复方莪术散对卵巢子宫内膜异位囊肿患者异位、在位内膜组织中p21表达的影响

刘 筠，曹保利，魏 明

(1天津医科大学，天津300070;2天津市南开医院)

子宫内膜异位症是育龄女性的常见病之一，其细胞的增生、浸润、转移等特性及复发率高的临床特点均提示其具有恶性肿瘤的生物学行为，已有研究证实了二者的相似性［1］。研究证实，细胞周期调节蛋白在恶性肿瘤的药物治疗中发挥重要作用，其中p21蛋白是细胞周期素依赖激酶(CDK)抑制因子之一，对细胞周期起负性调节作用［2］。2011年1月～2013年1月，我们观察了复方莪术散对卵巢子宫内膜异位囊肿(简称巧克力囊肿)患者异位和在位内膜组织中p21蛋白表达的影响。现报告如下。

1 资料与方法

1．1 临床资料 选择天津市南开医院妇科因巧克力囊肿行手术治疗并经病理证实的患者69例，其中35例(用药组)于手术前3个月开始规律服用复方莪术散直至手术当日停药，34例(手术组)术前未经过任何治疗直接手术;用药组年龄(32．0±6．1)岁，根据美国生育协会修订的子宫内膜异位症分期法(r-AFS，1985)分为Ⅱ期8例、Ⅲ期17例、Ⅳ期10例;手术组年龄(33．1±7．2)岁，r-AFS分期Ⅱ期 5例、Ⅲ期18例、Ⅳ期11例;选择同期因子宫肌瘤行手术者30例作为对照组，年龄(32．5±6．7)岁。排除伴有子宫内膜病变、无规律月经周期、术前3个月接触激素类药物、放置过宫内节育器、妊娠、哺乳及合并有子宫腺肌病、功血及多囊卵巢综合征等其他激素依赖性疾病者。各组年龄、药物组和手术组r-AFS分期均无显著差异(P均＞0．05)。

1．2 方法

1．2．1 治疗方法 用药组术前3个月服用中药复方莪术散，方药:三棱、莪术、淫羊藿、延胡索及黄芪各10 g，各单药由江阴天江药业有限公司制成颗粒剂型，5味中药一次性冲服，2次/d，经期不停药，连服3个月;手术组及对照组均未用药。用药组和手术组在月经结束后3～7 d行卵巢巧克力囊肿剥除术，术中取子宫内膜异位囊肿囊壁组织，切除子宫者切取子宫内膜组织，保留子宫者刮取子宫内膜组织;对照组在月经结束后3～7 d行子宫肌瘤切除术，术前常规于子宫内膜增殖期行诊断性刮宫(以除外子宫内膜疾病)，刮取正常子宫内膜组织。

1．2．2 检测方法 采用免疫组化法。常规4%甲醛固定组织，石蜡包埋，组织切片厚4μm，HE染色后挑选具有典型内膜及间质的组织标本为入选标本。捞片后置烤箱60 min，切片常规脱蜡至水，经3%H2O2灭活内源性酶10 min、柠檬酸钠高压修复2．5 min后，5%BSA 室温封闭 20 min。一抗(1∶150)4℃过夜，37℃烤箱复温30 min;加入二抗于37℃烤箱20 min，37℃烤箱 SABC染色20 min，DAB显色3～4 min，苏木素复染，脱水封片;严格按照SABC试剂盒说明书操作。每张切片于100倍光镜下选取5个代表性视野，计数1 000个细胞;p21阳性产物主要定位于细胞核上，阳性表达呈棕色，计算阳性细胞百分率。无阳性染色细胞或阳性染色细胞数＜5%为阴性(－);阳性染色细胞数5% ～25%为弱阳性(+);阳性染色细胞数25% ～50%为阳性(++);阳性染色细胞数＞50%为强阳性(+++);+～+++为阳性表达。见插页Ⅱ图1。

1．2．3 统计学方法 采用SPSS11．5统计软件。率的比较采用 χ2检验。P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 各组子宫内膜p21蛋白表达比较 p21在对照组子宫内膜组织中阳性表达率为56．7%，在手术组异位、在位内膜组织中分别为17．7%、26．5%，在用药组异位、在位内膜组织中分别为40．0%、48．6%。对照组和用药组异位、在位内膜p21表达率均高于手术组异位、在位内膜，P均＜0．05;对照组和用药组异位、在位内膜p21阳性表达率比较，P均＞0．05。

2．2 p21蛋白表达与临床分期的关系 异位内膜p21阳性表达率在用药组Ⅱ期患者中为50%(4/8)、Ⅲ ～ Ⅳ期为37．0%(10/27)，在手术组分别为40．0%(2/5)、13．7%(4/29);用药组Ⅱ期患者异位内膜p21阳性表达率高于手术组，P＜0．05;Ⅲ～Ⅳ期比较，P＞0．05。在位内膜p21阳性表达率用药组Ⅱ期患者中为75．0%(6/8)、Ⅲ ～Ⅳ期为32．4%(12/27)，手术组分别为60．0%(3/5)、24．1%(7/29);用药组Ⅱ期患者在位内膜p21阳性表达率高于手术组，P ＜0．05;Ⅲ ～ Ⅳ期比较，P ＞0．05。两组Ⅲ～Ⅳ期异位内膜和在位内膜p21阳性表达率和Ⅱ期比较，P 均 ＞0．05。

3 讨论

p21蛋白是目前已知的、具有最广泛CDK抑制活性的细胞周期蛋白，几乎可以和每一个Cyclin-CDK复合物结合，发挥抑制作用。有研究证实，p21高表达可使细胞周期阻滞于G1期、G2期或S期［3］，在某些条件下，p21具有促进细胞凋亡的作用［4～6］。癌组织中p21表达与肿瘤Dukes分期及淋巴转移相关，其中C期和D期患者的阳性表达率显著低于A期和B期患者，有淋巴转移者低于无转移者，提示p21的表达与结肠癌的进展呈负相关。p21蛋白阳性表达与食管癌、胃癌的组织学类型及淋巴结转移相关，提示p21蛋白表达减少可能会导致细胞增殖，肿瘤生长迅速［7，8］。韦瑞红等［9］研究表明，p21 蛋白的异常表达与子宫内膜癌的发生有关。在子宫内膜腺癌患者中，p21蛋白阳性表达率高，细胞增殖能力较低，提示肿瘤细胞的增殖可能与p21蛋白缺失有关，p21蛋白缺失通过直接或间接途径增强癌细胞的增殖活性。

有研究证实，子宫内膜异位症发病与细胞因子调节异常有关［10，11］，但具体机制尚需进一步研究。本研究显示，p21蛋白在对照组中阳性表达率明显高于用药组和手术组，p21低表达减少了其与Cyclin-CDK复合物的结合，从而减弱了其对细胞周期的抑制作用，进而加速细胞周期的增殖进程。

中医学认为，子宫内膜异位症的基本病机为瘀血阻滞胞宫、冲任［12］。手术是本病的首选治疗方法，但如何降低手术后的高复发率是治疗成败的关键。曹保利教授以活血化瘀、软坚散结、益肾扶正、行气止痛为治则，研制出中药复方莪术散，由三棱、莪术、淫羊藿、延胡索及黄芪5味中药颗粒剂组成。王琰等［13］研究表明，莪术中含有姜黄素和吉马酮，姜黄素对人卵巢癌、结肠癌和鼻咽癌的相关细胞有一定的抑制作用，具有较强的抗癌、抗炎作用;吉马酮也有一定的抗癌活性。徐立春等［14］研究也表明，三棱、莪术提取物修饰的肿瘤细胞疫苗可以明显增强抗瘤效应。有临床研究证实，复方莪术散防治子宫内膜异位症术后复发疗效与孕三烯酮、达菲林相近似，且不良反应较西药明显减少［15，16］。

本研究结果显示，用药组异位和在位内膜中p21蛋白表达明显提高，提示复方莪术散可以提高子宫内膜异位症患者p21的表达，进而减慢细胞增殖的进程。从临床分期来看，复方莪术散对Ⅱ期患者p21蛋白表达有明显升高作用，提示其对中度内异症患者的疗效优于重度患者。柯小宁等［17］研究表明，某些细胞周期蛋白在卵巢异位子宫内膜中的阳性表达随临床分期的增加呈递增趋势。本研究中，用药组和手术组异位和在位内膜p21阳性表达率在Ⅲ～Ⅳ期患者和Ⅱ期比较，无统计学差异;我们推测可能与样本量过小有关，需扩大样本量进一步研究。

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