Folin-Ciocalteu比色法测定安化黑茶中茶多酚的含量

罗 堃，何 群，葛云鹏，谭 琥，邹 龙，彭思源，刘朝勇

（1.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙410208；2.湖南中医药大学科技处，湖南 长沙410208）

安化黑茶具有抗衰老、抗辐射、抗癌、降血压、降低胆固醇、助醒酒、促消化、减肥、抑制动脉硬化等作用[1]。茶多酚是黑茶中的一类重要化学成分。现代研究表明，茶多酚具有抗氧化、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、调血脂、降血糖、护齿和抑菌等多种作用，它在食品、医药、日化、保健等方面具有广泛的应用前景[2]。因此，茶多酚含量是评价黑茶品质的重要指标，建立黑茶中茶多酚含量的测定方法具有重要意义。

目前，用于测定茶多酚含量的方法主要有：滴定法、原子吸收分光光度法、可见分光光度法等[3]。本研究参考GB/T8313-2008，采用可见分光光度法测定黑茶中茶多酚的含量。Folin-Ciocalteu比色法测定其他种类茶叶中的茶多酚含量已有研究，但应用于安化黑茶还未见报道。本研究建立了Folin-Ciocalteu比色法测定安化黑茶中茶多酚含量的方法，为黑茶及其加工品的质量控制提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

HH-600型三用恒温水浴箱（金坛市神科仪器厂）；DZF-6050型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；SP-756型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；AR124CN型电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）。

1.2 材料

没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110831-200302）；Folin-Ciocalteu（FC）试剂（合肥博美生物科技有限责任公司）；甲醇、无水Na2CO3（均为分析纯）；水为蒸馏水；安化黑茶粗粉 (自制，含水量为1.5%，批号分别为20120107、20120110、20120113)。

2 方法与结果

2.1 实验原理[4-5]

碱性条件下，酚类物质中的酚羟基能将Folin-Ciocalteu试剂中的钨钼酸还原，生成蓝色配合物，颜色的深浅与多酚的含量正相关，以没食子酸作对照品，用可见分光光度法测定，以控制茶叶中茶多酚的含量。

2.2 对照品溶液的制备

取没食子酸对照品约0.05 g，精密称定，加甲醇溶解，定容至50 mL，即得（浓度为0.098 6 mg/mL）。

2.3 供试品溶液的制备

取安化黑茶粗粉（过4号筛）约0.2 g，精密称定，平行操作3份，置于离心试管中，加入预热至90℃的水5 mL，90℃水浴保温15 min，每隔3 min振摇1次，放冷，3 000 r/min离心10 min，取上清液，重复操作2次。合并3次上清液，滤过，精密量取滤液1 mL于100 mL量瓶中，加水定容至刻度，即得。

2.4 标准曲线的建立

分别精密量取0.5、1、2、3、4、5 mL对照品溶液置于6个100 mL量瓶中，加甲醇稀释，即得4.93、9.86、19.72、29.58、39.44、49.30μg/mL的 没 食 子 酸对照品溶液。再分别精密量取上述溶液和水各1 mL于10 mL具塞试管中，分别加入5 mL 0.2 mol/L FC试剂，振摇5 min，然后加入4 mL 7.5%Na2CO3溶液，振摇，25℃下分别反应60 min后于765 nm处测定吸光度。以没食子酸浓度（C）对吸光度（A）作标准曲线，得回归方程为：

提示没食子酸浓度在0.49～4.9μg/mL范围内与吸光度的线性关系良好。

2.5 重复性试验

取同一批（批号为20120107）安化黑茶粗粉约0.2g，精密称定（平行6份），按照“2.3项”方法制备供试品溶液后，精密量取3 mL置于100 mL量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。再精密量取1 mL置于10 mL具塞试管中，按照“2.4项”下方法显色后测定，按标准曲线法计算黑茶中茶多酚含量。计算，得该批黑茶（按干品计）中茶多酚含量按没食子酸计[6]的平均含量为2.49%，RSD=2.6%。

2.6 加样回收试验

取同一批（批号为20120107）安化黑茶粗粉约3 g，精密称定（平行6份），置100 mL锥形瓶中，分别加入一定量的没食子酸对照品，按“2.3项”下方法制备供试品溶液后，再按“2.5项”下方法进行样品处理、测定、计算结果（见表1）。茶多酚平均回收率为98.0%，RSD=1.4%，说明本方法结果准确可靠。

表1 加样回收率试验结果

2.7 安化黑茶中茶多酚的含量测定

分别取3批安化黑茶粗粉约0.2 g，每批平行3份，依法测定，计算茶多酚含量。测得3批黑茶中茶多酚的平均含量（按没食子酸计）为2.49%，RSD=1.3%，说明安化黑茶的质量稳定。

3 小结

3.1 测定条件和结果

本研究参考国家标准GB／T8313-2008中收载的茶叶中茶多酚的检测方法，以没食子酸为替代对照品，研究了FC试剂、7.5%Na2CO3溶液的用量和反应时间对显色反应的影响以及吸收曲线，确定了安化黑茶中茶多酚含量测定的最佳条件为：0.2 mo1/L的FC试剂5 mL，7.5%Na2CO3溶液4 mL，25℃反应1 h后于765 nm处测定吸光度。没食子酸浓度在0.49～4.9μg/mL范围内与吸光度的线性关系良好，平均回收率为98.0%，RSD为1.4%。测得3批安化黑茶茶多酚的平均含量 （按没食子酸计）为2.49%，RSD为1.3%。该方法准确、可靠，可用于黑茶及其加工品中茶多酚的质量控制。

3.2 对照品选择的依据

茶多酚是一系列化合物的混合物，目前经分离鉴定的化合物就达100多种，使得很难找到1种合适的对照品。因没食子酸具有和茶多酚类似的多酚结构，而且对照品价廉易得，显色反应稳定可靠，方便采用。故本研究以没食子酸作为替代对照品，采用操作简便的比色法测定了黑茶中的茶多酚含量，同时也为其他含有多酚类成分的药材的质量控制提供了参考。

[1]何煜波，姜爱丽，胡文忠，等.黑茶加工工艺与保健功能研究[J].安徽农业科学，2012，40（27）：13 595-13 597.

[2]何 健，印 伟.茶叶中茶多酚的提取工艺及其含量测定[J].中国药业，2011，20（13）：31-32.

[3]黄 皓，毛志方，涂云飞，等.两种方法测定茶叶中茶多酚含量的比较[J].中国茶叶加工，2009（2）：43-44.

[4]罗杨合.Folin-Ciocalteu法测定马蹄皮中多酚的含量[J].湖北农业科学，2009，48（9）：2 447-2 449.

[5]周顺珍，周国兰，何 萍，等.不同测定方法对绿茶中茶多酚含量测定结果的影响[J].化学分析计量，2011，20(1)：88-89.

[6]中国国家标准化管理委员会.GB/T8313-2008茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法[S].北京：中国标准出版社，2008：3-5.