CD14基因多态性与维吾尔族人群支气管哮喘的相关性研究

夏 宇 闫 芳 齐曼古力•吾守尔 何元兵 米合热古力•司马义 杨增荣 王 晶 文 进

CD14基因多态性与维吾尔族人群支气管哮喘的相关性研究

夏 宇1闫 芳1齐曼古力•吾守尔1何元兵1米合热古力•司马义1杨增荣1王 晶1文 进2

目的探讨CD14基因启动子区-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三个SNP位点的多态性和新疆维吾尔族人群支气管哮喘（简称哮喘）的关系。方法126例明确诊断的哮喘患者为哮喘组，按1：1配对法收集同性别、族别、居住地、年龄（相差5岁以内）的健康体检者为对照组。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测各组-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位点的多态性。结果CD14基因中-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三个SNP位点基因型频率和等位基因频率在哮喘组和对照组的分布差异无显著性（P＞0.05）。-159T/C和-1145G/A位点等位基因频率在维吾尔族、汉族和高加索人群总体分布上差异有统计学意义（χ2=11.295，P=0.004和χ2=13.029，P=0.001）。结论CD14基因-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三个SNP位点基因型频率和等位基因频率分布与维吾尔族人群哮喘无直接关联。

支气管哮喘；白细胞分化抗原14基因；维吾尔族；基因多态性

白细胞分化抗原14（Cluster of Dieffrentiation Antigen,CD14）属于细胞表面糖蛋白的家族成员之一，既是单核细胞分化的一种标记，也是针对微生物以及其它内、外源性应激因子的先天性免疫应答过程中的一种重要的模式识别分子，能与革兰氏阴性菌内毒素脂多糖（LPS）或脂多糖-脂多糖结合蛋白（LBP-LPS）复合物相结合，介导LPS激活靶细胞，并释放多种炎性细胞因子，从而在炎症和感染性疾病的发生、发展过程和调控中发挥重要作用[1]。本研究采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法，拟探讨CD14基因多态性与维吾尔族哮喘患者发病间的关系，在不同民族、人群中阐明基因型与哮喘的联系，为揭示哮喘的发病机制提供一定的理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料在新疆医科大学第一附属医院就诊并明确诊断的126例维吾尔族哮喘患者，其中男66例，女60例；年龄16～79岁，平均年龄（41.06±9.75）岁。按1：1配对原则，选择同性别搭配、同族别、年龄（相差在5岁以内），与患者无血缘关系，无特应疾病史及慢性呼吸系统病史的健康体检者。研究对象均为长期居住在新疆地区，三代或三代以上未与其他民族通婚的维吾尔族人。所有研究对象受检个体均签署知情同意书。采集研究对象外周静脉血5ml，用枸橼酸钠抗凝，迅速（2h内）放入-70℃冻储，用于提取白细胞DNA。肺功能测定严格按照操作常规及程序进行。哮喘组依据中华医学会呼吸学会2008年制定的支气管哮喘防治指南[2]诊断标准中的定义、诊断、严重程度分级进行分类。

1.2 方法CD14基因分型：按常规酚/氯仿抽提核酸法提取DNA。序列数据来源NCBI的可用数据库http：//www.ncbi.nlm.nih.gov。引物由上海生工生物有限公司合成。CD14基因3个SNP位点引物序列、PCR扩增、各个片段对应的限制性内切酶及扩增产物大小，见表1。

表1 CD14基因SNP位点PCR引物序列、扩增产物、限制性内切酶及酶切产物

1.3 统计学处理采用SPSS 16.0软件进行统计学数据处理。两组基因频率使用χ2检验以确认是否符合Hardy-Weinberg平衡；组间比较采用χ2检验；关联程度用OR及95% CI表示。检验水准ɑ=0.05。

2 结果

2.1 CD14基因Hardy-Weinberg平衡定律的检验维吾尔族人群哮喘组和对照组3个研究位点均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律（P＞0.05），具有群体代表性。

2.2 CD14基因基因型分布及等位基因分布频率比较两组CD14基因-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位点三种基因型分布比较，差异无统计学意义（χ2=0.104，P=0.949；χ2=0.444，P=0.801和χ2=0.182，P=0.913）。两组三位点等位基因频率比较，差异无统计学意义（χ2=0.073，P=0.787；χ2=0.410，P=0.522和χ2=0.171，P=0.679），见表2。

表2 CD14基因三位点基因型分布频率及等位基因频率比较(n,%)

2.3 CD14基因-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位点等位基因频率与不同人群、种族的比较分析将研究的新疆维吾尔族人群在CD14基因启动子区-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位点等位基因频率与中国汉族人群、白种人群比较后发现，-159T/C位点等位基因频率在上述三组人群总体分布上差异有统计学意义（χ2=11.295，P=0.004），进一步两两比较发现，维吾尔族人群-159T/C位点C等位基因频率（44.0%）和中国汉族人群（42.9%）低于白种人（54.0%），（χ2=6.766，P=0.009和χ2=8.113，P=0.004）；该位点等位基因频率在维、汉两民族之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。-1145G/A位点等位基因频率分布在吾尔族人群、汉族人群和白种人中比较差异有统计学意义（χ2=13.029，P=0.001），进一步两两比较发现，维吾尔族人群-1145G/A位点A等位基因频率（40.1%）与中国汉族人群（33.8%）或白种人（45.4%）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。-1359G/T位点等位基因频率在上述三组人群总体分布上差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

3 讨论

CD14基因位于第5号染色体长臂3区1带-长臂3区3带，其中包含有许多与变应性疾病、哮喘、气道高反应（BHR）相关的候选基因[3-4]。已有研究表明，在美国人群[5]、捷克人群[6]、拉丁美洲人群[7]、日本人群[8]和韩国人群[9-10]的研究中均发现CD14基因启动子区的多态性与哮喘及过敏性疾病相关联。而在德国[11]、波兰和高加索儿童[12-13]的研究中却未得出相似结论。我国有研究显示，CD14-159T/C多态性与中国部分地区儿童先天性过敏患者T-IgE水平互相关联，提示其是中国人群过敏性疾病的遗传易感因素[14]。但最近一项针对温州儿童CD14基因启动子区的研究并未显示出-159T/C位点多态性与哮喘或T-IgE相关[15]。

表3 三位点等位基因频率在中国维吾尔族、汉族和白种人的比较[n(%)]

我国地域广阔，少数民族数量较多，各地区居住环境及生活习惯差别较大，为进一步探求该基因多态位点与哮喘的关系，选择相对隔离的少数民族群体作为研究对象，其具有较为相似的遗传背景和生活方式，从理论上降低了遗传异质性的影响。研究结果显示，CD14基因中-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三个SNP位点在哮喘组和对照组中的基因型分布经统计学计算，符合Hardy-weinberg定律，证实样本的随机性和遗传背景的统一。新疆维吾尔族人群CD14基因多态性分布频率与中国汉族人群、白种人群分布有所不同。维吾尔族人群-159T/C位点C等位基因频率（44.0%）和中国汉族人群（42.9%）低于白种人（54.0%），但该位点等位基因频率在维、汉两民族之间比较无显著性差异。推测不同群体的遗传结构有所不同，也可能与环境影响有关。当然，还需进一步在大规模的混合群体中证实这种差别是由民族差异还是由群体的结构差异所造成。本研究中CD14基因中-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三个SNP位点基因型频率和等位基因频率分布在维吾尔族人群哮喘组与对照组中均未观察到有差异。研究结果与对德国新生儿进行10年随访观察，对波兰和高加索儿童的研究[11-13]所得结论相似。

在不同种族，不同国家，甚至同一国家的不同地区，CD14基因启动子区多态性的基因型分布与疾病的相关性存在较大差异。寻找不同种族在不同环境下CD14基因多态性与疾病的关系，将有助于深入阐明疾病的发展机制。在条件允许的情况下，笔者还计划在今后的工作中，对新疆汉族哮喘人群以及其他民族进行CD14基因多态位点检测，有助于对上述基因与哮喘的关系进行更深入的了解。

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R562.2+5

A

1673-5846(2013)06-0143-04

1新疆医科大学第一附属医院呼吸一科，新疆乌鲁木齐 830054

2新疆医科大学第二附属医院重症医学科，新疆乌鲁木齐 830028

王晶，副主任医师，副教授。邮箱：zgjkyk2010@126.com。