低分子肝素对兔动脉粥样硬化易损斑块模型血清CRP、IL-6的影响

胡大军 刘剑萍 廖 昆 贺立新

(湘南学院心脑血管疾病研究所 郴州市人民医院心内科，湖南 郴州 423000)

炎症反应的激活可能是导致斑块不稳定的主要因素〔1〕，炎症因子可作为动脉粥样硬化疾病的标志物〔2〕。研究显示易损斑块中的炎症因子明显增高〔3〕，同时降低炎症因子可稳定动脉斑块，改善预后。低分子肝素广泛应用于急性冠脉综合征患者，但低分子肝素对易损斑块动物模型中的炎症因子的影响未见报道，本研究探讨低分子肝素在兔动脉粥样硬化易损斑块模型中对炎症因子C反应蛋白(CRP)及白介素-6(IL-6)的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 购入34只雄性纯种新西兰大白兔(湘雅医学院动物学部)，体重2.0～2.5 kg，月龄3～4个月。

1.2 动物模型制作及分组 34只雄性纯种新西兰大白兔饲养两周高脂饲料后，行主动脉球囊内皮拉伤术，参考国内仲琳等〔4〕方法制作动脉粥样硬化易损斑块兔模型。戊巴比妥钠经耳缘静脉注射麻醉，在无菌条件下，于兔股动脉搏动最明显处暴露股动脉，结扎远心端，近心端备用。动脉夹夹住近心端股动脉，靠近远心端结扎处作一动脉切口并导入4F无菌球囊导管，放开动脉夹并收紧下方细线，局部压迫止血，将球囊导管插入15 cm左右，球囊用注射器推注10～15 ml空气，往返回拉球囊3次损伤血管内皮，撤出导管和导丝，结扎股动脉并缝合伤口。阴性对照组麻醉固定，备皮，无菌条件下，暴露股动脉，但不作动脉切口，直接缝合皮肤。

触发易损斑块:动脉粥样硬化模型制作成功后连续2 d分别给予2次药物触发，中国斑点蝰蛇毒(CRVV)0.15 mg/kg腹膜下注射，30 min后耳缘静脉注射组胺0.02 mg/kg。对照组处理同上，动脉粥样硬化组按上述给药时间和部位给予同等剂量无菌生理盐水注射。

34只易损斑块模型兔为易损斑块组(其中死亡3只)随机分为易损斑块模型对照组(n=7)、低分子肝素治疗组(n=16)、辛伐他汀治疗组(n=8)。低分子肝素治疗组随机分为B1组(8只)低分子肝素30 U/kg IH q12 h，B2组(8只)低分子肝素60 U/kg IH q12 h。辛伐他汀治疗组灌胃给药5 mg·kg－1·d－1。对照组同等剂量无菌生理盐水皮下注射，q12 h，连续治疗1 w。

1.3 标本收集与检测 模型制作成功后2 d及治疗后1 w空腹抽耳静脉血5 ml，检测血脂、血常规等指标，采用ELISA法检测CRP、IL-6浓度(试剂购于晶美公司)。

1.4 统计学方法 采用SPSS11.0软件。计量数据以表示，组间比较采用t检验，多组间均数比较采用方差分析。

2 结果

低分子肝素、辛伐他汀治疗易损斑块模型组CRP、IL-6的浓度同治疗前比较明显下降，同治疗后易损斑块模型对照组亦明显下降(P＜0.05)。低分子肝素、辛伐他汀治疗易损斑块模型组CRP、IL-6的浓度差异无统计学意义(P＞0.05)，低分子肝素高剂量组CRP、IL-6的浓度较低剂量组下降明显(P＞0.05)。见表1。

表1 药物对兔易损斑块模型中血清CRP、IL-6浓度的影响

表1 药物对兔易损斑块模型中血清CRP、IL-6浓度的影响

与同组治疗前比较:1)P＜0.05;与模型对照组比较:2)P＜0.05，与B1组比较:3)P＜0.05

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3 讨论

CRP是炎症过程中最具有标志性的生化物质，被认为与动脉粥样硬化的发生发展和预后有着密切的关系〔5〕。CRP多方面参与了动脉粥样硬化机制，如能够调节巨噬细胞摄入低密度脂蛋白，有助于泡沫细胞的形成;激活粥样斑块内的补体系统导致斑块不稳定，增强不稳定性斑块的血管活性等。CRP可以直接诱导动脉粥样硬化的发展，因此CRP是心血管疾病的独立危险因素〔6〕。

IL-6是炎症反应中急性期细胞因子基因表达的主要调节因子，通过放大白细胞的集聚而起到对局部炎症的刺激作用〔7〕。IL-6作为炎症和巨噬细胞分化的主要调节因子在炎症前发挥重要作用，促进激活巨噬细胞的分化和浸润，促进泡沫细胞形成。IL-6还可上调黏附分子和其他细胞因子的表达，这些细胞因子可能具有潜在的促进炎症反应的作用。

本研究显示提示低分子肝素可能类似他汀类药物，具有一定的抗炎作用，与国外研究显示低分子肝素具有一定的抗炎特性一致〔8〕。有研究提示低分子肝素抗炎作用可能与以下几个方面有关:①通过抗凝途径介导的抗炎作用;②抗细胞黏附作用;③抗氧自由基作用;④抗脂质代谢紊乱作用;⑤抗细胞增殖作用〔9〕。本研究提示低分子肝素在治疗急性冠状动脉综合征的病人中除了常规的抗凝作用外，同时具有降低炎症因子CRP、IL-6浓度的作用，从而可起到稳定动脉粥样硬化斑块作用，有助于改善疾病预后。为低分子肝素治疗急性冠状动脉综合征提供新的临床用药理论依据。

1 Hansson GK.Inflammation，atherosclerosis，and coronary artery disease〔J〕.N Engl J Med，2005;352(16):1685-95.

2 Kleemann R，Zadelaar S，Kooistra T.Cytokines and atherosclerosis:a comprehensive review o f studies in mice〔J〕.Cardiovasc Res，2008;79(3):360-76.

3 刘剑萍，胡大军，刘庆武，等.炎症因子在兔动脉粥样硬化易损斑块模型中表达研究〔J〕.湘南学院细胞(医学版)，2011;13(4):1-3.

4 仲 琳，张 运，张 梅，等.兔动脉粥样硬化易损斑块模型的建立〔J〕.基础医学与临床，2005;25(4):370-3.

5 Torzewski J.C-reactive protein and atherogenes is:new insights from established animal models〔J〕.Am J Pathol，2005;167(4):923-5.

6 Montecucco F，Mach F.New evidences for C reactive protein(CRP)deposits in the arterial intima as a cardiovascular risk factor〔J〕.Clin Interv Aging，2008;3(2):341-9.

7 Noto D，cottone S，Baldassare Cefalu A，et al.Int erleuk in-6 plasma levels predict with high sensitivity and specificity coronary stenosis detected by coronary angiography〔J〕.Thromb Haemost，2007;98:1362-7.

8 Maciejczyk PM，Polak G，Kotarski JSerum acute phase protein concentrations after hysterectomy with and without low-molecular-weight heparin thrombosis prophylaxis〔J〕.Acta Obstet Gynecol Scand，2005;84(8):752-5.

9 李丹丹，孟建中.低分子肝素的新作用-抗炎/抗细胞黏附机制的研究进展〔J〕.生物医学工程研究，2008;27(2):133-6.