四种兔艾美耳球虫卵囊产量的比较

崔 平，方素芳，顾小龙，索 勋

（1.中国农业大学动物医学院，北京 100094；2.河北北方学院动科院，河北张家口 075000）

兔球虫病（Rabbit coccidiosis）是一类由艾美耳属（Eimeria）及其他属的球虫寄生于家兔肝胆管及肠上皮细胞内而引起的寄生性原虫病［1］。本病流行非常普遍，世界各地均有发生，具有很高的发病率和病死率［2］。随着养兔规模不断扩大，对养兔业的危害也日益严重，尤以断奶至2月龄的幼兔最易感，感染率本研究在对河北省兔球虫流行病学调查基础极高，几乎达100%。

本研究在对河北省兔球虫流行病学调查基础上，分离出致病力强的大型艾美耳球虫、肠艾美耳球虫、黄艾美耳球虫以及致病力中等但感染率很高的中型艾美耳球虫，进一步研究在接种剂量、兔的品种、日龄相同的情况下，卵囊产量和排卵高峰与兔艾美耳球虫虫种关系，以此为兔球虫的研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 无球虫试验用兔 从张家口市实验牧场购买新断奶的塞北兔。单笼饲养于经过火焰消毒过的铁丝笼中，饲喂经过高温处理的自配兔饲料，在饲料中加入莫能菌素，每天用饱和盐水漂浮法检查兔粪中有无球虫卵囊，直至查不到卵囊时开始停药1周，1周内持续检查卵囊有无，确定试验兔不再排出卵囊时进行试验。

1.1.2 主要设备 电热恒温鼓风干燥箱，SPX智能型生化培养箱，双目显微镜，数码相机。

1.2 方法

1.2.1 4种兔艾美耳球虫虫株的获得 兔粪来自张家口、邢台、保定、廊坊、衡水等地区的农户饲养和养兔场的不同日龄兔，采用常规方法处理兔粪，收集卵囊孢子化，在高倍镜下根据形态学特征确定大型艾美耳球虫、肠艾美耳球虫、黄艾美耳球虫及中型艾美耳球虫，分离纯种。无菌接种无球虫幼兔，根据不同种的潜在期收集粪便从而获得4种兔艾美耳球虫的纯种卵囊，培养至孢子化。

1.2.2 试验设计 将培养获得的20只45日龄无球虫兔，雌雄各半，随机分为5组，4个感染组和1个未感染对照组，每组4只，感染组经口接种1×104个卵囊／只。从感染后第4天开始，根据不同种的潜在期，在每种艾美耳球虫排出前1天，每隔2h用饱和盐水漂浮法粪检，直至有卵囊排出，在卵囊排出期间每24h收集粪便1次。

1.2.3 样品OPG的计算 将每天收取的粪便用天平称取2g放入烧杯内，先加饱和盐水10mL，用玻璃棒搅拌均匀后再加入饱和盐水50mL，搅拌均匀，立即用吸管插入液体中央吸取液体，加入麦克马斯板的计数室内，使其充满，置于显微镜下，静置2min后开始计数，不遗漏不重复计数（计数室内1cm2均分为100个小格）刻度中的虫卵总数×200即为每克粪便中的虫卵数。

图1 大型艾美耳球虫Fig.1 E.magna

图3 黄艾美耳球虫Fig.3 E.flavescens

2 结果

2.1 4种兔艾美耳球虫的纯化

根据单卵囊分离的常规方法成功获得大型艾美耳球虫（图1）、肠艾美耳球虫（图2）、黄艾美耳球虫（图3）及中型艾美耳球虫（图4）的纯种。

图2 肠艾美耳球虫Fig.2 E.intestinalis

图4 中型艾美耳球虫Fig.4 E.media

2.2 繁殖力及日排卵量

4种艾美耳球虫的繁殖力及每天的排卵量见表1。肠艾美耳球虫排卵量为365.76×106个，中型艾美耳球虫为317.26×106个、黄艾美耳球虫为304.36×106个，大型艾美耳球虫排卵量为200.12×106个。

2.3 显露期及日排卵囊量占总量的百分率

由于每种球虫的潜在期不同，卵囊排出的时间也不同，其中大型艾美耳球虫在感染后第6.5天有卵囊排出，第 10.5 天达 到高峰 （66.50×106个／只），占总量的33.23%，第11.5天排卵囊量显著减少，并延续至第16.5天；肠艾美耳球虫在感染后第9天有卵囊排出，第13天达到高峰（138.40×106个／只），占总量的37.83%，第14天排卵囊量显著减少，并延续至第20天；黄艾美耳球虫在感染后第9天有卵囊排出，第11天达到高峰（102.80×106个／只），占总量的33.78%，第13天排卵囊量显著减少，并延续至第20天；中型艾美耳球虫在感染后第4.5天有卵囊排出，第6.5天达到高峰（167.8×106个／只），占总量的52.89%，第8.5天排卵囊量显著减少，并延续至第12.5天。各虫株的显露期及每天排卵囊量占总量的百分率详见图5～图6。

表1 4种艾美耳球虫感染后每只兔日排卵囊量Table 1Dairy Oocyst Production every rabbit of the four species of Eimeria ×106个

图5 大型艾美耳球虫与中型艾美耳球虫的繁殖力及日排卵囊量占总量的百分率Fig.5Multiplication rate and the percentage of oocyst production daily for E.magnaand E.media

图6 肠艾美耳球虫与黄艾美耳球虫的繁殖力及日排卵囊量占总量的百分率Fig.6Multiplication rate and the percentage of oocyst production daily for E.intestinalis and E.flavescens

3 讨论

繁殖潜力是以每个卵囊接种到每只兔子的产量为特征的，而繁殖潜力依赖于个体种特殊的生活史，生活史是以无性生殖的代数和以每一代B型裂殖体产生的裂殖子数目为特征的［3］。黄艾美耳球虫、肠艾美耳球虫、大型艾美耳球虫、中型艾美耳球虫无性生殖代数分别为5代、4代、4代、3代，且肠艾美耳球虫配子生殖定位在空肠和回肠后部的隐窝和绒毛内［3］，所以产卵量比其他3个种多。

本试验表明，兔艾美耳球虫繁殖力在不同种间有差异，以1×104个孢子化卵囊／只，感染45日无球虫兔，肠艾美耳球虫排卵量最多3.66×108个／只，与Eckert J等［4］报道的肠艾美耳球虫最大卵囊产量为30×108个／只～50×108个／只结果相差很大，也与Licois D等［5］报道的3×109个／只～7×109个／只有差别，这可能与接种的剂量与兔的个体有关。其次为中型艾美耳球虫3.17×108个／只，与Licois D等［6］报道的中型艾美耳球虫最大卵囊产量为2×108个／只～4×108个／只结果相符。黄艾美耳球虫3.04×108个／只与Eckert J等报道的黄艾美耳球虫最大卵囊产量为25×108个／只～5×108个／只结果相符，张龙现等［7］用感染量1 000个卵囊／只，感染后第9天，均排出卵囊，收集10d～14d排出的所有粪便，共收集到2.26×109个卵囊，分析差别与接种的剂量有关。大型艾美耳球虫排卵量最少（2.00×108个／只）与Eckert J等报道的大型艾美耳球虫最大卵囊产量为1.5×108个／只～3×108个／只结果相符，与Licois D等［8］报道的大型艾美耳球虫原始株最大排卵量为1.7×108个／只相符。不同种繁殖力不同，显露期也不相同，可能与不同的地理株有关。大型艾美耳球虫在感染后第6.5天有卵囊排出，这比蒋金书［9］报道的潜在期为7～8天早半天，排卵持续到第16.5天与蒋金书报道的明显期持续15d～19d相一致；肠艾美耳球虫在感染后第9天有卵囊排出，这比蒋金书报道的潜在期为10d早1d，排卵持续到第20天与蒋金书报道的明显期不超过10天相一致，与殷佩云等［10］报道的排卵持续到第19～20天一致；黄艾美耳球虫在感染后第9天有卵囊排出与蒋金书报道的潜在期为8d～11d相一致，排卵持续到第20天；中型艾美耳球虫在感染后第4.5天有卵囊排出，比蒋金书报道的潜在期为6d～7d早1.5d，排卵持续到第12.5天，与蒋金书报道的明显期持续6d～8d相一致。

就不同种艾美耳球虫每日排卵囊量占总量百分率而言，大型艾美耳球虫在感染后第10.5天排卵量达 到 高 峰 （66.50×106个／只），占 总 量 的33.23%，肠艾美耳球虫在感染后第13天达到高峰（138.40×106个／只），占总量的37.83%，黄艾美耳球虫在感染后第11天达到高峰（102.80×106个／只），占总量的33.78%，中型艾美耳球虫在感染后第6.5天达到高峰（167.8×106个／只），占总量的52.89%。对比4个兔球虫种排卵曲线，黄艾美耳球虫从排卵开始，排卵量就很大，这与黄艾美耳球虫的寄生在盲肠和结肠有很大关系，只要从寄生部位上皮细胞落入肠腔，很快从肛门排出。其他3个种都在空肠和回肠寄生，不会出现这种情况。因此，在虫种传代或疫苗生产时，可在感染后排卵量达到高峰的时间收集卵囊。

［1］孔繁瑶.家畜寄生虫学［M］.2版.北京：中国农业大学出版社，1997：337－341.

［2］施宝坤.江苏省家兔球虫种类调查［J］.南京农学院学报，1981（4）：20－25.

［3］Pakandl M.Coccidia of rabbit：a review［J］.Folia Parasitologica，2009，56（3）：153－166.

［4］Eckert J，Braun R，Shirley M W，et al.Guidelines on teachniques in coccidiosis research［M］.European commission，European Commission Directorate－General Ⅻ，Science，Research and Development Environment Research Programme，1995：63.

［5］Licois D，Coudert P，Boivin M，et al.Selection and characterization of a precocious line ofEimeriaintestinalis，an intestinal rabbit coccidium［J］.Parasitol Res，1990，76：192－198.

［6］Licois D，Coudert P，Drouet－Viard F，et al.Eimeriamedia－selection and characterization of a precocious line［J］.Parasitol Res，1994，80：48－52.

［7］张龙现、张百灵.家兔球虫的单卵囊分离和感染技术研究［J］.河南畜牧兽医，1995，16（4）：5－7.

［8］Licois D，Coudert P，Drouet－Viard F，et al.Eimeriamagna：Pathogenicity，immunogenicity and selection of a precocious line［J］.Vet Parasitol，1995，60：27－35.

［9］蒋金书.动物原虫病学［M］.北京：中国农业大学出版社，2000：212－218.

［10］殷佩云、蒋金书、刘伯义，等.人工感染肠艾美耳球虫致病力研究［J］.中国兽医杂志，1990，30（16）：5－7.