柔嫩艾美耳球虫洛阳分离株的致病性研究

李葱晓 宋宏晓 王天奇等

摘要：利用人工感染试验，研究柔嫩艾美耳球虫洛阳分离株的致病性。结果表明，随着感染剂量的提高，其死亡率上升，平均增重下降、平均病变记分提高，半数致死量（LD50）为3.248 7×104 个/只。为洛阳地区防控其柔嫩艾美耳球虫所病提供了依据。

关键词：鸡；柔嫩艾美耳球虫；致病性

中图分类号：S852.723 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2013）09-0011-02

鸡球虫病是由艾美耳属球虫中的一种或几种寄生于鸡肠道黏膜上皮引起的一种寄生性原虫病， 以肠道损伤、下痢或血便为特点。它可以引起鸡只死亡、发育停滞、产蛋减少、饲料报酬降低等，给养鸡业造成严重的经济损失。据统计， 球虫病每年给全世界养鸡业造成80 亿美元的经济损失。世界公认的鸡艾美耳属球虫有7种，即柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）、巨型艾美耳球虫（E.maxima）、堆形艾美耳球虫（E.acervulina）、毒害艾美耳球虫（E.necatrix）、布氏艾美耳球虫（E.brunetti）、和缓艾美耳球虫E.mitis、早熟艾美耳球虫（E.praecox），其中柔嫩艾美球虫分布广泛、致病性最强，国内已有31个省（市、自治区）报道有其分布[1]。研究结果表明，不同地区之间的分离株的致病性、耐药性及免疫原性存在一定的差异[2]。为进一步做好洛阳地区鸡球虫病的防控工作，本试验研究了柔嫩艾美耳球虫洛阳分离株的致病性。

1 材料与方法

1.1 球虫卵囊

柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊由河南科技大学动物科技学院寄生虫课程组提供。该虫株是用单卵囊分离技术分离于洛阳地区自然发病鸡 ，临用前在小公鸡体内复壮，采用反复水洗沉淀法分离，之后接种于25 g/L的重铬酸钾溶液中，孢子化后4保存。使用前离心除去重铬酸钾，将卵囊悬浮于生理盐水中，并计数。

1.2 试验用鸡

试验用鸡为海兰褐雏鸡，公母各半，由洛阳市现代化种鸡场提供，出壳后在严格消毒的铁丝笼内饲养，所用器皿经煮沸消毒，饲喂不含任何抗球虫药物的全价饲料，自由采食，饮用凉开水，12日龄时用于致病性试验。试验前连续两天检查粪便无球虫感染。

1.3 人工感染

将试验用鸡逐只称重，根据生物统计分析结果，剔除体重差异显著的个体，逐只带上脚号，随机分为7组，每组 15 只，使每组鸡的总体重大致相等。第Ⅰ至第Ⅵ组为感染组，分别以 2.5×103 、5.0×103 、1.0×104、2.0×104 、4.0×104 、8.0×104 个/只剂量，用长颈吸管经口插入嗉囊接种感染柔嫩艾美耳球虫洛阳分离株孢子化卵囊，第Ⅶ组为不感染对照组。

1.4 致病性观察及评价

接种后每日观测鸡的精神状态、饮食欲，记录最早血便时间、血便堆数及死亡数。感染后 8 d时，将鸡称重、剖杀，取出盲肠进行病变记分，并以组为单位将盲肠内容物匀浆，用 McMasters 法测定每克盲肠内容物的卵囊数（OPG）[2]。盲肠病变记分参照 Johnson和Reid标准[3]，以病变最为严重的一侧盲肠作为评价对象，采用 5 级评分制评分。未见病变为 0 分；肠壁仅有少量散在出血点，壁不增厚，内容物正常为 1 分；盲肠内容物混有少量血液，肠壁稍增厚，内容物正常，记 2 分；盲肠内有多量血液或有盲肠芯（血凝块或灰白色干酪样的香蕉型块状物），盲肠壁肥厚明显，肠腔内粪便含量少，记 3 分；因充满大量血液或肠芯而盲肠肿大，肠芯中含粪渣或不含，记为 4 分，死亡鸡也记 4分。最后以平均增重 、相对增重率、死亡率、平均病变记分、组内盲肠内容物中卵囊数量（OPG）作为评价指标，进行比较和评价，并用寇氏法计算卵囊感染的半数致死量[4]。

2 结果与分析

2.1 临床症状

感染初期，试验鸡精神、饮食欲无明显的异常。感染 72 h 后，6 个感染组鸡均表现为饮食欲减少，羽毛逆立，粪便变稀。感染后 80 h ～96 h 出现便血，血便多见于感染后 5～7 d，其中第 6 天血便最为严重。感染鸡逐渐表现精神萎靡，食欲不振或废绝，渴欲增加，不爱运动， 严重者出现麻痹、痉挛并出现死亡。感染后第 5～7 d均有死亡，但主要集中于感染后第 6 天。第 7 天血便减少，第 8 天末血便停止。不感染对照组试验鸡在整个试验期间未见异常。不同剂量感染鸡的便血及死亡情况见表 1。

2.2 不同感染剂量的致病性

随着感染的剂量的增大，最便血时间有变短的趋势，临床症状表现更为严重（表1）。平均增重随感染剂量的增加而减少，第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组差异不明显（P>0.05），但与其他组均有极显著的差异（P<0.01）。第Ⅰ、Ⅱ组没有死亡，其他感染组死亡率有极显著差异（P<0.01）。第Ⅰ、Ⅱ组病变记分差异不显著，二者均与其他感染组有极显著差异（P<0.01）。不同感染剂量下OPG也有上升趋势（表2）。分离株对试验鸡的半数致死量（LD50）为3.248 7×104 个/只，其 95% 置信限为2.35 2 8×104 ～ 4.485 3×104个/只。

3 小结与讨论

柔嫩艾美耳球虫是危害养鸡业最为重要的寄生虫之一，寄生于盲肠导致明显的血便，并起鸡群大批死亡。随着感染剂量的增加，感染鸡的平均增重显著减少，死亡率明显增加，盲肠的平均病变记分也显著提高，这与黄妮等[1]的研究结果一致。本试验观察了不同感染剂量下的最早便血时间，发现随感染剂量的增加，最早便血时间有变短趋势，这可能与盲肠黏膜上皮细胞所产生的裂殖体数量有关。感染剂量较大，可使有限的盲肠黏膜上皮细胞一次产生数量较多的裂殖体，从而造成较早出现血便。感染剂量较小，盲肠黏膜上皮细胞一次产生的裂殖体数量尚不能致其大面的损伤，待损伤面积增大时，方可出现出血，故而血便出现较晚。因为球虫引起的肠道黏膜出血与裂殖体产生和释放有关[2]，但感染剂量增加不可能导致裂殖体产生时间的提前。球虫引起黏膜出血性病变的量效关系还要进一步研究。

球虫的致病性与多种因素有关[2]，其中，分离株的毒力和感染剂量是最为重要的因素。本试验发现在感染剂量为 2.5×103 个/只和5×103 个/只时，仔鸡没有死亡，而在 1×104 个/只以上时，随感染剂量增加死亡率提高，这与王仲兵[5]等的研究结果一致，所不同的是洛阳分离株的半数致死量（LD50）为3.248 7×104 个/只，明显低于王仲兵等[5]报道的 7.52×104 个/只，说明柔嫩艾美耳球虫洛阳分离株毒力高于山西太谷分离株。本试验结果为洛阳地区预防控制柔嫩艾美耳球所起的鸡球虫病提供基本依据。

参考文献：

[1] 黄 妮，贾燕青，梁武龙，等.鸡柔嫩艾美耳球虫YL株多次传代后的致病性研究[J] .动物医学进展，2011，32（9）：27-29.

[2] 索 勋，李国清.鸡球虫病学[M] .北京：中国农业大学出版社，1998.149-174.

[3] JOHNSON J， REIDW M. Anticoccidial drugs： Lesion scoring techniques in battery and floor-pen experiments with chickens[J]. Exp Parasitol，1970， 28（1）： 30-36.

[4] 周永欣，章宗涉.水生生物毒性试验方法[M] .北京：农业出版社，1989.114-122.

[5] 王仲兵，古少鹏.柔嫩艾美耳球虫的分离鉴定与致病性测定[J].中国动物检疫，2010，27（9）：36-37.