黎药角花胡颓子提取物不同极性部位抗菌活性研究

魏 王 2 官 ▲ 李永辉

1.海南医学院药学院，海南海口 571199；2.齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔 161006

角花胡颓子（Elaeagnus gonyanthes Benth.）为胡颓子科胡颓子属植物，又名羊母奶子、吊中子藤，以根、叶、果入药，主要分布于广东、广西、湖南、云南等地。据《全国中草药汇编》中记载，胡颓子叶平喘止咳，其根能祛风通络，行气止痛，消肿解毒，其果能收敛止泻[1]，是海南黎族地区常用药之一，也是著名黎药品牌——荔花鼻窦炎片的主药。目前国内外学者已对胡颓子属植物如大叶胡颓子[2-3]、胡颓子的抗菌作用研究，而未见对角花胡颓子抗菌作用的研究报道，本实验通过角花胡颓子水提取液及各极性萃取部位对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白假丝酵母菌三种常见菌的体外抑菌实验，对不同极性部位进行抑菌活性筛选，观察其抑菌效果，明确各萃取部位抑菌率，确定角花胡颓子抑菌有效部位，为角花胡颓子提取物在抗微生物感染方面的开发和利用提供参考依据，为明确荔花鼻窦炎片治疗鼻炎作用物质基础提供理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

洁净工作台；电热恒温培养箱；手提式压力蒸汽灭菌器。

1.2 试药

角花胡颓子（采自海南省万宁市）；吐温80（分析纯汕头市光华化学厂）；正丁醇、乙酸乙酯和石油醚（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；营养琼脂培养基（广东环凯微生物科技有限公司）；沙氏琼脂培养基（上海研生生物技术科技有限公司）。

1.3 菌种

细菌：金黄色葡萄球菌（ATCC 6538），大肠杆菌（ATCC 25922）；真菌：白假丝酵母菌（ATCC 10231），由海南医学院基础部微生物教研室提供。

2 方法与结果

2.1 供试药液的提取萃取

称取角花胡颓子粉末50 g，加入500 mL蒸馏水，水煎煮2次，每次2 h，过滤，得滤液即角花胡颓子水提取物，水提取浓缩至一定量（置分液漏斗中）。分别以石油醚（1∶1）、乙酸乙酯（1∶1）、正丁醇（1∶1）反复萃取，合并各萃取物，减压回收，干燥，称重，得各萃取物，石油醚萃取物0.75 g，乙酸乙酯萃取物1.05 g，正丁醇萃取物0.83 g。实验时加2%吐温80配制成所需浓度。将以上四个供试品灭菌备用。

2.2 菌液制备

取菌株第3～14代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（18～24 h），用5 mL 0.03 mol/L磷酸盐缓冲液（以下简称PBS）洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用上述PBS稀释至所需浓度。

2.3 抑菌试验依据

按照《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979-2002[4]附录C4溶出性抗（抑）菌产品抑菌性能试验方法项进行。

2.4 角花胡颓子不同提取部位的抑菌试验

将试验菌24 h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液，并分别取出100μL加入含5 mL供试品样液（角花胡颓子水提取液、石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液，共4个样品）和对照品溶液（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白假丝酵母菌）的试管内，充分混匀，在（20±2）℃条件下，作用20 min，取0.5 mL样液和对照品溶液加入含5 mL PBS的试管内，混匀并适当稀释，分别取0.5 mL置于2个平皿，用营养琼脂培养基（细菌）或沙氏琼脂培养基（真菌）（35±2）℃培养48 h（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）或72 h（白假丝酵母菌），作活菌菌落计数。试验重复3次，计算抑菌率。抑菌率计算公式∶X4＝（A-B）/A×100%（C1）。其中式中∶X4代表抑菌率（%）；A代表对照样品平均菌落数；B代表被试样品平均菌落数。

2.5 评价标准

抑菌率在50%～90%，样品有抑菌作用；抑菌率≥91%，样品有较强抑菌作用。

2.6 结果

角花胡颓子提取物及不同萃取部位的抑菌试验结果见表1。角花胡颓子提取物及不同萃取部位的抑菌率结果见表2。角花胡颓子水提液及各萃取部位除乙酸乙酯萃取物对白假丝小酵母菌无抑菌作用外，其他各部分均有一定抑菌作用，并且角花胡颓子正丁醇萃取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率可达100%，表现出极强的抑菌作用；角花胡颓子石油醚萃取液对金黄色葡萄球菌抑菌率为98.61%，具有较强的抑菌作用；其他部位对3种常见菌均有一定抑菌作用。各菌种的抑菌作用规律：①金黄色葡萄球菌：角花胡颓子正丁醇萃取液﹥石油醚萃取液﹥乙酸乙酯萃取液﹥水提取液；②大肠杆菌：角花胡颓子正丁醇萃取液﹥石油醚萃取液﹥水提取液﹥乙酸乙酯萃取液；③白假丝酵母菌：角花胡颓子正丁醇萃取液﹥石油醚萃取液﹥水提取液。

3 讨论

本研究结果表明，角花胡颓子极性较大的正丁醇萃取部位中存在有效的抗菌成分，该萃取部位对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有极强的抑制作用，抑菌效果达到100%。该部位为角花胡颓子具有抗菌活性的有效部位，应进一步对活性部位进行化学成分分析与分离，再进行抗菌活性的研究，最终确定出具有抗菌活性的单体成分，为该植物资源的开发提供基础资料。

表1 角花胡颓子提取物及不同萃取部位的抑菌试验结果（cfu/mL）

鼻炎、鼻窦炎是因机体感染病菌及机体抵抗力降低所致，临床上一般采用抗菌、消炎、镇痛等药物治疗，抗感染是治疗该类疾病的重要措施之一[5-6]。荔花鼻窦炎片是临床上治疗急、慢性鼻窦炎的药物，角花胡颓子为该药物的主药，本研究结果显示角花胡颓子正丁醇部位具有极强的抑菌作用，尤其是对金黄色葡萄球菌的抑制作用，金黄色葡萄球菌是急性鼻窦炎的主要病原体之一，为阐明角花胡颓子治疗急、慢性鼻窦炎作用的物质基础提供依据。

[1]刘明生.黎药学概论[M].北京：人民卫生出版社，2008：88.

[2]由宝昌，刘建萍，张晓晖，等.大叶胡颓子茎的化学成分预实验及抗菌作用研究[J].北方园艺，2010，（10）：220-222.

[3]刘建萍，由宝昌，张晓晖，等.大叶胡颓子根的化学成分预实验及抗菌作用研究[J].江苏农业科学，2010，38（3）：353-355.

[4]中国国家质量监督检验检疫总局.一次性使用卫生用品卫生标准[S].北京：GB15979-2002-6-11.

[5]肖家军，童贯和，谢振荣，等.苍耳不同部位提取物抑菌活性比较[J].食品工业科技，2011，32（9）：138-140.

[6]李雁群，黎桦，陈超君，等.石韦醇提取物抑菌活性的初步研究[J].时珍国医国药，2010，21（1）：142-144.