外源激素对毛头鬼伞液体培养中菌丝生长的影响

王谦，刘敏，李淑萍，苏岩

（河北大学 生物技术研究中心，河北 保定 071002）

毛头鬼伞 （Coprinuscomatus）俗称鸡腿菇，又名鸡腿蘑、刺蘑菇［1－2］，属真菌门，担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，鬼伞科，鬼伞属［3］.毛头鬼伞子实体蛋白含量高，营养丰富，而且其菌丝体活性成分具有抗肿瘤、提高机体免疫力和降血脂等多种功效［4－5］.近年来，大量研究表明，矿质元素和外源激素能够一定程度地影响食用菌菌丝体的生长.李林辉［6］的研究结果表明，补充适量的矿质元素能够促进鸡腿菇菌丝生长.外源激素因其可以提高农作物的产量和抗逆性早已被广泛地应用于农业.有关外源激素对食用菌菌丝体生长影响的研究本课题组已经开展了很多年，研究结果表明：外源激素对食用菌如金福菇、大白桩菇等菌丝体的生长具有较为明显的促进作用［7－8］.但是外源激素应用到食用菌液体培养上的研究报道还很少.近年来，对于毛头鬼伞液体培养方面的研究越来越多，液体菌种已被广泛用于毛头鬼伞的栽培中，为此，本课题组对外源激素对毛头鬼伞液体培养的影响进行了研究，探讨有利于提高毛头鬼伞液体菌种培养效率的几种激素的适宜添加质量浓度，以提高其生物量.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌种

毛头鬼伞菌种为河北大学食药用真菌研究所保藏菌种.

1.1.2 主要试剂

吲哚乙酸（IAA），赤霉素（GA），三十烷醇，2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D），萘乙酸（NAA）.

1.1.3 培养基

PDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1 000mL.

一级液体摇瓶培养基：马铃薯150g、葡萄糖20g、麸皮5g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、酵母粉2.5g、维生素B11.5mg、水1 000mL.

二级液体摇瓶培养基：马铃薯150g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、酵母粉2.5g、水1 000mL，加不同种类不同质量浓度的外源激素.

1.2 方法

1.2.1 培养方法

将毛头鬼伞斜面菌种接种到装液量为100mL的250mL三角瓶中，25℃，160r／min恒温振荡培养120h，制得一级液体菌种，备用.

1.2.2 实验方法

将IAA，GA，三十烷醇3种激素分别设置0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mg／L的质量浓度梯度，将2，4－D，NAA 2种激素分别设置0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg／L的质量浓度梯度，添加到二级液体培养基中，然后以10%的接种量将一级液体菌种接入100mL的二级摇瓶培养基中（三角瓶规格为250mL），25℃，160r／min振荡培养120h.培养结束后，直接测定菌丝体鲜质量.以菌丝体鲜质量为主要依据筛选出适于毛头鬼伞液体培养的激素种类及其质量浓度［7－8］.菌丝体鲜质量测定按照本研究所以往方法进行，可以实时检测发酵动态，是较干质量测定更为实用的快速测定方法［9］.

2 结果与分析

不同质量浓度的IAA对毛头鬼伞液体培养的影响见表1和图1.结果表明：IAA的加入对毛头鬼伞菌丝的生长有促进作用，当质量浓度为0.5mg／L时，菌丝体鲜质量达到最高，为35.96g，菌球数量也最高.菌丝体鲜质量提高了15.85%，因此IAA使用时适宜的质量浓度为0.5mg／L.

不同质量浓度的GA对毛头鬼伞液体培养的影响见表2和图2.结果表明：GA对毛头鬼伞菌丝的生长促进作用很明显，当质量浓度为1.5mg／L时，不论菌丝体鲜质量还是菌球数量都达到最高，菌丝体鲜质量为42.59g，较不添加时提高了37.21%，且与其他质量浓度存在极显著性差异，其后随着质量浓度的增大，促进作用越来越小，因此GA使用时适宜的质量浓度为1.5mg／L.

表1 不同质量浓度IAA对毛头鬼伞菌丝体鲜质量影响的多重比较Tab.1 Multiple comparison of different mass concentration IAA on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

图1 不同质量浓度的IAA对毛头鬼伞液体培养的影响Fig.1 Effect of different mass concentration IAA on Coprinuscomatus in liquid culture

图2 不同质量浓度的GA对毛头鬼伞液体培养的影响Fig.2 Effect of different mass concentration GA on Coprinuscomatus in liquid culture

表2 不同质量浓度GA对毛头鬼伞菌丝体鲜质量影响的多重比较Tab.2 Multiple comparison of different mass concentration GA on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

不同质量浓度的三十烷醇对毛头鬼伞液体培养的影响见表3和图3.结果表明：当三十烷醇质量浓度为0.5mg／L时，菌丝体鲜质量达到最高，为39.35g，较不添加时提高了26.77%，且与其他质量浓度存在显著性差异，菌球数量也最高，其后随着质量浓度的增大，促进作用越来越小.因此，三十烷醇使用时适宜的质量浓度为0.5mg／L.

不同质量浓度的2，4－D对毛头鬼伞液体培养的影响见表4和图4.结果表明：2，4－D的质量浓度在0～0.8mg／L时，随着质量浓度的提高菌丝生长加快，质量浓度为0.8mg／L时，菌丝体鲜质量达到最高，菌球数量也高，但与质量浓度为0.6mg／L时差异不显著，其后随着质量浓度的增大，促进作用越来越小，并且当超过1mg／L时，菌丝体鲜质量反而比添加激素前低.当2，4－D质量浓度为0.6mg／L时，菌丝体鲜质量提高了7.73%.因此2，4－D使用时适宜的质量浓度为0.6mg／L.

表3 不同质量浓度三十烷醇对毛头鬼伞菌丝体鲜质量影响的多重比较Tab.3 Multiple comparison of different mass concentration triacontanol on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

图3 不同质量浓度的三十烷醇对毛头鬼伞液体培养的影响Fig.3 Effect of different mass concentration triacontanol on Coprinuscomatus in liquid culture

图4 不同质量浓度的2，4－D对毛头鬼伞液体培养的影响Fig.4 Effect of different mass concentration 2，4－D on Coprinuscomatus in liquid culture

表4 不同质量浓度2，4－D对毛头鬼伞菌丝体鲜质量影响的多重比较Tab.4 Multiple comparison of different mass concentration 2，4－D on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

不同质量浓度的NAA对毛头鬼伞液体培养的影响见表5和图5.结果表明：随着NAA质量浓度的增大，对毛头鬼伞菌丝的生长促进作用明显，当质量浓度为0.4mg／L时，菌丝体鲜质量达到最高，为41.92g，较不添加时提高了35.05%，且与其他质量浓度存在显著性差异，菌球数量也最高，其后随着质量浓度的增大，促进作用越来越小.因此，NAA使用时适宜的质量浓度为0.4mg／L.

表5 不同质量浓度NAA对毛头鬼伞菌丝体鲜质量影响的多重比较Tab.5 Multiple comparison of different mass concentration NAA on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

图5 不同质量浓度的NAA对毛头鬼伞液体培养的影响Fig.5 Effect of different mass concentration NAA on Coprinuscomatus in liquid culture

3 结论

研究结果表明：在液体培养基中分别添加IAA，GA，三十烷醇，2，4－D，NAA，其对毛头鬼伞菌丝体的生长有不同程度的影响.当液体培养基中IAA，GA，三十烷醇，2，4－D，NAA 的质量浓度分别为0.5，1.5，0.5，0.6，0.4mg／L时，菌丝体生物量最大.在5种激素中，当GA的质量浓度为1.5mg／L时，菌丝体鲜质量最大，增幅最大，为37.21%，其次是NAA、三十烷醇.

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