不同浓度乙醇对灵芝功能成分浸出率的影响*

杨 德周 明郭 鹏李 露薛淑静叶丽秀

（1.湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所，武汉 430064；2.湖北省农业科技创新中心，武汉 430064）

不同浓度乙醇对灵芝功能成分浸出率的影响*

杨 德1周 明1，2**郭 鹏1李 露1薛淑静1叶丽秀1

（1.湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所，武汉 430064；2.湖北省农业科技创新中心，武汉 430064）

借助硅胶薄层平板色谱测定方法探索了不同浓度乙醇溶液对灵芝多糖和三萜溶出效果的影响。结果表明，三萜类成分溶出率与乙醇浓度呈正相关，75°乙醇浸提液中三萜成分含量是30°乙醇浸提液的2倍；浸提液中多糖含量随乙醇浓度提高而降低，30°乙醇浸提液中多糖含量是75°乙醇浸提液的2.9倍。

乙醇浓度；赤灵芝；溶出效果；薄层色谱

灵芝（Ganoderma lucidum）古称瑞草，灵芝属目前已知约有100多种，分布最广的为赤芝，其次为紫芝。灵芝在我国有着悠久的药用历史，药理成分非常多，其有效成分可分为十大类，包括灵芝多糖，灵芝多肽，三萜类，16种氨基酸（其中含7种人体必需氨基酸），蛋白质，甾类，甘露醇，香豆精苷，生物碱，有机酸（主含延胡索酸），以及微量元素Ge、Fe、Mn、Zn等[1，2]。灵芝对人体具有双向调节作用，所治病种包括心脑血管、消化、神经、内分泌、呼吸、运动等各个系统疾病，尤其对肿瘤、肝脏病变、失眠、衰老的防治作用十分明显。最新研究表明，灵芝还具有抗疲劳、美容养颜、防治艾滋病等功效。

“泡酒”是民间常用的灵芝食用方法，但对灵芝功能成分在乙醇溶液中溶出情况的研究较少，本文以灵芝和不同浓度乙醇溶液为原料，研究灵芝功能成分溶出规律，为灵芝产品研发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 灵芝为段木赤灵芝，产自本单位灵芝基地；其他试剂均为分析纯。

1.2 试验方法 不同浓度乙醇溶液配制：利用无水乙醇和蒸馏水配置10°、20°、30°、40°、45°、 50°、60°、70°、75°等9种乙醇溶液。酒精度用酒精计标定，密封备用。功能成分浸提方法：灵芝粉碎后过80目筛，称取10.0 g灵芝粉按料液比1∶20加入配好的不同浓度乙醇溶液，密封以防止乙醇挥发。在室温下浸提，在浸提的24 h、48 h、120 h、168 h分别取样，测定不同溶液中多糖和三萜含量；同时用蒸馏水和无水乙醇以相同料液比浸提灵芝，测定溶液中多糖和三萜成分含量。

1.3 测定方法

（1）灵芝多糖测定采用苯酚-硫酸法。吸取0.5 mL样液，用3倍体积的95％的乙醇混合，静置一夜沉淀粗多糖，然后于10 000 r/min离心10 min，弃去上清液。不溶物用1.5 mL的蒸馏水洗涤溶解，待测。吸取0.1 mL待测样品，用苯酚-硫酸法测定样品中的多糖含量，计算灵芝多糖提取率。

（2）灵芝三萜测定采用香草醛比色法。吸取样液0.3 mL，置于沸水中挥发溶剂，加入5％香草醛–冰乙酸0.4 mL，高氯酸1.6 mL，迅速混匀，再将试管置于70 ℃水浴锅中加热15 min，取出用冰水冷却至室温，加8 mL乙酸乙酯，迅速混匀，在548 nm处测定吸光值。根据标准曲线求出浸提液中三萜成分的含量，并计算出灵芝三萜提取率。

（3）总色差测定。采用色差计法，以双蒸水为空白对照，不同浸提液色差采用ΔL、Δa、Δb指标表示，总色差为

试样与标样的L、a、b之差，用ΔL、Δa、Δb表示；ΔE表示总色差。ΔL为正，说明试样比标样浅；为负，说明试样比标样深。Δa为正，说明试样比标样红（或少绿）；为负，说明试样比标样绿（或少红）。Δb为正，说明试样比标样黄（或少蓝）；为负，说明试样比标样蓝（或少黄）。ΔE为样品的总色差，ΔE数值越大，说明色差越大。

（4）灵芝酒活性成分硅胶色谱。吸取供试样品3 μL，分别点于同一硅胶薄层板上，以石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸=15∶15∶1为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外灯（240 nm、365 nm）下检视。

2 结果分析

2.1 浸提时间和乙醇浓度对灵芝酒中多糖和三萜含量的影响 如表1所示，浸提时间不同灵芝酒中三萜含量变化不大，浸提24 h与168 h比较无显著差异；乙醇浓度对三萜含量影响较大，随乙醇浓度提高，乙醇溶液中三萜含量不断提高，75°乙醇溶液浸提液中三萜含量是30°乙醇溶液浸提液的2倍。

如表2所示，浸提时间不同灵芝酒中多糖含量变化也不大，浸提24 h和168 h无显著差异；乙醇浓度对多糖含量影响较大，随乙醇浓度提高，乙醇溶液中灵芝多糖含量降低，30°乙醇溶液浸提液中三萜含量是75°乙醇溶液浸提液的2.3倍。

2.2 不同浓度乙醇浸提灵芝色度的变化 由表3可知，不同乙醇浓度，对灵芝酒色度的影响较为明显，在Lab色度系统中，ΔL值变小，表明乙醇浓度越大，颜色变暗；同时Δa由负值变为正值，Δb值不断增大，表明颜色向红色和黄色转变。随乙醇浓度增大总色差增大，颜色加深。

2.3 灵芝酒中活性成分色谱测定 薄层板色谱结果表明（图1、图2），在紫外灯检视下，乙醇浓度越高显示的条带数量越多，30°浸提液中只有2个条带，60°浸提液中有5个条带，表明乙醇浓度提高可提取的成分也增多。

表1 不同浸提时间和乙醇浓度下的三萜提取率

表2 不同浸提时间和乙醇浓度下的多糖提取率

表3 不同浓度乙醇灵芝浸提液色度测定

3 讨 论

灵芝多糖和灵芝三萜是灵芝中具有代表性的功能成分，其中，灵芝多糖具有安神、提高免疫力等作用，灵芝三萜具有保肝作用。灵芝多糖属于糖类物质，具有水溶性，而三萜具有醇溶性。因此，将灵芝泡水饮用，仅能溶出灵芝中多糖等水溶性类成分，而将灵芝泡酒特别是高度酒能够将灵芝中醇溶性成分溶出。本研究发现，无论是泡酒或者泡水，灵芝中有效成分都不能被充分利用。

图1 紫外365 nm检视图

图2 254 nm检视图

研究表明，三萜类成分溶出率与乙醇浓度正相关，75°乙醇浸提液中三萜成分含量比30°乙醇浸提液高2倍；浸提液中多糖含量随乙醇浓度提高而降低，30°乙醇浸提液中多糖含量是75°乙醇浸提液的2.9倍。随浸提液乙醇度提高，浸提液（灵芝酒）颜色加深，在Lab色度系统中，随乙醇浓度提高灵芝酒透明度（ΔL）降低，红色（Δa）和黄色（Δb）部分加强，总色度提高；薄层板色谱结果表明，紫外灯检视下，乙醇浓度越高显示的条带清晰度增强，条带数量增多，30°浸提液中只有2个条带，70°浸提液中有5个条带。因此，在日常生活中食用灵芝，建议先泡水，再泡高度酒，同时多泡几遍方能充分发挥灵芝作用。

[1] 鲍克忠，张文俊.灵芝研究进展[J].中国保健，2007, 15(19): 8-9.

[2] 赵继顶. 中国灵芝新编[M]. 北京: 科学出版社，1989.

“十二五”国家科技支撑计划（2012BAD36B05）；湖北省农业科技创新中心农产品加工分中心（2013-620-007-001）；湖北省公益性科技研究项目（2012DBA18001）。

杨德（1981— ），男，助理研究员，研究方向为食药用菌加工。

**通讯作者：周明（1954— ），男，湖北武汉人，研究员，研究方向为农产品加工与食用菌及其功能食品。