高效液相色谱法测定香砂养胃丸中橙皮苷的含量

刘晓丽 周 清

辽宁省朝阳市药品检验所，辽宁朝阳 122000

香砂养胃丸主要由木香、砂仁、白术、陈皮、茯苓、半夏（制）、醋香附、枳实（炒）、豆蔻（去壳）、姜厚朴、广藿香、甘草十二味中药组成，具有温中和胃的功效。现行质量标准收载于《中华人民共和国药典》（2010年版）一部中[1]，标准中仅有关于厚朴中厚朴酚的测定项目，无主药陈皮中橙皮苷的含量测定。本文建立了高效液相色谱方法测定香砂养胃丸中主药陈皮中橙皮苷的含量测定，方法灵敏度高，重现性好、简单、准确，获得了较好的分离效果，能够更好地控制该药品的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪 （岛津LC-20AT，SIL-20A自动进样器，DGU-20A3脱气机，CTO-20A柱温箱、SPD-20A紫外-可见检测器）。

1.2 试药

橙皮苷对照品（批号：110721-200512，供含量测定用，中国药品生物制品检验所），磷酸酸为分析纯，水为重蒸馏水，乙腈为色谱纯，样品为江苏平光信谊（焦作）中药有限公司提供（批号：090526、090714、091025）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验

色谱注：Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.5%磷酸（20︰80）；检测波长：283 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温，进样量：10 μL。在此色谱条件下，峰形良好，理论板数不低于2 000，分离度大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取橙皮苷对照品10 mg，甲醇溶解并稀释至50 mL量瓶中，摇匀，制成对照品储备液。精密吸取对照品储备液5.0 mL，甲醇溶解并稀至25 mL量瓶中，摇匀，作为对照品溶液[2]。

2.2.2 供试品溶液 取香砂养胃丸样品适量磨碎，称取1.0 g细粉，精密称定，精密加入甲醇25 mL，置具塞锥形瓶中，密塞，称定重量，超声30 min，放冷，再称定重量，减失重量用甲醇补足，摇匀，滤过，即得供试品溶液[3-4]。

2.2.3 阴性样品溶液 按香砂养胃丸中处方的组成比例及制备工艺，制备缺少陈皮的阴性样品，按照“2.2.2”项下方法操作，即得阴性样品溶液。

2.3 阴性干扰试验

按照“2.1”项下的色谱条件，分别取对阴性样品溶液、照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入色谱仪，样品色谱图中，橙皮苷与其他峰分离较好，而阴性样品在橙皮苷出峰处无干扰峰出现，证明该方法可行，见图1。

2.4 线性关系考察

精密量取上述对照品储备液 1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、10.0 mL，用甲醇分别稀释至25 mL量瓶中，摇匀，进样量10 μL，按“2.1”项下色谱条件测定，以浓度X（μg/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标作进行线性回归，得回归方程：Y=6 870.34－5 765.45X，r=0.999 8（n=6），在 8～80 μg/mL 范围内显示有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取批号为090526的供试品溶液10 μL，连续进样6次，测定峰面积，平均峰面积为692 545，RSD=1.12%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验

取批号为 090526 的供试品溶液 10μL，在 0、3、6、12、24 h分别测定峰面积，平均峰面积为691 247，RSD=1.05%，表明本溶液24 h内稳定性良好。

图1 阴性干扰试验色谱图

2.7 重复性试验

取批号为090714的供试品研细，称取约1.0g，精密称定，共取 6 份，按“2.2.2”项下方法制备、按“2.1”项下方法测定，测定结果为：平均每1 g含橙皮苷11.345 mg，RSD=1.24%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.8 回收率试验

称取已知含量的样品1.0 g，批号091025，并精密称定，分别精密加入橙皮苷对照品适量按“2.2.2”项下方法制备成不同波度的溶液，按样品测定方法进行测定，计算回收率，平均回收率为 100.75%，RSD=1.10%（n=6）。见表1。

表1 回收率试验（n=6）

2.9 样品测定

取三批样品研细，称取约1.0 g细粉，精密称定，精密加入甲醇25 mL，置具塞锥形瓶中，密塞，称定重量，超声30 min，放冷，再称定重量，减失重量用甲醇补足，摇匀，滤过，滤液做为供试夜，分别精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液和供试品溶液10 μL注入色谱仪，计算含量。结果三批样品中橙皮苷的含量分别为 12.46、11.71、13.65 mg/g；RSD值分别为0.84%、0.68%、0.62%。

3 讨论

3.1 超声时间的选择

本试验分别考察了超声15、30、45 min的效果，结果表明，超声30 min提取含量较高，故确定甲醇超声30 min为提取条件。

3.2 流动相的选择

通过参考文献，选择甲醇-醋酸-水[1]，乙腈-水[3]，甲醇-水[5-6]，乙腈-0.5%磷酸分别进行实验，最后确定乙腈-0.5%磷酸（20∶80）为流动相，因其能获得较好的峰形、分离效果和较高的柱效。

3.3 色谱柱的选择

选择了三种类型色谱柱进行测试[7-8]，CenturySIL C18（4.6 mm×250 mm，5μm），Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5μm），Kromasil C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）， 确 定 了Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱即能达到较高的柱效和很好的分离效果。

本文建立的HPLC法测定香砂养胃丸中橙皮苷的方法重现性、稳定性好，处理较简单，回收率较好，能够较好的控制药品质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：176-177，899.

[2]邹浪，胡寿荣.反相高效液相色谱法测定复方陈香胃胶囊中橙皮苷含量[J].江西中医药，2010，41（7）：73-74.

[3]汪金玉，陈康，徐小飞，等.高效液相色谱法测定橘核中橙皮苷的含量[J].广东药学院学报，2010，26（5）：501-503.

[4]刘思曼，边清泉，唐英，等.HPLC法测定香砂养胃丸中橙皮苷和柚皮苷含量[J].化学研究与应用，2008，20（9）：1196-1198.

[5]白丽杰，谢丹，陈晓艳.高效液相色谱法测定四季感冒片中橙皮苷含量[J].中国药业，2008，17（24）：25.

[6]张旭君.半夏糖浆含量测定研究[J].现代医院，2012，12（2）：69-72.

[7]周天红.HPLC法测定香砂养胃丸（浓缩丸）中橙皮苷、厚朴酚及和厚朴酚含量[J].中国药师，2011，14（1）：67-68.

[8]王海英，赵建泽.HPLC测定香砂养胃丸中橙皮苷的含量[J].中成药，2005，27（9）：1115-1116.