冠心病患者内皮细胞微粒水平与Th1/Th2细胞因子水平的关系研究

陆永光，李 浪，符春晖，严 华，苏 强，陈妍梅，黄军章

冠状动脉粥样硬化是一种慢性免疫和炎症性疾病[1]。有研究证实，冠心病患者辅助性T细胞(Th)1/Th2的失衡参与了冠状动脉粥样硬化斑块的发生、发展及急性冠脉综合征(ACS)的发病过程[2]。内皮细胞微粒(EMPs)是内皮细胞在各种病理因素的刺激下被激活或凋亡后所释放出来的微小囊泡。近年来研究表明，冠心病患者外周血中EMPs水平的明显升高能反映内皮功能及其障碍的程度[3]。但EMPs能否反映冠心病患者血管炎症的反应程度，以及与ACS患者斑块稳定性的关系尚不清楚。本研究探讨了冠心病患者外周血EMPs水平与Th1/Th2细胞因子水平的关系，以揭示外周血EMPs水平升高在冠心病发病中的意义及其作用机制。

1 资料与方法

1.1 病例入选标准 (1)稳定性心绞痛(SA)：劳累引起的胸骨下或心前区压榨性、紧缩性疼痛或不适，经休息或舌下含服硝酸甘油片5 min内可缓解；(2)不稳定性心绞痛(UA)：包括初发心绞痛、劳累恶化性心绞痛和静息性心绞痛，且在入院前48 h内至少发作过1次心绞痛。(3)急性心肌梗死(AMI)：入选前24 h内心肌缺血症状持续30 min以上，休息或服用硝酸酯类药物无缓解；心肌损伤标记物肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白水平超过参考范围上限的2倍；(4)对照组：同期有胸痛症状，但无心电图缺血改变，且冠状动脉造影检查正常的住院患者。

1.2 病例排除标准 (1)感染、恶性肿瘤、严重肝肾功能不全；结缔组织疾病、内分泌系统疾病及自身免疫性疾病；(2)其他心脏疾病，如心肌炎、心内膜炎、风湿性心脏病；(3)近3周内服用抗感染药物、免疫抑制剂者。

1.3 临床资料 选取2011年入住我院的SA患者27例(SA组)、UA患者28例(UA组)、AMI患者30例(AMI组)及同期冠状动脉造影检查正常的住院患者20例(对照组)为研究对象，均符合入选标准。除超敏C反应蛋白(hs-CRP)外，4组间其他指标差异均无统计学意义(P>0.05，见表1)。

表1 4组受检者临床资料比较Table 1 Comparison of the clinical data in four groups

注：SA=稳定性心绞痛，UA=不稳定性心绞痛，AMI=急性心肌梗死，ACEI=血管紧张素转换酶抑制剂，ARB=血管紧张素受体拮抗剂，hs-CRP=超敏C反应蛋白；与SA组和对照组比较，*P<0.05；△为F值

1.4 方法

1.4.2 酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞因子 对照组和SA组于入院后次日清晨空腹、UA组和AMI组于入院后即刻用真空抗凝试管抽取患者新鲜外周静脉血4 ml，将全血以3 000 r/min离心15 min，取上层血清分装后存于-80 ℃冰箱中待测。所有标本收集后采用ELISA法集中检测血清中γ干扰素(IFN-γ)、白介素(IL)-2、IL-4和IL-10的表达水平，操作严格按说明书进行。

2 结果

2.1 EMPs水平比较 4组受检者的血浆EMPs水平间差异有统计学意义(H=80.925，P=0.000)，其中UA组和AMI组血浆EMPs水平明显高于对照组和SA组，SA组明显高于对照组，AMI组明显高于UA组，差异均有统计学意义(P<0.05，见表2)。

表2 4组受检者血浆EMPs水平比较个/μl)Table 2 Comparison of EMPs level in four groups

注：与对照组和SA组比较，*P<0.05；与对照组比较，▲P<0.05；与UA组比较，△P<0.05

2.2 细胞因子水平比较 4组受检者的血清IFN-γ和IL-2水平间差异均有统计学意义(P=0.000)，其中UA组和AMI组血清IFN-γ和IL-2水平明显高于对照组和SA组，SA组血清IFN-γ和IL-2水平明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。4组受检者的血清IL-4和IL-10水平间差异均无统计学意义(P>0.05，见表3)。

2.3 相关性分析 EMPs与IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10相关分析结果显示，EMPs水平与IFN-γ和IL-2水平呈正相关(r=0.795，P=0.000；r=0.804，P=0.000)，与IL-4和IL-10水平无直线相关性(r=-0.088，P=0.374；r=-0.156，P=0.112)。

组别例数IFN-γIL-2IL-4IL-10对照组20 7 5±1 69 8±2 7 18 6±2 531 3±5 3SA组2710 6±2 4△12 6±2 9△18 4±2 130 3±3 6UA组2826 5±6 4∗21 9±3 8∗17 8±1 430 0±3 2AMI组3032 6±6 0∗28 4±5 2∗17 6±1 629 3±3 6H值83 84083 6091 6001 090P值0 0000 0000 1930 357

注：与对照组和SA组比较，*P<0.05；与对照组比较，△P<0.05

3 讨论

不稳定冠状动脉粥样硬化斑块破裂和血栓形成是ACS的主要发生机制。炎症不仅在介导动脉粥样硬化的发生和发展中起重要作用，而且是导致斑块不稳定的关键因素。近年来研究表明，ACS患者存在明显的Th1/Th2细胞及其相关细胞因子的表达失衡，主要以Th1分泌的细胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、IL-12和IL-18等水平明显增加为主，且与冠状动脉病变严重程度相关，表明其对斑块的不稳定发挥着重要作用[4-6]。本研究结果表明，AMI组和UA组患者IFN-γ和IL-2水平明显高于对照组和SA组，而4组IL-4和IL-10水平间无明显差异，提示Th1细胞因子的变化不仅与动脉粥样硬化斑块形成有关，还可能参与促进斑块的不稳定。

作为内皮细胞激活或凋亡的产物，EMPs可真实地反映内皮细胞的功能和状态。近年来，在多种具有显著内皮功能受损和功能障碍的疾病如冠心病、高血压、糖尿病、多发性硬化、血栓性血小板减少性紫癜、系统性红斑狼疮和先兆子痫等患者中均可观察到血浆EMPs水平的明显升高，因此EMPs可作为内皮功能障碍的标志物[3,7]。本研究结果显示，SA患者血浆EMPs水平明显高于对照组，表明EMPs可以反映冠心病患者内皮功能障碍的程度。而AMI组和UA组患者血浆EMPs水平明显高于SA患者，表明EMPs可能与冠心病患者动脉粥样硬化斑块的稳定性相关。

本研究还显示，冠心病患者血浆EMPs水平与Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2呈正相关，而与Th2型细胞因子IL-4和IL-10无直线相关性。鉴于IFN-γ和IL-2水平的升高与冠状动脉粥样硬化斑块的炎症反应密切相关，因此，与IFN-γ和IL-2水平明显相关的EMPs可能也在一定程度上反映了斑块的炎症反应程度。Th1/Th2失衡所导致的相关细胞因子分泌异常及其所导致的斑块炎症和不稳定，可能是导致EMPs生成增多的重要原因。

但更为重要的是，既往研究还表明，EMPs对炎症、凝血过程及血管功能等均有一定影响，与心血管疾病的发生密切相关。EMPs不仅可以反映内皮的功能状态，还是内皮功能障碍的标志物，EMPs从内皮细胞释放的过程中携带了多种生物活性物质，可以作为细胞递质的有效载体参与细胞信号的转导和效能的发挥。从心肌梗死患者血循环中提取的EMPs可选择性地损害内皮细胞一氧化氮(NO)信号转导通路导致内皮舒张功能障碍。EMPs还参与了凝血的过程。EMPs表面含有血管性血友病因子，它可以促进血小板聚集，形成血栓[8]。EMPs还可以促进黏附分子的产生和促进炎性细胞与内皮细胞的结合[9]。此外，EMPs还具有调节免疫功能的作用[10]。本研究结果提示，EMPs不仅反映冠心病患者内皮功能障碍和斑块炎症反应的程度，可能还通过影响Th1/Th2细胞因子的分泌，参与对Th1/Th2细胞分化和功能的调控，参与斑块的形成和炎症过程，促进斑块的不稳定。但EMPs是否参与了该过程以及其程度有待后续研究证实。

综上所述，冠心病患者外周血中EMPs水平和Th1/Th2失衡密切相关，在一定程度上反映了内皮功能障碍、斑块内炎症反应程度和斑块的稳定性。EMPs还可能通过调控Th1/Th2细胞分化和功能，参与冠状动脉动脉粥样硬化的免疫和炎症反应过程，在斑块形成和不稳定中具有重要的作用。

1 段鹏，谢英.胆固醇代谢失调与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关系[J].中国全科医学，2010，13(1)：207.

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3 Boulanger CM,Leroyer AS,Amabile N,et al.Circulating endothelial microparticles:a new marker of vascular injury[J].Ann Cardiol Angeiol (Paris),2008,57(3):149-154.

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7 Martinez MC,Tual-Chalot S,Leonetti D,et al.Microparticles:targets and tools in cardiovascular disease [J].Trends Pharmacol Sci,2011,32(11):659-665.

8 Lacroix R,Dignat-George F.Microparticles as a circulating source of procoagulant and fibrinolytic activities in the circulation [J].Thromb Res,2012,129(Suppl 2):S27-S29.

9 Chironi GN,Boulanger CM,Simon A,et al.Endothelial microparticles in diseases [J].Cell Tissue Res,2009,335(1):143-151.

10 Angelot F,Seilles E,Biichle S,et al.Endothelial cell-derived microparticles induce plasmacytoid dendritic cell maturation:potential implications in inflammatory diseases [J].Haematologica,2009,94(11):1502-1512.