马铃薯新品种陇薯10号再生体系的建立

贾小霞，文国宏，齐恩芳，李高锋，李建武，胡新元

（1.甘肃省农业科学院马铃薯研究所，甘肃 兰州 730070；2.甘肃省农业科学院生物技术研究所，甘肃 兰州 730070）

马铃薯是重要的粮食、蔬菜兼用作物。试管苗茎段是马铃薯组织培养中常用的材料，能诱导植株再生，但由于马铃薯茎段胚性愈伤的产生受遗传因素的影响，不同基因型胚性愈伤诱导率差异很大。目前研究人员已成功建立了马铃薯品种大西洋、夏波蒂、费乌瑞它、陇薯3号和陇薯6号等的再生体系。陇薯10号是甘肃省农业科学院马铃薯研究所选育的马铃薯新品种，结薯集中，单株结薯3～5个，薯形整齐美观，商品薯率一般90%以上，抗晚疫病。薯块休眠期长，耐运输，耐贮藏，适合菜用鲜食。我们将陇薯10号试管苗茎段在不同培养基上进行培养，旨在选择合适的培养基，建立该品种的高效再生体系。

1 材料和方法

1.1 材料

陇薯10号马铃薯试管苗（甘肃省农业科学院马铃薯研究所提供）。

1.2 方法

1.2.1 外植体制备 取带有4～6个茎节的脱毒马铃薯试管苗，在无菌条件下切成带1个腋芽的单节茎段，转接到盛有40mL经过高压灭菌的固体MS培养基、容积为150mL的三角瓶中。将三角瓶放于培养箱中，在温度（25±1）℃、光照强度2 000 Lx、光照时间16 h/d条件下培养，待试管苗长至4～5个茎节时，在相同条件下进行扩繁。

1.2.2 再生体系的建立 以生长健壮的试管苗茎段为外植体材料，将其切割成长0.5 cm的茎段，接种到不同激素配比的愈伤组织诱导培养基（表1）中，每种培养基接10皿，每皿20～24个茎段，共200～240个外植体，在温度（25±1）℃、光照强度2 000 Lx，光照时间16 h/d条件下培养28 d，统计胚性愈伤诱导率。将在编号为D的培养基上获得的胚性愈伤转入芽分化培养基（表2）中诱导芽分化，在同样的条件下培养至芽长1～2 cm时，将其切下转入MS培养基上诱导生根，愈伤组织每14 d继代1次。

表1 愈伤组织诱导培养基的成分及配比①

表2 芽分化培养基的成分及配比

1.2.3 观察与统计 于诱导愈伤28 d时统计产生愈伤组织的外植体数，计算出愈率。记录愈伤组织生长状况。

2 结果与分析

2.1 不同培养基愈伤诱导率比较

从表3可知，接种后28 d，培养基A上形成的愈伤组织大部分发粘、发软、排列松散、呈水渍状，为非胚性愈伤，胚性愈伤诱导率仅为11.60%。培养基B上非胚性愈伤诱导率为59.14%，胚性愈伤为34.14%，但大部分胚性愈伤组织颜色浅黄，色泽黯淡，两端膨大不明显，整体状态不良。而在C和E两种培养基上，一部分茎段膨大后形成白色须状物，非胚性愈伤诱导率分别为52.23%和27.03%，胚性愈伤分别为36.39%和63.67%，部分胚性愈伤组织颜色浅黄，两端膨大不明显。培养基D上胚性愈伤诱导率为93.85%，非胚性愈伤为5.03%，仅个别茎段膨大后褐化，形成的胚性愈伤深绿，组织致密呈哑铃状，整体状态良好。

表3 不同培养基上愈伤组织的诱导情况

2.2 胚性愈伤在不同分化培养基上的分化情况

将培养基D上诱导的胚性愈伤分别转入芽分化培养基后观察到，在1号、2号和7号培养基上，胚性愈伤表面出现白霜，长有白色须状物，无分化苗。在5号、10号培养基上，胚性愈伤颜色逐渐枯黄，没有光泽，无分化苗。在3号、4号和9号培养基上胚性愈伤逐渐褐化，并且表面出现粘状物，无分化苗出现。在6号和8号培养基上的胚性愈伤均有再生苗分化，其中8号培养基上的愈伤组织，颜色浅绿，15 d后生长缓慢，愈伤不再分化，24 d后有老化现象出现，分化苗弱小且弯曲；而6号培养基上的愈伤组织45 d后出现老化现象，较8号推迟21 d，且颜色鲜嫩，分化苗粗壮。因此，无论从植株再生率还是从外观形态特征来看，6号培养基的植株再生效果都好于其它几种培养基。

3 小结与讨论

1） 将茎段接种至MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+3.0mg/LGA3+0.5mg/L 2，4-D培养基上时，胚性愈伤诱导率最高。该培养基诱导的愈伤组织颜色正常，保持鲜绿色，两端膨大明显，成哑铃状，生活力强，是适合陇薯10号胚性愈伤诱导的最佳培养基。

2）6-BA的存在对于芽的分化与增殖具有决定性的影响。当6-BA浓度较小时（0.5mg/L）几乎没有芽的分化，随着6-BA浓度的升高（2.0mg/L），芽的分化率随之增加，而6-BA浓度过高（3.0mg/L）也不利于芽的分化。适当浓度ZT（2.0mg/L）的加入对芽的分化有一定的促进作用。两种生长调节剂的共同作用对芽的分化具有明显的协同促进作用，分化率可达63.05%，而两者单独存在时，都没有芽的发生，可见适合陇薯10号胚性愈伤芽分化的最佳培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+2.0mg/LZT+3.0mg/LGA3。

3）诱导愈伤组织的形成和形态发生是外植株再生的关键[1]。而通常情况下所接种的外植体，其细胞都是处于静止状态下的并具有分裂潜能的成熟细胞。若要激活这些静止状态下的细胞，就需通过一些外源生长激素及细胞分裂素的诱导，使其重新参加代谢并进行旺盛分裂。对于不同植物、基因型及外植体的诱导，所需的生长素及细胞分裂素的种类和量也不一样[2～4]。

[1]方贯娜，庞淑敏.马铃薯愈伤组织再生体系的研究进展[J]. 中国马铃薯，2012，26（5）：307-310.

[2]栾时雨，徐品三，夏秀英，等.适于马铃薯茎段再生的植物激素配比选择[J].中国马铃薯，2004，18（3）：143-144.

[3]李风云，盛万民，于天峰，等.马铃薯不同品种茎段再生系统的筛选[J].中国农学通报，2005，21（8）：99-100.

[4]李红梅，王义强.银杏胚芽组织培养试验初报[J].甘肃农业科技，2008（3）：37-39.