槲皮素与针刺联用对缺血再灌注损伤大鼠的影响

宋 林，张 丽，许 康

(湖北省新华医院 神经内科，武汉 430015)

脑卒中是老年人的常见疾病，具有高发病率、高病死率以及高致残率的特点，严重危害人类健康,给社会和家庭造成了沉重的精神和经济负担。缺血性脑卒中约占全部卒中的75%左右，对其治疗主要集中在促进卒中后神经系统功能的恢复、改善脑部循环、抗氧化自由基损伤、抗兴奋性氨基酸等方面[1-2]。槲皮素是中药中广泛存在的黄酮类化合物，研究[3]证实其具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗肿瘤等功效。传统中医针刺治疗也被认为能够很好的改善脑血管再通(即再灌注)造成的脑神经损伤。本试验研究目的旨在探讨槲皮素与针刺疗法联用在体内对脑缺血再灌注损伤的保护作用及抗炎机制，从而为临床更好的进行脑保护治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料 健康SD雄性大鼠100只，体质量(200±20) g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。槲皮素购自sigma公司；水合氯醛购自上海试剂一厂;考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、谷胱甘肽试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒、丙二醛试剂盒、总抗氧化能力试剂盒等均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 动物分组与干预 100只大鼠随机均分成5组，每组20只，分别为假手术组、模型组、槲皮素干预组、针刺干预组、槲皮素针刺联合干预组。假手术组除不进行栓线外，其余处理皆与模型组相同。槲皮素干预于实验前3 d开始灌胃给药,1次/d，造模前1 h再次灌胃给药，每次给药剂量均为100 mg/kg。电针干预依据《大鼠穴位图谱的研制》[4]及《实验针灸学》进行选穴，分别选择人中穴(也称水沟穴，位于大鼠唇裂鼻尖下1 mm正中处，直或向上刺1 mm)、中冲穴(双侧，中指末节尖端中央，直刺1 mm，选穴依据1999年9月第1版《实验针灸学》附常用实验动物的针灸穴位)及风府穴(也称天门穴，位于大鼠枕骨顶嵴后枕寰关节背凹陷处，向后下方斜刺1 mm进针)。针刺组动物在造模后1 h通以电针治疗仪(G6805型，疏密波)，频率为2 Hz，刺激强度为2 mA,以大鼠肢体或针柄微微颤动为度，每次持续时间20 min。

1.3 动物模型的建立 参照Zea Longa等[5]方法并稍加改良建立大鼠中动脉栓塞缺血/再灌注损伤模型，使用10%的水合氯醛4 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，颈部正中切口，分离出颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)及颈内动脉(ICA)。结扎右侧CCA的近心端、ECA及其分支动脉。沿ICA向下分离翼颚动脉，根部结扎该分支。在ICA近端备线，远端放置动脉夹，CCA分叉处切口，插入直径约0.22 mm的尼龙线(深度约为17～20 mm)，尼龙线沿ICA入颅至大脑前动脉，阻断大脑中动脉所有血流来源。缺血1 h后，缓慢拉出尼龙线再灌注。

1.4 神经功能评分 存活鼠在灌注24 h后，参照Zea Longa等[5]标准进行神经功能评分。0分：正常，无任何神经损伤症状及功能缺陷；1分：不能完全伸展对侧前爪；2分：向外侧转圈；3分：向对侧倾倒；4分：不能行走，意识丧失。行为评分结束后，快速断头并于冰上分离患侧脑组织，取皮质100 mg，制成5%的组织匀浆。同时取新鲜血液5 mL，使用离心机以3 000 r/min,离心10 min，分离血浆，置于-80 ℃冰箱保存，待测。

2 结果

2.1 槲皮素与针刺联用对缺血再灌注大鼠神经功能的影响 见表1。

表1 槲皮素与针刺联用对缺血再灌注大鼠神经功能的影响(±s,n=20)

2.2 槲皮素与针刺联用对缺血再灌注大鼠脑组织抗氧化水平的影响 见表2。

表2 槲皮素与针刺联用对缺血再灌注大鼠脑组织抗氧化水平的影响(±s,n=20)

3 讨论

中医学认为，缺血性脑卒中乃气血逆乱，产生风、火、痰、瘀，进而导致脑脉痹阻所致。多年来的实践经验[6]认为，缺血性脑血管病的栓塞期给予及时有效的针刺治疗能够很好的改善脑血管再通(即再灌注)造成的损伤，降低本病的致死率和致残率。研究[7]提示，针刺对脑缺血再灌注所致的自由基损伤有明显的改善作用，提示针刺可以通过改善氧化应激损伤发挥神经元保护作用[8]。中医治疗脑卒中的关键是“窍闭神匿，神不导气”，本实验选用的人中、中冲、风府3穴共奏醒脑开窍、健脑补髓、疏风通络的功效。

槲皮素具有超强抗氧化及清除自由基的作用，同时还被证实[9]具有抗癌、抗感染、抗病毒、降糖、降压、免疫调节及心血管保护作用等多种生物学功效。有研究[10]提示其可能通过抑制海马锥体神经元的外向钾电流进而对谷氨酸诱导的神经损伤起保护作用，从而提示槲皮素对缺血样损伤的神经具有保护作用。

本研究结果表明，槲皮素与针刺联用能够有效改善脑缺血再灌注大鼠的神经损伤，提高脑组织抗氧化系统的能力，减少脂质过氧化损伤，对脑神经具有良好的保护作用。从而提示选用药物与物理治疗相结合的方式治疗缺血性脑卒中与单一治疗方式相比具有更好的疗效。此研究将为缺血性脑卒中的临床治疗提供一定的实验数据及理论基础。

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