超高效液相色谱串联质谱测定猪肉中氯丙嗪含量

张絜青 陈 煦 刘 清

超高效液相色谱串联质谱测定猪肉中氯丙嗪含量

张絜青 陈 煦 刘 清

目的建立猪肉样品中氯丙嗪含量的超高效液质联用检测方法。方法使用固相萃取优化前处理条件，采用Waters Acquity TMBEH C18柱，以乙腈-0.2%甲酸水为流动相，TQD串联四级杆，MRM模式检测。结果氯丙嗪的添加浓度分别为0.5、2.0、10.0μg/L，其回收率在75.9%～92.3%，日内RSD均低于10.0%（n=3）。结论本法灵敏、准确、专属性强，可用于猪肉中氯丙嗪的含量检测。

氯丙嗪；超高效液相色谱串联质谱；固相萃取；猪肉

近年来，随着人民生活水平的提高，畜牧业逐渐规范化、商业化，兽药及饲料添加剂在畜牧养殖中得到了广泛的应用，但过度的滥用将直接或间接影响人民身体健康。氯丙嗪（Chlorpromazine）别名冬眠灵、氯普马嗪、可乐静，吩噻嗪类药物，中枢多巴胺受体阻断剂，具有抗精神病、降温、镇吐、催眠、麻醉等药理作用[1-2]，临床上被用作镇静药物，其具有首关消除效应，吸收后95%与血浆蛋白结合，通过肝脏代谢，但因代谢缓慢，易产生体内蓄积残留。动物组织中残留的氯丙嗪进入人体后，能引起白细胞减少和粒细胞缺乏症，给人体健康带来不利影响。针对氯丙嗪含量的检测，文献中常见高效液相色谱法（HPLC）

[3]和气相色谱法（GC）[4]，本文采用固相萃取前处理，超高效液相色谱-质谱联用法（UPLC-MS）测定猪肉样品中氯丙嗪含量，方法快速、高效、准确。

1 实验方法

1.1 仪器和试剂超高效液相色谱-质谱联用仪为ACQUITY UPLC超高效液相色谱系统，ACQUITY TQD串联四级杆质谱，MassLynxTM工作站，12通道固相萃取装置，高速离心机，氮吹仪，电子天平。氯丙嗪标准品购自德国Dr. Ehrenstorfer标准品公司，甲醇为色谱纯，高氯酸，实验用水取自Milli-Q纯水机（Millipore,Bedford, MA,USA,电阻率为18.2MΩ•cm）。

1.2 标准溶液配制标准储备液（100μg•mL-1）：准确称取适量氯丙嗪标准品，用乙腈定容于50mL棕色容量瓶中，配制成100μg•mL-1的标准储备液，-5℃冰箱中保存，有效期6个月。

1.3 色谱条件色谱柱：Waters Acquity TMBEH C18柱，规格为100mm×2.1mm（i.d），粒径1.7μm；流动相：乙腈-0.2%甲酸水，流速0.25mL•min-1，柱温：25℃，进样量5.0μL。

1.4 质谱条件离子源：电喷雾电离（ESI+），检测器为TQD串联四级杆，MRM检测模式，毛细管电压3.2Kv，源温度120eV，脱溶剂气温度300eV，锥孔电压26eV，碰撞能量22eV，12eV，碰撞气流量0.2mL•min-1。

2 猪肉样品前处理

准确称取猪肉样品2.00g，加入20mL乙酸乙酯混合，加入2mL 1mol•L-1氢氧化钠溶液，充分振荡离心后将上清液转入蒸馏瓶，再用10mL乙酸乙酯洗涤重复提取，合并两次上清液，50℃水浴旋转蒸干，用2mL乙腈超声溶解残渣，用4mL正己烷漩涡，弃去上层备用。

用3mL甲醇，3mL水活化C18小柱，将待用提取液1mL上样，分别用3mL 0.02mol•L-1盐酸，3mL 0.1mol•L-1盐酸，3mL甲醇清洗，最后用3mL 2%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液在50℃下用氮气吹至近干，用乙腈定容至1mL，漩涡1min，0.22μm的针头过滤器过滤后UPLC-MS分析。

3 结果

3.1 氯丙嗪色谱质谱检测结果氯丙嗪的总离子流图及各级碎片离子图，见图1，氯丙嗪的保留时间为1.85min，定量离子为319＞86.3。

3.2 回收率实验取兰州市区肉禽市场猪肉为基底，在猪肉中加入盐酸克伦特罗标准对照品，分别配制成浓度为0.5、2.0、10.0μg•L-1的加标溶液，按照样品预处理方法处理样品，每个浓度分别做3个平行，考察不同加标浓度下的回收率，平行测定3次，结果见表1。

表1 加标回收率实验结果[(μg•L-1),%]

3.3 2011～2012年兰州市猪肉中氯丙嗪含量检测结果应用上述检测方法，连续两年对兰州市猪肉中氯丙嗪进行检测，结果见表2。

表2 2011～2012年兰州市猪肉中氯丙嗪含量检测结果(n,%)

图1 氯丙嗪标准品总离子色谱图及碎片离子质谱图

4 讨论

在考察多种溶剂的提取效率后，确定乙酸乙酯的提取效率较高，氯丙嗪的离子化效应较低，流动相加入甲酸后，明显提高了氯丙嗪的离子化效应。加标回收率实验中，目标物的平均回收率在75.9%～92.3%之间，RSD均小于10.0%，同时，随着加标浓度的降低，回收率有所下降，从RSD的结果来看，本方法重现性良好。UPLC/MS法测定猪肉中氯丙嗪含量简单可行，专属性强，为市场肉质品中氯丙嗪监督检测提供了技术支持。

[1] 王贞媛,李丹,夏顺宁.LC/MS/MS法鉴别神速宁胶囊中添加的盐酸氯丙嗪成分[J].中国天然药物,2007,5(3)：219-220.

[2] 黄士新,孙亚云,曹莹.高效液相色谱法测定饲料中的违禁药物氯丙嗪[J].饲料研究,2003(8)：249-251.

[3] 路平,曲志娜,谭维泉,等.气相色谱-质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留的研究[J].中国动物检疫,2006,23(7)：309-311.

[4] 贺江南,雷丽红.固相微萃取-气相色谱法检验盐酸氯丙嗪[J].光谱实验室,2002,19(6)：751-753.

R155.5

A

1673-5846(2013)06-0038-02

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