丹参抗肝纤维化有效部位化学成分研究

王文祥

北京荣昌药物研究院，北京 100078

唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)是一常用中药。化学成分研究表明，其主要含有酚酸类水溶性成分和二萜类脂溶性成分。药理研究表明，丹参能降低肝内I、II型胶原mRNA水平;对由胶原构成的网状纤维结缔组织增生、沉积和延伸均有抑制作用，提示丹参可减少肝内细胞基质生成，抑制星状细胞转化为成纤维细胞［1，2］。我们用水提后醋酸乙酯萃取所得的酚酸类成分，动物药理研究表明有明显抗肝纤维作用［3］，为了进一步阐明其所含的化学成分，对其进行系统分离从中分离鉴定了7个化合物，其分别为:4、5、4'、5'-四羟基 1、2 双苯醚(1)，原二茶醛(2)，原二茶酸(3)，异阿魏酸(4)，咖啡酸(5)，丹参甲素(6)，丹酚酸D(7)，其中化合物1为首次从丹参中分得的化合物。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

熔点用WL-I型显微熔点仪测定，温度未校正。气质联用为Finnigan MD800红外用 perkin—Elmer 983红外分光光度计。质谱用JMS-DX 300质谱仪，核磁共振谱用ACF-300型核磁共振仪。薄层层析及柱层析用硅胶(200目)均为青岛海洋化工产品，分离中所用试剂均为色谱纯。

1.2 提取与分离

取丹参饮片10 kg，用16倍量水热提二次，每次1.5 h，滤过，合并液，浓缩至每毫升含生药0.5 g。加5%明胶沉淀鞣质，0～4℃放置12 h，滤过，滤液浓缩至每毫升含生药1.0 g，加95%乙醇至含醇量为70%，0～4℃放置12 h，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至每毫升含生药2.0 g。用稀盐酸调pH2到3，再用醋酸乙酯萃取，减压回收醋酸乙酯，真空干燥，即得丹参抗肝纤维化有效部位总酚酸。(平均得率大于2%)

将丹参总酚酸提取物拌硅胶后，分别用乙酸乙酯、丙酮和甲醇回流提取得乙酸乙酯、丙酮和甲醇三个部位，乙酸乙酯部位经硅胶反复柱层析得化合物1～5。丙酮部位经硅胶柱和ODS柱层析得化合物6、7。其中化合物1为首次从植物中分得的化合物。

1.3 鉴定

化合物1 为白色针晶，mp:198℃，三氯化铁反应阳性。元素分析，分子式为C12H8O6。C58.12%，H3.31%。理论值C58.06%。IR:(cm-1):3100(缔合 OH)，3083(芳 CH)，1692(—CH=C—O)，1645，1420，为芳环骨架振动，1310(—C=C—)。1H NMR:出现二个峰，δ:6.63 ppm，13.11 ppm。峰面积比值为1∶1，从峰形上看13.11为活泼H，可能为形成分子内氢键缔合峰，6.63为芳氢，无裂分，说明其邻位无其他质子。碳谱只有二个碳棒(165.97 ppm，133.98 ppm)均位于低场，说明此化合物无脂肪碳，并且为高度对称化合物。DEPT谱说明:133，98峰为叔碳。由此推断，化合物I可能为1、2、4、5四取代苯。因碳谱未有碳基峰，氢谱酚羟基如缔合需处邻位。EI/MS:248(M+)，203，185(203—H2O)，172，149(185—2H2O)，144(172—CO)，116(144—CO)，98，74，45。根据以上波谱数据结合有关文献［10，11］鉴定化合物 1 为:4，5，4'，5'—四羟基 1，2双苯醚。

化合物2 为灰白色针品，mp.195℃ 三氯化铁阳性。IR:(cm-1):3323，2754，1654，1595，1536，1477，1166，1118，974，876，813，754，631。MS(EI):M/Z 138(M+)，137(100)，109(48，62)，81(30.43)，63(17.09)，53(20.32)。1H NMR(DMSO-D6):δ ppm 6.90(1H，d，J=8 Hz)，7.23(1H，d，J=1.85 Hz)，7.27(1H，dd，J=8 Hz，J=1.85 Hz)，9.67(3 H，S，-OH，-OH，-CHO)。13C NMR(DMSO-D6):δ ppm 124.8(C-1)，129.2(C-2)，115.8(C-3)，114.7(C-4)，152.4(C-5)，146.2(C-6)，191.4(C-7)。根据以波谱数据并与标准原儿茶醛波谱相比较［4］，鉴定化合物2为原儿茶醛。

化合物4 为白色针晶，mp.213℃，三氯化铁阳性。IR(cm-1):3401，2979，2948，1671，1628，1511，1443，1263，1135，1023，977，857，815，760。MS(EI):M/Z 194(M+)，179(42.07)，133(19.28)。1H NMR(DMSO-D6):δppm3.81(3H，S，-OCH3)，6.25(1H，d，J=15.99)，7.46(1H，d，J=15.99)，7.10(1H，d，J=7.61 Hz)，7.24(1H，d，J=1.91 Hz)，7.28(1H，dd，J=7.97 Hz，J=1.96 Hz)。13C NMR(DMSO-D6):δppm 55.78(C-10)，127.24(C-1)，144.32(C-2)，141.99(C-3)，152.27(C-4)，116.40(C-5)，121.11(C-6)，112.16(C-7)，114.26(C-8)，167.89(C-9)。根据以上波谱数据并与已知化合物相比较［4］，鉴定化合物4为异阿魏酸。

化合物5 白色结晶，mp.186℃。三氯化铁试剂阳性。IR VKBrmax(cm-1):3482，3050-2556(br)，1645，1610，1599，1449，1277。1H NMR(DMSO):δ6.12(1H，1d，J=8.3，1.8)，7.31(1H，d，J=1.8)，7.43(1H，d，J=15.2)。化合物5与咖啡酸数据一致［4］，故鉴定化合物5为咖啡酸。

化合物6 为白色针晶。mp.IR:VKBrmax(cm-1):3600(OH)，3054(芳 H)，2943，2816，1646(COOH)，1567，1528，1469(为芳环骨架振动)，1393(—C=C—)，1211，1121，871。1H NMR(DMSO-D6):δppm 2.40(1H，dd，J=8.5 Hz，13.5 Hz)，2.83(1H，dd，J=5 Hz，13.5 Hz)，3.6(1H，ddJ=5 Hz，8.5 Hz)，6.44(1H，dd，J=7.95 Hz，1.93 Hz)，6.57(1H，d，J=7.95 Hz)，6.65(1H，d，J=1.93 Hz)。根据以上数据与已知波谱比较［6］，鉴定化合物6为丹参甲素。

化合物7 为黄色结晶，mp.288℃。三氯化铁反应阳性。IR(cm-1):3390(OH)，1795，1715()，1636，1614，1521(芳环)，1275，1185，1063，977。1H NMR δ(ppm)6.37(1H，d，J=18)，7.53(1H，d，J=18)为一反式双键氢，7.44(1H，d，J=8.5)，6.89(1H，d，J=8.5)为苯环上二个相连的氢，6.67(1H，d，J=6.76)，6.57(1H，dd，J=6.76，1.5 Hz)，6.69(1H，d，J=1.5 Hz)另一个苯环的两个邻位一个间位氢，2.96(1H，dd，J=8.5，13.5 Hz)，3.05(1H，dd，J=8.5，13.5 Hz)，5.07(1H，dd，J=5，8.5 Hz)2.08(2H，S)为一连环上氢。13C NMR和DEPT表明:3个碳基 碳1741，170，165.9。二个脂仲碳:36.3，33.11一个连氧叔碳73.24，以及7个芳季碳和7个芳叔碳。根据以上波谱数据［6，7］化合物7鉴定为:丹酚酸D。

2 讨论

上述分离鉴定结果表明:丹参水溶性酚性成分主要为酚性芳酸类化合物。根据分离得率丹参甲素和丹酚酸D所占比例最大，说明丹参抗纤维化有效部位是以丹参素为代表的丹参总酚酸，本研究在分离时未分到已报道的丹参抗纤维化有效成分丹酚酸A 和 B［8，9］，可能与其不稳定易氧化和分解，同时也提示它们不是丹参抗纤维化唯一有效成分，或者它们在体内抗纤维化是非原型化合物起作用而是先分解成其他化合物后再起作用。

1 Hu YY(胡义扬)，Liu C(刘成)，Liu P(刘平).Research status and prospects of the active ingredients of traditional Chinese medicine in antifibrotic.Chin Tradit Herb Drugs(中草药)，1996，27:183-185.

2 Xue HM(薛惠明)，Hu YY(胡义扬)，Gu HT(顾宏图)，et al.The inhibition of Salvia Miltiorrhiza on CCl4 and DMN-induced hepatic fibrosis rats.Chin J Inte Tradit West Med Liv Dis(中西医结合肝病杂志)，1999，9(4):16-18.

3 Ming ZJ(明志君)，Cao L(曹莉)，Wang WX(王文祥).Effelect of the extract of paeonia lactiflora and salvia miltiorrhiza on Liver fibrosis induced by BSA in rats.Acta Univ Med Nanjing(南京医科大学学报)，2006，26:925-928.

4 Yu DQ(于德泉).Handbook of Analytical Chemistry Volume V(分析化学手册，第五分册)NMR Spectroscopy.Beijing:Chemical Industry Press，1989.

5 Zheng GX(郑国樨).The chemical ingredients of Salvia Miltiorrhiza research overview.Chin Pharm J(中国药学杂志)，1989，24:6-10.

6 Zhang DC(张德成)，Wu WL(吴伟良)，Liu XJ(刘星阶)，et al.Research of Water-soluble Active Ingredients of Salvia Miltiorrhiza.Chin Tradit Pat Med(中成药研究)，1982;1，24.

7 Takako Y，Hae Y，Chung，HO，et，al.Isolation of the active component having the uremia-preventive effect from salviae miltiorrhizae radix extract.Chem Phar Bull，1988，36:316-320.

8 Chen YX(陈岳祥)，Li S(李石)，Fan LY(范列英)，et al.The Anti-hepatic Fibrosis Experimental Study of Salvia miltiorrhiza monomer IH764-3.Chin Med J(中华医学杂志)，1998，78:636-637.

9 Huang YS(黄诒森)，Zhang JT(张均田).Three water-soluble components of Salvia Miltiorrhiza Anti-oxidation effect in vitro．Acta Pharm Sin(药学学报)，1992，27:96-100.

10 Dai Y，Shi JQ，Zheng Q，et al.Thermodynamic Properties and Relative Stability of Polyhydroxylated Dibenzo-p-dioxins Calculated by Density Functional Theory.Chin J Struct Chem，2011，30:354-361.

11 Michael RL，Christopher AR，Patrick AR.The influence of hydroquinone on tyrosinase kinetics.Bioorg Med Chem，2012，20:4364-4370.