞学形态上很难在“腺瘤”和“腺癌”之间划一条泾渭分明的界线。 病理科医生往往需要借助特殊标记物染色的表达情况作为诊断的参考依据。

OPN 是一种相对分子质量约为44 ku 的具有多种生物学功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白。 它有一个N 端信号序列及Gly-Arg-Gly-Asp-Ser 细胞黏附序列，并含有28 个功能结合区，包括钙结合域、凝血酶裂解位点等，这使得其具有多种功能，在细胞的黏附迁移、信号传导及组织修复中发挥着重要作用［6］。OPN 在肿瘤发生、发展和转移过程中有重要的作用，其具体机制可能有以下几个方面：1）通过与其受体-整合素和CD44 结合后发挥作用［7］；2）与血管通透性因子（VPF）/血管内皮生长因子（VEGF）发挥协同作用［8］；3）通过自分泌及旁分泌途径发挥作用［9］；4）通过抑制一氧化氮（NO）的产生，使转移的肿瘤细胞易于存活［10］。

本研究通过免疫组织化学SP 法检测发现OPN主要表达在胸腺瘤肿瘤细胞的细胞膜上和细胞质中，少量弥散表达在炎症细胞、肿瘤周围基质及血管内皮细胞胞质中。 据此笔者推断胸腺瘤肿瘤细胞本身能够产生和分泌OPN［10］，并通过分泌的OPN来改变周围的微环境，促进肿瘤迅速生长和浸润转移；OPN 也可能通过旁分泌方式，作用于血管内皮细胞和周围的基质细胞［11］，促进肿瘤的生长。 本研究结果显示，胸腺瘤组织OPN 的阳性表达高于正常胸腺组织，提示OPN 参与了胸腺瘤的发生；OPN 在不同Masaoka 分期胸腺瘤中的阳性表达的差异有统计学意义，且在分期越高（侵袭性越高）的胸腺瘤组织中表达越多，提示胸腺瘤中OPN 的表达与肿瘤的侵袭性相关；OPN 在不同WHO 分型的胸腺瘤组织中的阳性表达的差异有统计学意义，且在恶性程度越高的胸腺瘤组织中表达越多，提示OPN 的表达与胸腺瘤的恶性程度相关。

综上所述，OPN 可能在胸腺瘤的发生和发展中起重要作用，OPN 可能参与了胸腺瘤的发生、发展。

［1］Rittling S R，Chambers A F.Role of osteopontin in tumor progression［J］.Br J Cancer，2004,90（10）：1877-1881.

［2］张岩,王雪飞,徐枫,等.骨桥蛋白与基质金属蛋白酶9 在子宫内膜病变中的表达［J］.中国医科大学学报，2013,42（1）：49-51,55.

［3］Giaccone G.Treatment of malignant thymoma［J］.Curr Opin Oncol,2005,17（2）：140-146.

［4］Das R，Mahabeleshwar G H，Kundu G C.Osteopontin induces AP-1-mediated secretion of urokinase-type plasminogen activator through c-Src-Dependent epidermal growth factor receptor transactivation in breast cancer cells［J］.Biol Chem,2004,279（12）：11050-11064.

［5］牛会军,赵云平,蒋耀光.胸腺瘤外科治疗进展［J］.重庆医学，2013,42（8）：946-949.

［6］董晓瑜,杨静华,孙翠芬.骨桥蛋白在卵巢上皮癌组织中的表达及其与预后的关系［J］.中国综合临床，2010,26（8）：188-190.

［7］任民柱,杨留勤.骨桥蛋白在肿瘤转移中的作用及机制［J］.实用肿瘤学杂志，2010,24（2）：186-189.

［8］朱白鹭,朱伟锋,唐荣,等.骨桥蛋白与乳腺癌细胞体外形成血管生成拟态的关系［J］.南昌大学学报：医学版,2012,52（12）：13-18,26.

［9］Tracey L，Thomas J.Role of chemotherapy in the nlanagement of advanced thymic tumors［J］.Semin Thorac Cardiovasc Surg,2005，17（1）：41.

［10］印洪林，周晓军，盂奎，等.胸腺癌与B3 型胸腺瘤的临床病理研究［J］.临床与实验病理学杂志，2004，20（2）：152-156.

［11］焦霞，印洪林，陆珍凤，等.胸腺肿瘤108 例的病理组织学分型和预后相关性研究［J］.中华病理学杂志，2008，37（7）：445-449.