复方阿莫西林盐酸氨溴索血药浓度测定及药代动力学研究

宋金春，陈 杏，周 妮

（武汉大学人民医院药学部，湖北 武汉 430060）

阿莫西林（amoxicillin）是一种广谱半合成β－内酰胺类抗菌药物，临床广泛用于治疗急慢性呼吸道感染，也可用于中耳炎、咽炎、肺炎和扁桃体炎。盐酸氨溴索（ambroxol）是一种黏痰溶解剂，可降低痰黏度，稀释痰液，使其易于咳出，并减少过敏物质的释放，改善呼吸状况。临床研究发现，盐酸氨溴索可增加阿莫西林在肺部的浓度[1－3]。目前，国内尚未有阿莫西林盐酸氨溴索的复方制剂上市。本试验中主要建立了复方阿莫西林盐酸氨溴索胶囊在家兔血清中的测定方法，并对其药代动力学进行了研究，为临床制订合理的给药方案提供理论和实验依据。

1 仪器与试药

Thermo Forma 700系列超低温冰箱（美国 Thermo公司）；XW－80A型涡旋仪（上海医科大学仪器厂）；Sorvall Pico（非冷冻型）微量台式离心机，Sorvall Fresco（冷冻型）微量台式离心机（德国贺利氏公司）；BF2000水浴氮气挥干仪（北京八方实验仪器有限公司）；YXJ－1型高速离心机（深圳天南海北实业有限公司）；Agilent 1100型高效液相色谱仪（配四元梯度泵、DAD检测器、G137PA自动脱气机、标准自动进样器、柱温箱、色谱工作站，美国Agilent公司）；TG328A型电子分析天平（上海天平仪器厂）。阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，批号为130409－201011）；阿莫西林原料药（珠海联邦制药股份有限公司，批号为3081032049，含量为100．1%）；盐酸氨溴索原料药（北京太洋药业有限公司，批号为M100405，含量为99．43%）；复方阿莫西林盐酸氨溴索胶囊（武汉大学药学院临床药物研究所，规格为阿莫西林250 mg＋盐酸氨溴索15 mg）；阿莫西林胶囊（昆明贝克诺顿制药有限公司，含阿莫西林250 mg，批号为110205）；盐酸氨溴索胶囊（日本独资四川大冢制药有限公司，规格为30 mg，批号为101103）；甲醇（色谱纯）；醋酸铵（分析纯）；醋酸（分析纯）。雄性新西兰兔 12 只（普通级），体重（2．0 ± 0．2）kg，武汉大学动物实验中心提供（合格证号为00018395）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Inertsil ODS－2 柱（150 mm ×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－0．01 mol／L醋酸铵溶液（以醋酸溶液调节 pH至 4）＝8 ∶92；检测温度：25 ℃ ；检测波长：244 nm；流速：1．0 mL ／min；进样量：20 μL。

2．2 溶液制备

精密量取阿莫西林对照品10．0 mg，置50 mL容量瓶中，以甲醇溶解并稀释定容至刻度，摇匀，即得 200 μg／mL的对照品溶液，使用前稀释。

2．3 血样预处理

精密吸取家兔血样400 μL，置2 mL肝素化离心管中，加入200 μL 甲醇沉淀蛋白，涡旋震荡 1 min，12 000 r／min 离心 15 min，取上清液经0．45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液20 μL进样。

2．4 方法学考察

专属性考察：分别取经2．3项操作后得到的家兔空白血清溶液，加阿莫西林对照品的空白血清和家兔给药4 h后血清溶液20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，色谱图见图1。结果表明，用上述血样预处理方法处理空白血样和含药血样，在阿莫西林出峰处无干扰，血清中内源性物质不干扰阿莫西林的测定，阿莫西林的保留时间为3．9 min，说明此方法的专属性好。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别取阿莫西林对照品溶液适量，氮气吹干，加入400 μL家兔空白血清，涡旋混合，配成血清中含对照品质量浓度分别为 200，150，100，75，50，25，18．75，12．5 μg ／mL 的系列含药标准血清样品。按2．3项下方法操作，以阿莫西林的峰面积为纵坐标（Y）、血清中对照品质量浓度为横坐标（X）进行线性回归，得回归方程 Y＝3．605 X －2．457，r＝0．999 6（n＝8）。结果表明，阿莫西林质量浓度在 12．5～200 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：分别取阿莫西林对照品溶液适量，氮气吹干，加入400 μL家兔空白血清，涡旋混合，配成低、中、高3个质量浓度（12．5，75，200 μg ／mL）的对照品血清溶液，每一浓度平行配制5份，在日内不同时间点测定，考察日内精密度。连续测定3 d，考察日间精密度。结果见表1。

表1 精密度试验结果（n＝5）

稳定性试验：取空白血清并精密加入阿莫西林对照品溶液，配成 12．5，75．00，200．00 μg／mL 的对照品血清，按 2．3 项下进行处理后，分别考察在－20℃环境中放置3 d和反复冻融3次的稳定性。结果的 RSD分别为 1．0% ～8．2%和 1．2% ～7．3%。

回收率试验：分别取阿莫西林对照液适量，氮气吹干，加入400 μL家兔空白血清，涡旋混合，配成低、中、高3个质量浓度（12．5，75，200 μg ／mL）的对照品血清溶液，每一浓度平行配制3份，按2．3项下方法测定，依据线性回归方程计算各自的质量浓度，以测定质量浓度和真实质量浓度之比计算回收率。结果见表2。

表2 回收率试验结果（n＝9）

2．5 药代动力学研究

将12只雄性新西兰兔随机分为甲、乙两组，每组6只，试验前禁食12 h，甲组家兔灌服受试制剂A（自制复方阿莫西林盐酸氨溴索胶囊，2粒），乙组家兔灌服对照制剂B（阿莫西林胶囊2粒＋盐酸氨溴索胶囊 1 粒），分别在给药后 0．25，0．5，0．75，1，1．5，2，3，4，5，6，8，12 h 时从耳缘静脉处取血 2 mL，置肝素化离心管中，12 000 r／min离心 10 min，取上清液，于 －20℃放置，待测。按上述方法测定样品，计算阿莫西林血药浓度，绘制药时曲线，结果见图3，将所得各组药物浓度－时间数据分别输入3P97药代动力学软件，根据 AIC（AKaike′s information criterion）最小原则选择最佳房室模型和权重，确定药代动力学参数。结果表明，复方阿莫西林盐酸氨溴索胶囊与同时服用两单药胶囊在家兔体内的药代动力学过程均符合一室模型，权重系数为1／C2，药代动力学参数见表3。

图2 家兔口服药物后平均血药浓度-时间曲线（n＝12）

表3 口服复方阿莫西林胶囊后的主要药代动力学参数

3 讨论

3．1 液相条件选择

参照文献[4－8]对试验方法进行摸索，笔者对不同的流动相系统进行了尝试。以甲醇 －水（10∶90）为流动相时，阿莫西林约在5．5 min时出峰，但峰形不佳。以甲醇磷酸盐系统和乙腈－磷酸盐系统为流动相时，若将有机相比例调高，则阿莫西林出峰时间过早以至与内源性物质无法分开；若将其比例稍微调低，则出峰时间又推迟至10 min左右。相比而言，文中采用甲醇－0．01 mol／L醋酸铵溶液（8∶92）为流动相时，可以获得比较满意的峰形，出峰时间较短，约在4 min，并且与内源性物质的分离度较好。最终选择甲醇 － 0．01 mol／L 醋酸铵溶液（8 ∶92）作为流动相。

3．2 剂量确定

试验动物与人的给药剂量之间存在着换算关系，试验动物给药剂量＝人的给药剂量×人的体重×折算系数／试验动物的体重。按照成年人1次服用500 mg阿莫西林，换算得到1只家兔的给药剂量应为70 mg，但在此剂量下只能在1．5 h和2 h处检测到血药浓度，其他时间点均无法检测。当家兔的给药剂量为250 mg时，只能检测到 1，1．5，2，3 h这 4个时间点的血药浓度。当给药剂量定为500 mg时，可以检测到所有时间点的血药浓度，给药后1 h内家兔没有出现异常反应。

药代动力学参数比较：由于家兔个体间存在差异，本试验仅对其平均血药浓度－时间数据进行拟合。拟合结果表明，受试制剂A（复方阿莫西林盐酸氨溴索胶囊）与对照制剂B（阿莫西林胶囊2粒＋盐酸氨溴索胶囊1粒）的体内药代动力学过程均符合一室模型，权重系数为1／C2，达峰浓度（Cmax）受试制剂 A大于对照制剂B，药时曲线下面积（AUC）数据显示受试制剂A的生物利用度较对照制剂B高。说明复方阿莫西林盐酸氨溴索胶囊比同时服用两单药胶囊吸收更好。由于该复方胶囊中氨溴索含量相对阿莫西林偏低，经体内代谢后检测到的血药浓度不稳定，故本试验主要以阿莫西林体内血药浓度对其药代动力学进行评价，为复方阿莫西林盐酸氨溴索胶囊药代动力学的进一步研究提供依据。

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