原因不明复发性流产患者免疫治疗前后血清中趋化因子水平变化

2013-03-03杨素娟赵志明郝桂敏尹桂然

河北医科大学学报 2013年6期

关键词：主动免疫趋化因子免疫治疗

杨素娟，赵志明，郝桂敏，尹桂然

（1.河北医科大学第二医院生殖医学科，河北石家庄050000；2.河北医科大学第二医院妇产科，河北石家庄050000）

·论著·

原因不明复发性流产患者免疫治疗前后血清中趋化因子水平变化

杨素娟1，赵志明1，郝桂敏1，尹桂然2

（1.河北医科大学第二医院生殖医学科，河北石家庄050000；2.河北医科大学第二医院妇产科，河北石家庄050000）

目的研究主动免疫治疗前后血清中单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）、正常T细胞活化后所表达和分泌的调节蛋白（regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted，RANTES）和白细胞介素8（interlukin-8，IL-8）水平变化，探讨其在原因不明复发性流产（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）发病中的作用。方法2011年4月—2012年5月在河北医科大学第二医院生殖医学科就诊的URSA患者40例为研究组，正常非孕及正常妊娠组各20例为对照组。采用酶联免疫吸附法检测免疫治疗前后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平。结果URSA患者治疗前血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平均明显低于正常非孕组与正常妊娠组，差异有统计学意义（P＜0.05），而正常非孕组与正常妊娠组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。URSA患者免疫治疗后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平明显上升，与免疫治疗前相比差异有统计学意义（P＜0.05）。40例URSA患者根据免疫治疗后是否持续妊娠分为持续妊娠组27例和非持续妊娠组13例。持续妊娠组免疫治疗后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平增长率明显高于非持续妊娠组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论主动免疫治疗可提高URSA患者血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平，在持续妊娠组升高明显，尤其是RANTES具有封闭抗体效应，更有利于妊娠的持续发展。

流产，习惯性；趋化因子类；免疫；治疗

复发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指连续发生2次或2次以上的自然流产。其发病原因复杂多样，有遗传、内分泌、解剖、感染等方面的原因，总体的发生率约为5％。原因不明复发性流产（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）是指患者发病原因不明，占40％～60％［1］。研究发现，URSA与同种免疫有关，学者们在该领域做了许多研究，但确切的机制尚待阐明。为探讨趋化因子导致流产的可能机制，本研究报告40例URSA患者免疫治疗前后的血清中正常T细胞活化后所表达和分泌的调节蛋白（regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted，RANTES）、白细胞介素8（interleukin-8，IL-8）和单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）水平的变化。

1 资料与方法

1.1 研究对象：URSA组为2011年4月—2012年5月在河北医科大学第二医院就诊的URSA患者40例，年龄23～35岁，平均26.9岁。自然流产均≥2次，排除染色体、解剖、内分泌异常，无生殖道感染，男方精子无异常，也无自身免疫性疾病。所有病例均接受主动免疫治疗［1-2］。根据妊娠结局，即是否持续妊娠，分为持续妊娠组（27例）和非持续妊娠组（13例）。正常非孕组为20例同期门诊要求放置宫

内节育器妇女，年龄23～36岁，平均27.6岁。既往均有妊娠史，但无自然流产、死胎或死产史等。正常妊娠组为20例同期门诊因孕40～49d要求人工流产的正常妊娠妇女，年龄22～34岁，平均27.9岁，既往无不良孕育史及上述疾病史，人工流产前无流产先兆。

1.2 方法：抽取研究对象空腹肘静脉血3mL，置无菌试管室温下待其自然凝固，2 000r/min离心10min，分离血清后置-70℃冰箱待测。采用酶联免疫吸附法检测血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平。测定过程中严格按试剂盒（RB美国）说明书操作，且为一次检测，以减少批间误差和操作误差。

1.3 统计学方法：应用SPSS13.0统计软件进行数据处理，计量资料以±s表示，分别采用方差分析和t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 URSA患者主动免疫治疗前与正常非孕组、正常妊娠组血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平的比较：URSA患者主动免疫治疗前血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平明显低于正常非孕组和正常妊娠组，差异有统计学意义（P＜0.05），而正常非孕组与正常妊娠组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.2 URSA患者主动免疫治疗前后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平的比较：URSA患者主动免疫治疗后血清中3种趋化因子水平均明显上升，与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1 免疫治疗前血清中3种趋化因子浓度比较Table 1 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in serum before immunotherapy（±s，ng/L）

*P＜0.05 vs URSA group by q testURSA：unexplained recurrent spontaneous abortion；MCP-1：monocyte chemotactic protein-1；RANTES：regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted；IL-8：interleukin-8

MCP-1 RANTES IL-8 URSA 40 130.771±133.351 228.379±187.936 351 Groups n .927±274.142 Non-pregnant 20 285.888±224.458*534.138±341.035*566.220±374.232*Pregnancy 20 232.418±183.086*416.043±408.000*539.745±340.786*

表2 URSA患者免疫治疗前后血清中3种趋化因子水平比较Table 2 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in URSA patients before and after immunotherapy（n=40，±s，ng/L）

MCP-1：monocyte chemotactic protein-1；RANTES：regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted；IL-8：interleukin-8

Time MCP-1 RANTES IL-8 Before immunotherapy 130.771±133.351 228.379±187.936 351.927±274.142 After immunotherapy 287.276±199.793 425.429±270.616 525.107±269.259 t＜0.05＜0.05＜0.05 4.121 3.782 2.850 P

2.3 持续妊娠组与非持续妊娠组主动免疫治疗后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平增长率的比较：持续妊娠组主动免疫治疗后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平增长率均较非持续妊娠组明显提高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 持续妊娠组与非持续妊娠组主动免疫治疗后血清中3种趋化因子增长率的比较Table 3 Com parison of grow th rates of MCP-1，RANTES，IL-8 levels after immunotherapy between ongoing pregnancy group and non ongoing pregnant group（％）

3 讨论

妊娠成功对于生殖免疫来说，是一种半同种移植。妊娠失败、流产的常见原因有染色体、解剖、内分泌异常等，此外还存在同种免疫型复发性流产，是一种同种免疫现象，属于免疫排斥［3］。流行病学调查发现，1次流产后再次流产的发生率为17％，2次流产后再次流产率为24％，3次流产后再次流产率为40％～50％［3］。对于胚胎染色体检查正常，而找不到病因的流产患者来说，随着流产次数的增加，其发生的比例亦增加［4］。

3.1 正常妊娠与趋化因子的关系：母体免疫在正常妊娠时，可能倾向辅助T淋巴细胞（Th）2型免疫应答而偏离Th1型细胞免疫，即向着Th2方向倾斜，以体液免疫为主。细胞滋养层细胞在各期胎盘阶段均可分泌Th1型细胞因子IL-8、IL-10。IL-8参与胚胎植入的调控，促进宫颈成熟，还可加重宫内感染。

RANTES与相应的受体结合后主要是特异性趋化T细胞、单核细胞、嗜酸性细胞，并能杀伤T细胞的活性，还参与宫颈成熟与分娩发动机制。最近研究［5］发现，RANTES水平低下时可导致流产，其原理是胎儿被当作异物被母体免疫系统排斥，因而RANTES具有封闭抗体效应，对成功妊娠起着重要作用。

在母体激素分泌调控下，MCP-1可与其受体相结合，在胚胎植入子宫内膜的整个过程中起着重要的作用［6］。妊娠早期滋养叶细胞即产生少量的MCP-1，妊娠中、晚期则产生较多的MCP-1，参与宫颈成熟与分娩发动机制。

本研究在免疫治疗前检测URSA组、正常非孕组、正常妊娠组患者血清中的RANTES、IL-8、MCP-1浓度。结果表明，URSA组3种趋化因子浓度明显低于正常非孕组和正常妊娠组，而正常非孕组与正常妊娠组比较差异无统计学意义，说明3种趋化因子浓度对胚胎植入的调控可能起着重要作用。

3.2 URSA与趋化因子的关系：鉴于上述血清中3种趋化因子在正常妊娠全过程中起着关键的作用。倘若趋化因子的浓度发生变化，将对胚胎植入产生不利影响而致流产。研究［7］表明，与对照组比较，URSA组Th1型细胞因子水平升高，而Th2型细胞因子水平降低；URSA患者血清中白细胞介素10水平明显降低，打破了Th1型与Th2型细胞因子的平衡关系，不能抑制Th1型细胞因子的产生，从而向Th1型细胞因子方向倾斜，最终导致流产。

若患者对混合淋巴细胞反应（mixed leukocytes reaction，MLR）反应过强，说明母体对胎儿产生排斥

反应也强，而RANTES发挥封闭抗体的效应则正是通过抑制母体与配体间的MLR。如若RANTES水平低下，封闭抗体缺失或不足最终容易导致流产发生［7］。MCP-1对单核细胞有较强的趋化能力，虽然对自然杀伤（natural killer，NK）不具有趋化能力，但当不需要穿过内皮细胞时也可激活NK细胞的杀伤功能。

本研究结果表明，血清中3种趋化因子URSA组均低于正常非孕组、正常妊娠组，说明3种趋化因子，尤其是RANTES浓度的改变对URSA患者起着重要作用。

3.3 免疫治疗与趋化因子的关系：URSA与免疫因素密切相关，倘要母体血清中缺乏抑制MLR的封闭因子，则母体可能会对携带父系抗原的胎儿产生排斥反应导致流产。3种趋化因子中能够介导母体耐受主要是RANTES。研究［8］表明，URSA组与正常妊娠组比较，血清中MLR偏低，且其反应水平随妊娠次数增加而升高。体外MLR实验显示RANTES能抑制母体对父系抗原的排斥反应，从而说明RANTES是通过免疫抑制来实现对胎儿保护作用的。增加孕酮的水平，可使子宫内膜中T细胞表达RANTES水平亦增高［9］，说明T细胞产生RANTES能力的下降，可能与URSA的发生有关。

研究证实，血清中RANTES水平明显低的URSA患者，在接受配偶的淋巴细胞主动免疫治疗后，MLR反应强度较前显著下降，RANTES水平较前显著升高，且有80％再次妊娠成功［10］。

本研究结果显示，主动免疫治疗后血清中3种趋化因子均上升，尤其是持续妊娠组比率显著上升，表明主动免疫治疗方法对URSA患者的持续妊娠的维持是可行的。

［1］杨素娟，江静，郝桂敏，等.主动免疫治疗原因不明习惯性流产的临床研究［J］.实用妇产科杂志，2007，23（5）：300-302.

［2］杨素娟，尹桂然，刘慈，等.原因不明复发性流产的免疫治疗［J］.河北医药，2010，32（24）：3486-3487.

［3］王文娟，邱丽华，林其德，等.连续2次原因不明自然流产免疫治疗必要性的探讨［J］.中国实用妇科与产科杂志，2010，26（2）：122-124.

［4］SUGIURA M，OZAKI Y，KATANO K.Diagnosis and treatment methods in recurrent miscarriage［J］.Nihon Rinsho，2010，68（12）：2351-2356.

［5］FRACCAROLI L，ALFIERI J，LAROCCA L，et al.A potential tolerogenic immunemechanism in a trophoblast cell line through the activation of chemokine-induced T cell death and regulatory T cellmodulation［J］.Hum Reprod，2009，24（1）：166-175.

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［8］刘秀芝，李伟毅.趋化因子与生殖免疫［J］.生殖与避孕，2009，29（3）：172-175.

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［10］LIN QD，QIU LH.Pathogenesis，diagnosis，and treatment of recurrent spontaneous abortion with immune type［J］.Front Med China，2010，4（3）：275-279.

（本文编辑：刘斯静）

·病例报告·

LEVELSOF SERUM CHEMOKINES BEFORE AND AFTER INITIATIVE IMMUNOTHERAPY IN UNEXPLAINED RECURRENT SPONTANEOUS ABORTIONWOMEN

YANG Sujuan1，ZHAO Zhiming1，HAO Guimin1，YIN Guiran2
（1.Center of Reproductive Medicine，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，
China；2.Department of Gynaecology and Obstetrics，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China）

Objective The serum levels of three chemokines monocyte chemotactic protein-1（MCP-1），regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted（RANTES），interleukin-8（IL-8）before and after active immunotherapy were studied for the effect in the unexplained recurrent spontaneous abortion（URSA）pathogenesis.Methods Forty URSA patients in the hospital from April 2011 to May 2012 were enrolled in study group，with 20 normal non-pregnant，20 normal pregnancy women were included in control groups.The levels of MCP-1，RANTES and IL-8 were determined using enzyme linked immunosorbent assay.Results The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 of URSA patients before treatmentwere significantly lower than those of normal non-pregnant group and normal pregnancy group，the differences were statistically significant（all P＜0.05），while the differences between the normal non-pregnant group and the normal pregnancy group had no statistical significance（P＞0.05）.

abortion，habitual；chemotactic factors；immunity；therapy

R711.6

1007-3205（2013）06-0649-04

2013-04-01；

2013-05-16

2012年河北省医学科学研究重点课题计划（20120305）

杨素娟（1971-），女，河北肃宁人，河北医科大学第二医院主管检验师，医学学士，从事生殖医学研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.06.011

The levels ofMCP-1，RANTES，IL-8 in serum were significantly increased in URSA patients after immune treatment compared with before treatment，the differences were statistically significant（P＜0.05）. According to whether to continue pregnancy after immunotherapy，40 cases of URSA patientswere divided into the ongoing pregnancy group with 27 cases，and the non ongoing pregnant group with 13 cases.The growth rates of MCP-1，RANTES，IL-8 levels after treatment in the ongoing pregnancy group were higher than those of the non ongoing pregnant group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.ConclusionThe levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in patients with URSA can be improved after active immunotherapy，especially in the ongoing pregnancy group.RANTESwith a blocking antibody effect，may bemore conducive to the sustainable development of pregnancy.