直肠癌患者血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶检测的临床价值

蔡瑞云， 陈洪亮，金凤哲

(瑞安市红十字医院检验科，浙江温州325200)

肿瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)是近年来新发现的一种肿瘤标志物，也是研究热门之一。相关研究报道显示多种肿瘤患者血浆TuM2-PK水平升高，而且与肿瘤的生长、侵袭、淋巴转移存在一定的相关。目前有关TuM2-PK对直肠癌诊断价值的研究较少。为此，我们检测了直肠癌患者血浆TuM2-PK水平，探讨TuM2-PK在直肠癌中的应用价值。

材料和方法

一、研究对象

收集瑞安市人民医院和瑞安市红十字医院肿瘤外科2012年3月至12月住院的直肠癌患者153例，男107例，女46例，年龄46～82岁;收集同期直肠良性病变患者48例，其中直肠息肉26例、低级别直肠上皮内瘤变15例、高级别直肠上皮内瘤变7例，男31例，女17例，年龄42～73岁。所有患者均经病理诊断证实，直肠癌患者术前未接受任何放化疗。随机选取无肿瘤史、癌胚抗原(CEA)、癌抗原199(CA199)、癌抗原72-4(CA7-24)正常的健康体检者32名作为正常对照组，男20名，女11名，年龄39～72岁。

二、方法

1.样本收集 所有对象均于早晨采用EDTAK2抗凝管采集空腹静脉血2 mL，1 h内离心分离出血浆存于-80℃备用。

2.仪器与试剂 仪器为瑞士帝肯TECAN SUNRISE全自动酶标仪，检测波长为450 nm。TuM2-PK采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测，试剂盒由德国ScheBo ò Biotech AG公司提供，严格按试剂说明书进行操作，以TuM2-PK＞15 U/mL 判断为阳性结果［1］。

3.检测方法 采用双抗体夹心ELISA。用纯化的人丙酮酸激酶M2型抗体包被微孔板，血浆样本中的TuM2-PK与之结合反应，再加入HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经洗涤后加底物TMB显色，颜色深浅与样本中TuM2-PK水平成正比，用酶标仪读取标准液与样本的吸光度(A)值，检测中需制定标准曲线，标准液由厂家提供，通过标准浓度与对应的A值在CURVE EXPERT软件下建立标准曲线，然后通过样本的A值算出样本TuM2-PK浓度。

三、统计学方法

结 果

一、各组血浆TuM2-PK水平比较

直肠癌组血浆TuM2-PK水平为(26.23±5.36)U/mL，明显高于直肠良性病变组［(18.52±3.66)U/mL］及正常对照组［(17.68±4.02)U/mL］(P均＜0.05)。而直肠良性病变组与正常对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。

二、直肠癌不同临床病理参数间TuM2-PK阳性率的比较

直肠癌患者血浆TuM2-PK阳性率与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移与否及临床TNM分期有关，见表1。

表1 直肠癌不同临床病理参数TuM2-PK表达阳性率的比较

三、血浆TuM2-PK诊断直肠癌的性能指标

以病理结果为金标准对直肠癌组与直肠良性病变组TuM2-PK检测结果进行诊断性能分析。血浆TuM2-PK检测直肠癌的敏感性为62.09%、特异性为79.16%、阳性似然比为2.20、阴性似然比为0.49、阳性预测值为90.47%、阴性预测值为39.58%。

讨 论

丙酮酸激酶(PK)是糖酵途径中的一个关键酶，相对分子质量约为240 000，主要以由4个亚基组成的四聚体形式存在，有2种结构基因(L基因、M基因)和4种同工酶。4种同工酶通常以酶的活性四聚体形式存在，但在肿瘤细胞中主要以磷酸化丙酮酸低亲和力的二聚体形式存在。这种二聚体的M2型PK被称为TuM2-PK，与磷酸烯醇丙酮酸亲和力很低，因此，会导致磷酸烯醇类物质的大量堆积，DNA合成的增加［2］。TuM2-PK在增生细胞中呈普遍表达，但在恶性肿瘤中呈现过度表达，恶性肿瘤这种异常能量代谢是TuM2-PK增高的主要原因。在肿瘤的坏死或转移的过程中TuM2-PK会被释放到外周体液中，因此外周血中可以检测到TuM2-PK［3］。

本研究结果发现在直肠癌组血浆TuM2-PK水平明显高于直肠良性病变组与正常对照组(P均＜0.05)，而直肠良性病变组与正常对照组之间无明显差异(P＞0.05)。由此可见，确定TuM2-PK的医学决定水平可用于区别直肠的良、恶性病变，这与卢仁泉［4］等对胃癌的研究结果相似。直肠癌患者TuM2-PK的阳性率与癌细胞的分化程度、肿瘤是否有淋巴转移以及临床病理TNM分期有关，而与患者性别、年龄、肿瘤的大小无关。虽然TuM2-PK阳性率与肿瘤浸润深度之间不存在正相关关系，但随着浸润的加深，TuM2-PK的阳性率也呈增加趋势。癌细胞分化程度越低，血浆中TuM2-PK水平就越高;有淋巴转移的患者TuM2-PK阳性率高于未发生淋巴转移的患者。在临床病理TNM分期中，Ⅲ～Ⅳ期患者血浆TuM2-PK阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者。这些结果均明确表明直肠癌患者TuM2-PK水平随着癌细胞生物状态的改变而改变，一定程度上反映了肿瘤的发生、发展。

本研究采用ELISA检测TuM2-PK，试剂中包被的2种单克隆抗体针对TuM2-PK不同的位点，避免了与其他PK同工酶的交叉反应，保证了结果的准确性。本研究发现TuM2-PK诊断直肠癌的灵敏度、特异性分别为62.09%、72.16%，低于Hardt等［4］的报道，灵敏度也低于叶维洁等［6］的报道，但高于其他肿瘤标志物如CEA、CA199等的灵敏度和特异性。

综上所述，直肠癌患者血浆TuM2-PK水平可在一定程度上代表癌细胞的生物学状态，反映了直肠癌的发生、发展。如果能通过本地区大规模人群的研究，确定TuM2-PK的阳性判断阈值，将有助于提高TuM2-PK的临床应用价值。

［1］Lüftner D，Mesterharm J，Akrivakis C，et al.Tumor type M2 pyruvate kinase expression in advanced breast cancer［J］.Anticancer Res，2000，20(6D):5077-5082.

［2］方伟达，梁文勇，余其昌.肺癌患者肿瘤M2型丙酮酸激酶的表达水平及临床意义［J］.现代肿瘤医学，2011，19(7):1352-1353.

［3］Mazurek S，Boschek CB，Hugo F，et al.Pyruvate kinase type M2 and its role in tumor growth and spreading［J］.Semin Cancer Biol，2005，15(4):300-308.

［4］卢仁泉，郭 林，许晓峰.胃肠道恶性肿瘤患者血浆肿瘤型M2-丙酮酸激酶测定及其临床价值［J］.检验医学，2008，23(4):370-373.

［5］Hardt PD，Ngoumou BK，Rupp J，et al.Tumor M2-pyruvate kinase:a promising tumor marker in the diagnosis of gastro-intestinal cancer［J］.Anticancer Res，2000，20(6D):4965-4968.［6］叶维洁，金冶宁.肿瘤型丙酮酸激酶在结直肠癌血浆中的测定及其临床意义［J］.现代肿瘤医学，2010，18(3):511-514.