急性上呼吸道感染患者血常规中性粒细胞和淋巴细胞变化的年龄和性别差异分析

周青，周宪宾，张巧凤，郭钰琪，郝钰，王丽，赵向忠，李霞，张洪海，姚成芳

（1山东省医学科学院，山东济南250062；2济宁市第一人民医院，山东济宁272000）

急性上呼吸道感染患者血常规中性粒细胞和淋巴细胞变化的年龄和性别差异分析

周青1,2，周宪宾1，张巧凤1，郭钰琪1，郝钰1，王丽1，赵向忠1，李霞1，张洪海1，姚成芳1

（1山东省医学科学院，山东济南250062；2济宁市第一人民医院，山东济宁272000）

目的探讨急性上呼吸道感染患者血常规中中性粒细胞和淋巴细胞变化的年龄差异和性别差异及其临床意义。方法291例呼吸道感染患者和219例正常志愿者，分为六个年龄组，采用VCS法检测患者外周血中性粒细胞、淋巴细胞的变化状态；采用流式细胞标记法检测外周血CD4+、CD8+T细胞亚群的比例变化和TNFα分泌能力，并分析性别和年龄差异。结果急性呼吸道感染患者外周血中中性粒细胞计数和比例均明显升高，中性粒细胞比例升高1～2倍是白细胞升高的主要原因，淋巴细胞比例明显下降。该类患者血常规中中性粒细胞随着增龄而升高，增幅也随之升高；而淋巴细胞随着增龄而明显降低。女性在更年期血常规中中性粒细胞和淋巴细胞的变化明显低于男性和其他组患者（P＜0.05）。另外，随着淋巴细胞比例降低，CD4/CD8随着年龄的增长而显著升高，分泌TNFα能力在30～40岁组明显高于其他年龄组。结论衰老和激素水平可以影响上呼吸道感染患者血常规中中性粒细胞和淋巴细胞的水平，这一结果可为临床病情判断及针对不同人群采用不同防治方案提供重要依据。

呼吸道感染；血常规；T细胞；细胞因子；年龄差异；性别差异

急性上呼吸道感染[1]（acute upper respiratory tract infection,AURI）简称上感，常指鼻、咽、扁桃体、喉部黏膜的急性炎症。发病率占儿科疾病首位。70%～80%以上由病毒所致，另有20%～30%由细菌引起，可单纯发生或继发于病毒感染之后发生。病原体感染人体后，可引起不同炎症反应，多种细胞参与防止入侵、杀灭和清除病原体、终止感染等过程，如中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等。通过对这些细胞或者分子的检测就可以了解病毒或者细菌感染状况及人体自身的免疫状况，但目前对这些血常规检测缺少年龄和性别差异分析，在应对急性上呼吸道感染时，对所有人群采用相同的防治方法，导致防治疗效偏差。因此，探讨急性上呼吸道感染伴有发热患者血常规中中性粒细胞和淋巴细胞变化的年龄差异和性别差异，将对临床科学防治急性上呼吸道感染提供重要依据。

1临床资料

1.1一般资料呼吸道感染患者291例为2007年7月—2012年7月我院门诊患者，男170人，女121人，年龄6～72岁。同时以219例正常人员做对照。入选标准及分组：诊断符合呼吸道感染的患者。其中＜20岁患者66例(男43例，女23例)、20岁～30岁患者45例(男23例，女22例)、30岁～40岁患者46例(男30例，女16例)、40岁～50岁患者41例(男25例，女15例)、50岁～60岁患者42例(男22例，女20例)、＞60岁患者51例（(男27例，女24例)。对照组219例体检正常人员，其中＜20岁23例(男13例，女10例)、20岁～30岁44例(男24例，女20例)、30岁～40岁42例(男20例，女22例)、40岁～50岁34例(男18例，女16例)、50岁～60岁39例(男24例，女15例)、＞60岁患者36例（(男20例，女16例)。排除标准：上述患者经询问病史和进一步检查排除了其他感染性疾病或者血液病的患者，排除了怀孕的患者。

1.2仪器与试剂仪器：SYSMEX800i血常规分析仪，显微镜，CO2细胞培养箱，倒置相差显微镜，倒置荧光显微镜，高速低温离心机(SORVALL SUPER T21,USA)，流式细胞仪（BECKMAN,USA）；试剂：原装进口SYSMEX稀释液、染液、鞘液等，RPMI1640培养基（Gibco公司），PMA(phorbolmyristate acetate)、离子霉素（Ionomycin）和莫能霉素（Monensin）均购自Sigma公司。FITC标记的CD4抗体、PC5标记的CD3抗体和PE标记的CD8和TNFa抗体均为美国BD公司产品。

1.3方法

1.3.1血样处理与血常规检测所有患者均于肘静脉抽血1.5mL，EDTA-K2抗凝，室温放置于半小时内采用SYSMEX800i血常规分析仪检测（包括NEU、LYM、MON、PLT等）。

1.3.2流式细胞标记技术采用流式细胞标记技术检测患者外周血单个核细胞CD3、CD4、CD8、TNFα细胞因子的转录状态。主要步骤：无菌取外周血制备单个核细胞悬液，PBS洗两遍，取一部分细胞标记CD4-FITC、CD3-PC5、CD8-PE等荧光抗体，检测外周血CD4/CD8 T细胞亚群比例变化。另外，剩余细胞用RPMI 1640培养液调整细胞浓度为5× 106个/mL，接种于24孔板（2mL/孔），分别加入PMA 30mg/L、Ionomycin 1mg/L、Monensin 1.7mg/L，37℃、5%CO2刺激培养4 h。收集脾细胞，加入大鼠血清4℃避光放置30min，加入抗CD4-FITC、CD3-PC5、PE标记的TNFa等荧光抗体，4℃避光30min；细胞洗涤后加入固定液4℃避光30min；加入穿膜液洗涤细胞，细胞重悬于100μL穿膜液中，加入内标抗体：4℃，避光2～3 h,穿膜液及PBS洗涤后，用于流式细胞术胞内外因子的检测。

1.4统计学处理所有实验数据均经SPSS15.5统计软件处理。

2结果

2.1 AURI患者中性粒细胞的年龄与性别差异性变化健康人群随着年龄的增长其中性粒细胞没有显著差异，但在AURI患者中，中性粒细胞总数明显升高，约是正常群体地两倍。青少年时期女性升高幅度明显高于男性，随着年龄的增长，呼吸道感染患者中性粒细胞的升高幅度明显增加，升高幅度和升高百分率没有明显性别差异，见图1。

图1 AURI患者中性粒细胞的的年龄与性别差异变化

2.2 AURI患者淋巴细胞的年龄与性别差异性变化

在正常人群中，随着年龄的增长淋巴细胞比例呈下降趋势，在各年龄段，女性淋巴细胞比例略低于男性。在AURI患者中，淋巴细胞比例随着增龄明显下降，其下降幅度与增龄成正比。女性在更年期其淋巴细胞比例呈大幅下降状态（见图2）。

图2 AURI患者淋巴细胞的年龄与性别差异性变化

2.3 AURI患者T细胞亚群的年龄与性别差异性变化在AURI急性期，中性粒细胞比值升高和淋巴细胞比值下降是患者突出的血象变化特征，同时，我们进一步检测了淋巴细胞的主体T细胞亚群的变化特征。研究发现：随着增龄T细胞总数基本不变，但其亚群的分布发生变化。CD8+T细胞减少，而CD4+T细胞增多，CD4/CD8比值明显增高，女性比值明显低于男性（P＜0.05），见图3。

2.4 AURI患者TNFα分泌性T细胞亚群的年龄与性别差异性变化随着AURI淋巴细胞比值下降和CD4+T细胞比例升高，CD4+T细胞亚群分泌炎性因子TNFα的能力也随之变化。研究发现：正常人群中CD4+T细胞分泌TNFα的能力没有年龄差异，但女性明显高于男性（P＜0.05）；AURI女性患者随着增龄CD4+T细胞分泌TNFα的能力逐渐增加，AURI男性患者CD4+T细胞分泌TNFα的能力在40岁之前逐渐增加，在40岁达到高峰。（见图4）。

图3 AURI患者CD4+/CD8+T细胞亚群比值的年龄与性别差异

图4 AURI患者T细胞亚群分泌炎性因子TNFα的年龄与性别差异

图例说明：检测了各年龄组患者和健康志愿者的外周血T细胞亚群分泌变化。主要采用荧光抗体标记患者外周血CD4+、TNFα、CD3+表达状态，用CD3射门后分析CD4+TNFα+比值变化。(A)：流式分析散点图；(B)：采用SPSS15.5统计软件处理数据。

3讨论

血常规检测是AURI最常用的检测项目之一。其检测速度快、效率高、操作简单、价格便宜，因此普遍应用[2,3]。疾病感染与转归的过程即是人体内免疫应答的过程。影响人体免疫功能的因素很多，Nagel经实验证实老年人抑制T细胞减少，而辅助T细胞增多。许多研究已证明雌、雄两性存在免疫应答差异[4]。有资料指出[5]，年轻妇女的抑制性细胞毒性细胞的比例高于年轻男性。

健康人群中性粒细胞在成年后至老年基本稳定，没有明显男女差异。20岁前由于年龄跨度大于其他对照组，所以标准差较大，但女性略高于男性。在呼吸道感染患者中也存在增龄增长趋势，但是在20～30岁阶段男性改变大于女性。在正常人群中，淋巴细胞比例随着年龄的增长明显下降，60岁以下各年龄段女性淋巴细胞比例略高于男性。在急性感染患者中，女性的淋巴细胞比例优势在激素急剧变化阶段丢失，50岁后相对恢复。随着淋巴细胞比例降低，CD4/CD8随着年龄的增长而显著升高，并且分泌TNFα能力明显升高（P＜0.05）。急性上呼吸道感染发热患者在白细胞升高的同时，淋巴细胞比例显著降低，但炎性CD4+T淋巴细胞比例相对升高，增幅与增龄呈正相关。衰老和激素水平的改变影响上呼吸道感染患者血常规中白细胞和淋巴细胞的改变，这可为临床病情分析及针对不同人群提出不同防治方案提供有力的依据。

[1]戴立人，曾吉，辛建保.呼吸道感染病原学诊断及临床对策[J].临床内科杂志，2001,18（5）：398-1100.

[2]马丽旭.血清C-反应蛋白测定在小儿急性呼吸道感染中的应用[J].重庆医学，2006，35(13)：1247.

[3]李兴华，王荣国.儿科疾病诊疗标准[M].上海：上海医科大学出版社，1997：110-111.

[4]Hirst M.Transitions to informal care in Great Britain during the 1990s[J].JEpidemiolCommunity Health,2002，56(8)：579-587.

[5]李红梅，仲人前，钱哓萍，等.年龄、性别在幼鼠胸腺T细胞增殖中的作用[J].中国免疫学杂志，2004，20（5）：297-299.

The Age And Gender Differences of Neu trophiles And Lym phocytes In PatientsW ith Acu te Up-resp iratory In fection

Zhou Qing1,2，Zhou Xianbing1，Zhang Qiaofeng1，et a l
（1Shangdong Academy ofMedical Sciences,Jinan 250000,Shandong；2The firstPepole'sHospitalofJining,Jining 272000

Ob jectiveTo approach the age differences and the gender differences of blood routine examination among patients w ith acute respiratory infection,and the significance of these differences.M ethods291 patients w ith acute respiratory nfection and 219 healthy person,for six age groups,use VCSmethod to test the routine blood,use the flow cytome-try to test the change of the CD4+、CD8+T cells and the secreting of TNF,analysis of the gender and age differences.Resu ltsThe number and the ratio of neutrophiles in patients w ith acute respiratory infection rise clearly.The neutrophiles rise 1～2 timeshigher is themian reason of thewbc rise.The numberof lymphocytes reduce.The neutrophiles and its grow ing rate of the patients increased w ith increasing of the age,but the lymphocytes reduce.The females variation rate of neutrophiles and lymphocytes are less thanmale and other groups of the patientswhen they are inmenopause(40～50yearsold).In addition,w ith the reduce of lymphocytes CD4/CD8 increase alongw ith the increase of the age.The secreting of TNF is apparently higher than othergroups.ConclusionAging and hormone levels can affectneutrophilesand lymphocytes in patientsw ith acute up-respiratory infection which can provide the basis for clinical diagnosis and the offering of different treatments fordifferentpeople.

respiratory infection；routine blood tests；T cell；age differences；gender differences

R725.6

：A

：1008-4118（2013）02-0005-04

10.3969/j.issn.1008-4118.2013.02.02

2013-03-20

作者：周青（1981-），女，汉，在读研究生，主要从事基础免疫研究。

姚成芳yaocf9941@163.com

国家自然科学基金，项目编号：30973807；山东省科技攻关项目，项目编号：2012GSF11908。