子宫内膜异位症患者血清骨桥蛋白抗体及转铁蛋白抗体水平分析

周群芳 冷金花

1.民航总医院妇产科 (北京，100063);2.北京协和医院妇产科

·临床研究·

子宫内膜异位症患者血清骨桥蛋白抗体及转铁蛋白抗体水平分析

周群芳1冷金花2

1.民航总医院妇产科 (北京，100063);2.北京协和医院妇产科

目的:探讨血清中骨桥蛋白抗体和转铁蛋白抗体与子宫内膜异位症的关系。方法:用酶联免疫吸附试验方法检测108例子宫内膜异位症患者及88例健康妇女血清中骨桥蛋白抗体及转铁蛋白抗体水平。结果:子宫内膜异位症患者血清中骨桥蛋白抗体OD值为0.84±0.25，对照组为0.63±0.20;转铁蛋白抗体OD值为1.06±0.31，对照组为0.75±0.27，子宫内膜异位症组均明显高于对照组(均P＜0.05)。子宫内膜异位症I、II期患者血清骨桥蛋白抗体OD值(1.04 ±0.30)明显高于 III、IV期患者(0.68 ±0.20)及对照组妇女(0.63 ±0.20)(均P＜0.05)。子宫内膜异位症组转铁蛋白抗体阳性率为25.0%(27/108)，骨桥蛋白抗体阳性率为20.3%(22/108)，两者均阳性占13.9%(15/108)，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。相关分析发现子宫内膜异位症患者血清中转铁蛋白抗体水平与骨桥蛋白抗体水平呈正相关(r=0.875，P＜0.05)。结论:抗骨桥蛋白抗体可能与子宫内膜异位症的发展有关。

子宫内膜异位症 骨桥蛋白抗体 转铁蛋白抗体 酶联免疫吸附试验

子宫内膜异位症(简称内异症)的发病机制尚不明确，可能与多种原因有关。骨桥蛋白是近年来发现的一种分泌型磷酸化糖蛋白，在多种恶性肿瘤组织中高表达，与恶性肿瘤的生长和转移有关，且参与机体免疫反应的调节。其在绒毛膜滋养层、绒毛外滋养细胞、孕早期细胞滋养层和整个胎盘中均有表达，广泛参与生殖的全过程［1］。有研究表明，自身抗体也参与内异症的发病过程，如转铁蛋白抗体［2］。骨桥蛋白作为分泌期子宫内膜腺上皮细胞表达明显上调的蛋白之一，在孕卵的着床与发育等方面起重要作用［3～5］，在内异症患者的子宫内膜中表达明显增高。本研究检测内异症患者血清骨桥蛋白抗体，并探讨与转铁蛋白抗体的关系，从而为研究其发病机制及诊断价值提供依据。

1 材料与方法

1.1 血液标本

选取2007年6月～2008年12月在本院妇产科经腹腔镜证实为内异症患者共108例为观察组，其中 I、II期34 例，III、IV 期 74 例，年龄 32.02 ±7.72(20～50)岁。对照组88例选取健康体检妇女，年龄33.63 ±6.02(21 ～51)岁。术前采集静脉血2ml，EDTA抗凝，3 000r离心2min，取血清保存于－70℃冰箱中。各组妇女肝肾功能正常，术前未接受激素及其他抗内异症的药物。

1.2 主要试剂

转铁蛋白(Sigma，美国)，骨桥蛋白(本实验室通过重组质粒表达及纯化［6］)，HRP－山羊抗人IgG(北京中杉金桥生物技术公司)，其他试剂为国产分析纯;酶标仪(BIO－RAD 680，日本)。

1.3 实验步骤

将转铁蛋白、骨桥蛋白抗原用包被液稀释(浓度均为 1μg/ml)，加入凹孔板，每孔 100μl，4℃过夜，至少12h。PBS洗涤3次。加4%牛血清白蛋白PBS液，每孔 200μl，37℃温箱孵育 2h。洗板，加待测血清(用PBS液 1:30稀释)，每孔100μl，置37℃温箱孵育2h。洗板，加二抗(用PBS按1:8 000稀释)，每孔加HRP－山羊抗人IgG(1:8 000稀释)100μl，37℃孵育 2h。洗板，加底物溶液(OPD)，每孔 100μl，避光反应 10min，2M H2SO4每孔 50μl终止反应，酶标仪比色，波长490nm，测定吸光度A值。以P/N≥2.1(P为待测标本A值，N为正常对照组平均A值)为阳性标准。

1.4 统计学分析

采用SPSS10.0软件进行分析，组间率的比较用χ2检验，相关性采用Pearson相关分析，计量资料采用t检验分析。

2 结果

2.1 骨桥蛋白抗体、转铁蛋白抗体的检测

2.1.1骨桥蛋白抗体观察组血清中骨桥蛋白抗体OD 值为0.84 ±0.25，对照组为0.63 ±0.20，两组存在统计学差异(P＜0.05)。

2.1.2转铁蛋白抗体观察组转铁蛋白抗体OD值为1.06 ±0.31，对照组为 0.75 ±0.27，两组存在统计学差异(P＜0.05)。

2.1.3不同临床分期内异症患者两种抗体内异症I、II期患者骨桥蛋白抗体 OD 值(1.04 ±0.30)明显高于内异症III、IV 期患者(0.68±0.20)及对照组(0.63 ±0.20)，均P＜0.05。

2.1.4两种抗体阳性情况以对照组OD值的均值+2SD为切点值，观察组转铁蛋白抗体、骨桥蛋白抗体的阳性率见表1。

表1 两组血清骨桥蛋白、转铁蛋白抗体阳性情况比较［例(%)］

2.2 骨桥蛋白抗体、转铁蛋白抗体水平的相关性

采用Pearson相关分析方法，发现内异症患者血清中转铁蛋白抗体水平和骨桥蛋白抗体水平呈正相关(r=0.875，P＜0.05)。

3 讨论

3.1 骨桥蛋白在内异症病理意义

骨桥蛋白是一种具有多种生物学活性的分泌型磷酸化糖蛋白，可介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质的相互作用;介导细胞的趋化、聚集、黏附、增殖和迁移;参与细胞免疫调节，而且与生殖有着密切的联系［7～9］。在正常月经周期中，骨桥蛋白主要表达于分泌中晚期的子宫内膜，可能在胚胎植入过程中，受精卵与子宫内膜相互作用时发挥直接效应，参与子宫内膜受容性的形成。研究表明，骨桥蛋白的表达与植入过程中胚胎滋养层侵入的深度相关，骨桥蛋白的表达减少与流产有关［10］。研究发现:骨桥蛋白在内异症患者在位子宫内膜分泌期的表达增强，异位子宫内膜的表达失去周期性，提示骨桥蛋白在异位子宫内膜黏附、种植中起重要的作用［11，12］。骨桥蛋白、归巢受体CD44、整合素黏附分子以及降解细胞外基质的蛋白酶等在子宫内膜细胞中大量表达，从而介导细胞的侵袭和转移。

3.2 骨桥蛋白抗体、转铁蛋白抗体检测在内异症中的意义

正常情况下，含有大量骨桥蛋白的月经期子宫内膜可以经阴道完全排出体外，当内异症时，异位在腹腔中的子宫内膜不能经阴道排出体外，引发慢性炎症反应，导致免疫细胞浸润。研究证实，内异症患者B细胞功能活跃，产生自身抗体，这些自身抗体与相应抗原结合引起体液免疫反应，可以干扰孕卵种植，引起不孕和早期自然流产［13，14］。本文对内异症患者骨桥蛋白抗体的初步研究表明，部分内异症患者血清中存在骨桥蛋白抗体，且I、II期抗体水平明显高于III、IV期患者，提示骨桥蛋白抗体可能与内异症的发展有关。此外，内异症患者骨桥蛋白抗体水平与转铁蛋白抗体水平呈正相关，这为研究内异症的发病机制及诊断和预后提供了新思路。而骨桥蛋白抗体在内异症发病过程中发挥何种作用，骨桥蛋白抗体的产生是内异症的原因还是结果，还有待进一步研究。

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7 李迎军，王霭明，张雷，等.米非司酮对人早孕绒毛及蜕膜中骨桥蛋白和绒毛膜促性腺激素－β的影响［J］.生殖与避孕，2008，28(7):436－440.

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9 杨静华，冯丽，李丽，等.OPN，CA125和199检测对卵巢上皮癌诊断和预后价值［J］.中国计划生育学杂志，2007，15(12):740－742.

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11 马彩虹，陈贵安，韩劲松，等.骨桥蛋白在人正常月经周期子宫内膜的表达［J］.生殖医学杂志，2006，15(1):1－5.

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Levels of anti－osteopontin and anti－transferrin antibodies in sera of patients with endometriosis

Zhou Qunfang1，Leng Jinhua2
1.Civil Aviation Hospital，Beijing100123;2.Peking Union Hospital

Objective:To explore the pathogenesis of endometriosis by evaluating levels of anti－osteopontin and anti－transferrin antibodies in sera.Methods:The enzyme－linked immunosorbent assay was used to detect levels of anti－osteopontin and anti－transferrin antibodies in sera of 108 women with endometriosis and 88 healthy women(the control).Results:The average OD values of anti－ osteopontin antibody in sera of women with endometriosis and the control were 0.84 ±0.25 and 0.63 ±0.20，respectively.The average OD values of anti－ transferrin antibody in sera of women with endometriosis and the control were 1.06 ±0.31 and 0.75 ±0.27，respectively.The level of anti－ osteopontin antibody in sera of women with stage I and stage II endometriosis(1.04 ±0.30)was significantly higher than those of women with stage III and stage IV endometriosis(0.68 ±0.20)and the control(0.63 ±0.20，Pall＜0.05).The positive rates of anti－ osteopontin，anti－ transferrin antibodies and both were 25.0%(27/108)，20.3%(22/108)and 13.9%(15/108)，significantly higher than that of the control(Pall＜0.05).The positive correlation between anti－osteopontin antibody level and anti－transferrin antibody level was found.Conclusion:Anti－ osteopontin antibody may be involved in the development of endometriosis.

Endometriosis;Anti－osteopontin antibody;Anti－transferring antibody;Enzyme－linked immunosorbent assay

10.3969/j.issn.1004 －8189.2012.08

2011－12－22

2012－04－05

［责任编辑:裴开颜］