p16、p21和K i-67在CINⅡ～Ⅲ年轻患者宫颈组织中的表达

苏智峰，徐新伟

（浙江省杭州市余杭区第一人民医院病理科，浙江杭州311100）

·论 著·

p16、p21和K i-67在CINⅡ～Ⅲ年轻患者宫颈组织中的表达

苏智峰，徐新伟

（浙江省杭州市余杭区第一人民医院病理科，浙江杭州311100）

目的探讨宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅱ～Ⅲ年轻患者宫颈组织p16、p21和Ki-67表达及相关性。方法148例CINⅡ～Ⅲ及高危型人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）阳性的患者，按年龄分为A组（≤35岁）78例和B组（＞35岁）70例，分析宫颈组织中p16、p21和Ki-67的表达率及相关性。结果p16在A、B组宫颈组织中表达率均较高，差异无统计学意义（P＞0.05），p21和Ki-67在A组宫颈组织中的表达率显著高于B组（P＜0.05），2组高危型HPV患者p16、p21和Ki-67的表达率均高于低危型HPV患者（P＜0.05），A组高危型和低危型HPV患者宫颈组织中p21和Ki-67表达率均分别高于B组高危型和低危型HPV患者（P＜0.05），p16表达率与年龄无相关性（P＞0.05），p21与Ki-67的表达率与年龄呈负相关（P＜0.05），p16的表达率与p21与Ki-67表达率无相关性（P＞0.05），p21与Ki-67的表达率之间呈正相关（P＜0.05）。结论高危型HPV阳性年龄≤35岁的年轻CINⅡ～Ⅲ患者p21和Ki-67的表达率较年长者高，并与年龄存在相关性。

宫颈上皮内瘤样病变；乳头状瘤病毒；感染；年轻因素

宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）与宫颈浸润癌密切相关，是癌前病变，可发展为子宫颈癌。高危型人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宫颈癌及CIN的危险因素［1］，发病率逐渐增长，而目前对高级别CIN年轻患者的特点研究较少，本研究对比≤35岁和＞35岁CINⅡ～Ⅲ及HPV阳性的患者宫颈组织中p16、p21和Ki-67的表达及与HPV类型的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料：研究对象来源于2009年1月—2011年12月我院妇科门诊筛查CIN患者148例，年龄24～73岁，平均（36.83±9.29）岁，均经宫颈液基细胞学检测、阴道镜活检证实为CINⅡ～Ⅲ级，经HPV DNA检测均为阳性，其中高危型HPV阳性102例，低危型HPV阳性46例。排除严重心、脑、肝、肾、内分泌及血液系统等疾病史；近期妊娠史及盆腔化疗史；无宫颈疾病治疗史。年龄≤35岁78例设为A组，年龄＞35岁70例设为B组。均按美国阴道镜和宫颈病理学会指南进行临床诊疗处理［2］。

1.2 研究方法：p16鼠抗人单克隆抗体、p21鼠抗人单克隆抗体、Ki-67鼠抗人单克隆抗体、即用型快捷免疫组织化学MaxVisionTM检测试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。宫颈病灶组织标本均由4%中性甲醛液固定，石蜡

包埋，切片1.5～2.0μm，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，H2O2处理，高温修复抗原，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗。采用免疫组织化学染色法，操作均按试剂盒说明进行。DAB显色，冲洗，苏木素复染，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 评价标准：高倍光学镜检，每视野计200个细胞，随机观察5个视野，p16、Ki-67定位于细胞浆，p21定位于细胞核。细胞浆或细胞核无染色为阴性；染色呈淡黄色至棕色为阳性，根据染色强度及阳性细胞的比例分为，弱阳性（+）为阳性细胞数≤25%或淡黄色；中度阳性（++）为阳性细胞数26%～50%或黄色；强阳性（+++）为阳性细胞数＞50%或棕色。

1.4 统计学方法：应用SPSS17.0统计学软件进行分析。计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验；两变量间相关性采用Pearson直线相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 p16、p21和Ki-67的表达：p16在A、B组宫颈组织中表达率均较高，但差异无统计学意义（P＞0.05）；p21和Ki-67在A组宫颈组织中的表达率显著高于B组（P＜0.05）。2组高危型和低危型HPV阳性率之间差异无统计学意义（P＞0.05）。2组高危型HPV患者p16、p21和Ki-67的表达率均高于低危型HPV患者；A组高危型和低危型HPV患者宫颈组织中p21和Ki-67表达率均分别高于B组患者（P＜0.05），见表1，2。

表1 2组宫颈组织中p16、p21和Ki-67表达比较（例数，%）

表2 2组高危型与低危型HPV患者宫颈组织中p16、p21和Ki-67表达比较（例数，%）

2.2 p16、p21和Ki-67表达率的相关性：p16表达率与年龄无相关性（r=0.21，P＞0.05），p21和Ki-67的表达率与年龄呈负相关（r=0.47，P＜0.05）。p16的表达率与p21和Ki-67表达率无相关性（r=0.18，P＞0.05），p21与Ki-67的表达率呈正相关（r=0.38，P＜0.05）。

3 讨 论

CIN是一组宫颈癌的癌前病变，与HPV感染密切相关，其中高危型HPV感染对CIN组织恶性进展有促进作用，其致癌作用表现为对细胞周期监控机制通路的破坏［3］。p16和p21是2条主要通路“p53途径”和“pRb通道”的下游调控因子，通过抑制细胞周期素依赖蛋白激酶2下调细胞周期蛋白D1的表达，控制细胞有丝分裂停滞于细胞周期的G1/S期。当高危型HPV感染并与宿主细胞基因整合后，E6、E7基因得到持续过量的表达，对p53及pRb产生抑制，阻断了p53、pRb对下游p16、p21的负向调控作用［4-6］。使细胞分裂异常跨越G1/S期，导致细胞增殖失控，而成为癌变的基础过程［7］。Ki-67也是与细胞增殖相关的一种核抗原，其表达反应了细胞周期的变化过程，其过度表达表明细胞增殖的活跃程度增加，细胞增殖失控［8］。

本研究中以年龄划分研究对象，对比≤35岁和＞35岁患者宫颈组织中p16、p21和Ki-67的表达率，结果显示，p16在不同年龄段的患者中的表达均较高，差异无统计学意义，p21和Ki-67在≤35岁患者中的表达则显著高于＞35岁患者（P＜0.05）。提示HPV阳性高级别CIN患者宫颈组织细胞增殖活跃程度高，而≤35岁患者的细胞增殖活跃程度可能高于＞35岁患者，并可能与CIN病变进展密切相关。

HPV感染是CIN癌变的重要因素，而高危型和低危型HPV的致癌作用存在显著差异［9］，本研究中A组和B组高危型和低危型HPV感染率之间差异无统计学意义，说明HPV感染率与年龄无相关性。

高危型HPV感染者宫颈组织中p21和Ki-67的表达率均显著高于低危型HPV感染患者（P＜0.05）。而≤35岁高危型和低危型HPV患者宫颈组织中p21和Ki-67表达率均分别高于同型HPV的＞35岁患者。说明高危型HPV的感染与宫颈组织中p16、p21和Ki-67的高表达密切相关，而对≤35岁患者较＞35岁患者调高作用更为明显。

p16的表达与年龄无相关性，而p21和Ki-67的表达与年龄呈弱负相关性，随年龄的增长其表达呈现下降的趋势。而p16与p21和Ki-67的表达无相关性，p21与Ki-67表达呈正相关性。提示在HPV阳性高级别CIN患者宫颈组织中p16持续高表达，组织细胞处于增殖活跃状态［10］，而p21和Ki-67对细胞周期的调控可能受到年龄的影响，随年龄增长调控作用减弱。

综上所述，CINⅡ～Ⅲ合并高危型HPV感染≤35岁患者宫颈组织中p21和Ki-67表达显著增高，细胞病态增殖状态加速，对≤35岁患者的早期检测和监控有利于了解患者宫颈组织的病变进展程度，并给予及时的干预处理，预防宫颈癌的发生。

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（本文编辑：赵丽洁）

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1007-3205（2013）03-0339-03

2012-03-22；

2012-04-10

苏智峰（1975-），男，浙江余杭人，浙江省杭州市余杭区第一人民医院主治医师，医学学士，从事临床病理诊断研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.03.036