复发性生殖器疱疹患者血清白细胞介素2水平及外周血T淋巴细胞亚群变化规律研究

陈 宏，王越海，朱萍芳，丁 娟，蔡 薇

（浙江省绍兴市人民医院皮肤科，浙江绍兴312000）

·论 著·

复发性生殖器疱疹患者血清白细胞介素2水平及外周血T淋巴细胞亚群变化规律研究

陈 宏，王越海，朱萍芳，丁 娟，蔡 薇

（浙江省绍兴市人民医院皮肤科，浙江绍兴312000）

目的观察复发性生殖器疱疹（recurrent genital herpes，RGH）患者血清白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）水平及外周血T淋巴细胞亚群的变化规律，探讨RGH患者反复发作的免疫学机制。方法选择100例RGH患者，采用酶联免疫吸附测定方法检测IL-2，采用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。对照组100例来自无感染性疾病的健康志愿者。结果RGH组血清IL-2水平明显低于正常对照组（P＜0.01）。RGH组外周血清中的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T细胞表达较对照组明显降低（P＜0.05）；而CD8+T细胞表达则明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。RGH组老年患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T细胞明显低于青年患者（P＜0.05），而CD8+T细胞明显高于青年患者（P＜0.05）。结论RGH患者血清中IL-2水平及外周血T淋巴细胞亚群水平异常，患者体内存在细胞免疫功能失调及免疫抑制现象。

疱疹，生殖器；白细胞介素2；T淋巴细胞亚群

引起生殖器和肛周部位发生溃疡、水疱及红斑等病变刺激［1］。若宿主出现内分泌紊乱、精神创伤或疲劳等，HSV-2可再激活并复制、繁殖，从而引起病情的反复发作。HSV-2感染患者的发病及复发机制可能与患者的免疫功能低下有关，为了解细胞免疫功能在RGH发病中的作用，本研究对100例RGH患者的血清白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）水平及其外周血T淋巴细胞亚群表达水平进行了检测比较，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2011年1月—2012年6月于我院皮肤性病科门诊就诊的复发性生殖器疱疹患者100例，均符合复发性生殖器疱疹的诊断标准［2］。入选标准包括HSV-DNA定性阳性及血清IgG抗体阳性；有非婚性接触史或配偶感染史；1年内未使用过任何免疫调节剂。排除标准包括糖尿病、严重心肝肾疾病、高血压、妊娠及哺乳期妇女、肺结核、器官移植、自身免疫缺陷者、肿瘤和有其他微生物感染病史者。RGH组100例，男性63例，女性37例，年龄19～71岁，平均（52.7±2.9）岁，其中年龄≤40岁（A组）25例，＞40～60岁（B组）36例，＞61岁（C组）39例。病程5个月～7年，平均（2.6±0.9）年。对照组100例来自无感染性疾病的健康志愿者，男性67例，女性33例，年龄20～70岁，平均（51.3±3.1）岁。2组性别、年龄差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 检测方法

1.2.1 IL-2检测：患者空腹，抽取静脉血5mL，离心，取上层血清，-70℃下存于冰箱。采用常规酶联免疫吸附测定法，按照Quantikine人IL-2免疫检测试剂盒（美国RD公司）说明书操作。待反应终止后，即刻在波长405 nm处（Bio-RedBech-mark酶标仪）测定样品中IL-2的吸光度A值，以标准品的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，做相应的标准曲线，计算各样品中的IL-2含量（ng/L）。

1.2.2 T淋巴细胞亚群检测：患者空腹情况下，抽取静脉血2mL，加入抗凝剂肝素钠。精密取l00μL样品，加入20μL相应抗体，上下充分混匀，25℃下，暗处孵育20min，吸取500μL红细胞裂解液，加入充分振荡混匀，室温静置20min（不可移动），再加入500μL PBS缓冲液，充分摇匀，再次静置20min，最后上流式细胞仪检测。

1.3 统计学方法：应用SPSS12.0统计学软件进行数据分析，计量资料以±s表示，分别采用t检验、F检验和q检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 IL-2水平比较：检测结果显示，RGH组血清IL-2为（416.3±149.9）ng/L，对照组为（1 186±183.4）ng/L，RGH组明显低于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。同时发现，发作期患者血清中IL-2为（418.3±151.2）ng/L，略高于缓解期患者的（386.0±191.3）ng/L，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 T淋巴细胞亚群比较：通过T淋巴细胞亚群检测显示，RGH组外周血的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T细胞表达较对照组明显降低，而CD8+T细胞的表达则明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。RGH组老年患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T细胞明显低于青年患者（P＜0.05），而CD8+T细胞明显高于青年患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1，2。

表1 RGH组与对照组的T淋巴细胞亚群检测结果比较Table 1 Detection of T lymphocyte subsets in RGH group and control gorup （n=100，±s）

表1 RGH组与对照组的T淋巴细胞亚群检测结果比较Table 1 Detection of T lymphocyte subsets in RGH group and control gorup （n=100，±s）

*P＜0.05 vs control group by t test

Groups CD3+（％）CD4+（％）CD8+（％）CD4+/CD8+RGH 53.06±12.31*30.98±7.16*32.72±2.73*0.96±0.18*39±0.19 Control 66.25±5.97 35.27±2.06 24.89±6.39 1.

表2 RGH组不同年龄患者T淋巴细胞亚群检测结果比较Table 2 Detection of T lym phocytes subsetsin patientsw ith different age group of RGH （n=100，±s）

表2 RGH组不同年龄患者T淋巴细胞亚群检测结果比较Table 2 Detection of T lym phocytes subsetsin patientsw ith different age group of RGH （n=100，±s）

*P＜0.05 vs A group by q test

Groups n CD3+（％）CD4+（％）CD8+（％）CD4+/CD8+A 25 56.13±13.01 32.38±8.04 30.81±2.32 1.16±0.25 B 36 54.05±11.84 30.99±8.06 32.06±2.86 0.98±0.19 C 39 52.25±10.97*29.27±7.06*33.89±2.39*0.93±0.16*

3 讨 论

由HSV-2感染引起的生殖器疱疹发生率每年都在增长，特别是发达国家。美国疾病预防控制中心的最新统计显示，目前美国总人口中有23％携带HSV-2病毒，10年内增加了1/3，其中女性患者比例为40％～50％，男性为30％～40％。在日本，妇女性传播疾病（sexually transmitted diseases，STD）患者中至少有一半为生殖器疱疹患者。据世界卫生组织不完全估计，全球每年新发生殖器疱疹病例为2 000万，位居STD的第4位；同时，该病也已在我国存在并在STD中占有一定的比例［3］。机体对生殖器疱

疹的特异性免疫主要是细胞免疫，因此推测，RGH患者可能存在细胞免疫缺陷［4］。

IL-2主要由活化的T淋巴细胞分泌，并刺激T细胞表面表达IL-2的受体，而IL-2结合该受体，活化T淋巴细胞，最终发挥抗病毒作用［5］。同时，IL-2还是机体免疫应答过程中重要的免疫增强因子，可直接促使自然杀伤细胞、巨噬细胞及LAK等细胞的增殖，活化的自然杀伤细胞进一步分泌功能细胞因子肿瘤坏死因子-γ，其可杀伤靶细胞，达到免疫调节的功效［4］。另一靶细胞LAK细胞为淋巴细胞激活的杀伤细胞，它来源于NK细胞，在高剂量IL-2诱导下，能够杀伤对NK细胞不敏感的靶细胞，增强了该类细胞溶解和破坏病毒感染细胞能力［6］。本研究显示，RGH组血清IL-2水平明显低于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）；同时，发作期患者的IL-2水平略高。提示RGH患者体内IL-2表达水平降低，可能通过上述几个途径诱导Thl型细胞免疫反应减弱，并抑制HSV-2的复制能力，降低机体的清除病毒能力。推测这可能是生殖器疱疹病情反复发作的原因之一。

T淋巴细胞亚群在机体免疫调节系统中占据着重要的位置，正常情况下，T淋巴细胞亚群之间相互调节影响，在数量和功能上，维持一定的平衡状态，保证机体发挥正常的免疫功能［7-8］。但是，当T淋巴细胞亚群的数量或者功能发生异常、机体受到病毒抗原刺激时，机体免疫功能的平衡状态被打破，对外界病原微生物入侵的防御能力便大大降低［9］。本研究RGH组外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T细胞的表达较正常对照组显著降低，而CD8+T细胞表达则明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示RGH患者受到疱疹病毒感染后，活化并产生了细胞毒性T细胞，机体的免疫系统平衡状态被打破，最终可能导致生殖器疱疹病情反复发作［10］。本研究RGH组不同年龄患者之间T细胞亚群数量也存在一定差别，RGH组老年患者的外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T细胞明显低于青年患者（P＜0.05），而CD8+T细胞明显高于青年患者（P＜0.05）。说明老年人机体免疫力下降，更易患复发性生殖器疱疹，而青年人机体免疫能力相对较强，复发性生殖器疱疹的几率相对较小。

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［8］梁索原，白引苗，李巧霞，等.肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群检测及临床意义［J］.河北医科大学学报，2009，30（1）：19-20.

［9］NATUK RJ，COOPER D，GUO M，et al.Recombinant vesicular stomatitis virus vectors expressing herpes simplex virus type 2 gD elicit robust CD4+Thl immune responses and are protective in mouse and guinea pig models of vaginal challenge［J］.J Vrol，2006，80（9）：4447-4457.

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（本文编辑：刘斯静）

EXPRESSION OF INTERLEUKIN-2 AND T LYMPHOCYTE SUBSETS IN PERIPHERAL BLOOD OF PATIENTSW ITH RECURRENT GENITAL HERPES

CHEN Hong，WANG Yuehai，ZHU Pingfang，DING Juan，CAIWei

（Department of Dermatology，Shaoxing People's Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China）

Objective To detect the expression of interleukin-2（IL-2）and T lymphocyte subsets in peripheral blood of patients with recurrent genital herpes（RGH），and to discuss the immunologicalmechanism of repeated recurrent genital herpes.MethodsOne hundred cases of RGH patientswere selected as research objects.IL-2 levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA），and the T lymphocyte subsets were detected by flow cytometry.Another 100 healthy volunteerswithout infectious diseases served in control group.ResultsThe serum IL-2 level of RGH group was significantly lower than that of normal control group（P＜0.01）；Peripheral serum CD3+，CD4+，CD4+/CD8+T expression in RGH group were significantly lower than those of the control group（P＜0.05）；while the CD8+T cell expression was significantly higher than thatof the control group（P＜0.05）；peripheral blood CD3+，CD4+，CD4+/CD8+T cells of elderly patients in RGH group was significantly lower than thatof young patient（sP＜0.05），and CD8+T cellswas significantly higher than that of young patients（P＜0.05）.ConclusionThe IL-2 and T lymphocyte subsets of patients with RGH were abnorma1.There are cellular immune dysfunction and immune suppression in the patientswith RGH.

herpes，genital；interleukin-2；T lymphocytes

R752.1

A

1007-3205（2013）06-0664-03

2012-11-19；

2013-01-09

陈宏（1968-），男，浙江绍兴人，浙江省绍兴市人民医院副主任医师，医学学士，从事皮肤疾病诊治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.06.016

复发性生殖器疱疹（recurrent genital herpes， RGH）是一种主要由单纯疱疹病毒（herpesvirus 2，HSV-2）感染所致的疾病，发病率逐年上升。HSV-2病毒侵入人体后，潜伏在骶神经根区，通过与疱疹病毒感染患者性接触传染，生殖器皮肤黏膜发生感染，