罗勒籽脂肪酸及其对蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)抑制作用的研究

胡尔西丹·伊麻木，马庆苓，阿布力米提·伊力，热娜·卡斯木，阿吉艾克拜尔·艾萨中国科学院新疆理化技术研究所，乌鲁木齐800;中国科学院研究生院，北京0009; 新疆医科大学药学院，乌鲁木齐80054

罗勒(Ocimum basilicum L.)，为唇形科罗勒属中的一种，俗名九层塔，丁香，兰香等，为一年生草本植物，极具芳香。在我国连栽培在内有5种，3变种［1，2］。罗勒籽为唇形科(Lamiaceae)植物罗勒的干燥成熟果实，又名兰香子或明列子(Basil seed)，在国际上具有植物黄金的美称。坊间商业性俗名称花粉子、小紫苏、珍珠果、明珠果等。在维吾尔医药中罗勒籽药性为干寒，味辛。功能为生干生寒，燥湿止泻，凉血止血，清热爽心。主治湿热性或血热质性疾病，如湿热性痢疾、腹痛、腹泻、便血、痔疮出血及热性心脏疾病［3］。现代研究表明罗勒籽具有提高代谢、促进大脑发育、抗血栓、降血脂、减少中风和高血压发病几率的作用［4，5］。

近年来，关于罗勒和罗勒籽的脂肪酸成分，以及罗勒籽挥发油和芳香性成分国内有过报道［1，6-8］，而对新疆产罗勒籽的脂肪酸化学成分及其生物活性的研究却未见深入报道。新疆具有特殊的地理和气候条件，正是这种独特的地理环境，孕育出奇特的维吾尔药材。新疆植物中的化学成分以及活性成分含量与其他地方存在着差异。为了进一步开发利用新疆罗勒籽的食用和药用价值［9-11］，本论文利用索氏提取法提取罗勒籽油，向罗勒籽油加入氢氧化钾甲醇溶液后并用水浴加热，加入正己烷和蒸馏水萃取，用气相色谱质谱法(GC/MS)对萃取得到的脂肪酸进行分析;同时对其进行PTP1B的抑制作用的研究，以期为罗勒籽的深入研究提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料、仪器

1.1.1 材料

罗勒籽:购于新疆和田，由经中科院生态与地理研究所沈冠冕研究员鉴定为菊科罗勒属植物罗勒Ocimum basilicum L.干燥成熟果实，标本存放于新疆维吾尔自治区药物研究所标本室;其余试剂均为分析纯。

1.1.2 仪器

GC/MS-QP2010气相色谱-质谱联用仪(日本岛津公司);BP211D型电子天平(德国Sartorius有限公司);RE-5298A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHB-ⅢS循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);HH-W600三用恒温水箱(江苏省金坛市医疗仪器厂);SpectraMax M5型酶标仪;平底96孔ELISA板。

1.2 实验方法

1.2.1 样品制备

称取200 g罗勒籽，加入石油醚(60～90℃)，索氏提取法提取8 h，提取液用无水硫酸钠脱水，减压回收溶剂，得28.1 g淡黄色油状液体，其出油率为14.05%。

称取油样50 mg，转入10 mL容量瓶中，加2 mL 0.5 mol/L的氢氧化钾甲醇溶液，于60℃水浴加热60 min，加入2 mL正己烷，再加蒸馏水至刻度，取出上清液，用正己烷洗1次，合并上清液于小瓶中待测。

1.2.2 GC-MS分析

色谱条件:RTX-5MS石英毛细管色谱柱(30 m ×0.32 mm ×1.0 μm);升温程序:160℃保持2 min，以5℃/min升至260℃，保持10 min;进样口温度:260℃;载气(99.999%He)流速1.0 mL/ min，压力96.1 kPa;进样量1 μL;分流比20∶1。

质谱条件:电子轰击(EI)离子源;电子能量70 eV;离子源温度200℃;传输线温度250℃;质量扫描范围m/z 30～500。

取上清液1 μL进行测定，按峰面积归一化法计算化学成分的质量分数。所得质谱图采用Nist147谱库及Wiley7谱库进行检索。

1.2.3 PTP1B抑制作用的研究

按照文献［12］方法，即样品用适量DMSO溶解，取1 μL加入至200 μL反应体系中(pH 6.0，1 mmol/L EDTA，0.1 mol/L NaC1，5 mmol/L DDT，50 mmol/L柠檬酸)，加入底物pNPP至10 mmol/L，加入人重组PTP1B(PROSPEC)0.5 μg开始反应，37℃保温30 min，加入10 mmol/L。NaOH 20 μL终止反应，用酶标仪在405 nm测定吸收度(A)值，以原钒酸钠作为阳性对照，以不加PTP1B为空白对照，计算抑制率;

抑制率=(OD405空白-OD405样品)/OD405空白×100%

应用Origin软件计算IC50值，以此判断罗勒籽脂肪酸对PTP1B的抑制能力。

2 结果与讨论

2.1 罗勒籽油脂肪酸成分分析

按照上述条件，测得罗勒籽脂肪酸甲酯的气相色谱-质谱总离子流色谱图(TIC)，见图1，脂肪酸甲酯成分有4种，见表1。

图1 罗勒籽脂肪酸甲酯GC-MS总离子流图Fig.1 GC-MS of the fatty acids methyl ester from the seed of O.basilicum

表1 罗勒籽脂肪酸甲酯成分和含量Table 1 The main components of the fatty acids methyl ester from the seed of O.basilicum

15.746 C19H34O2 亚油酸甲酯Methyl linoleate 20.66 3 15.901 C19H32O2 α-亚麻酸甲酯Methyl α-linolenic acid 62.88 4 16.264 C19H38O2 硬脂酸甲酯2 Methyl stearate 5.79

由表1可知，在新疆产的罗勒籽的脂肪酸中，其含量最高的α-亚麻酸(62.88%)，其次为亚油酸(20.66%)。由于罗勒籽的产地、萃取方法、甚至储藏等条件不同，所提取的罗勒籽脂肪酸的主要成分的含量有所不同，曹维金等［13］测定的罗勒籽油中的亚麻酸(53.88%)、亚油酸(22.16%)、油酸(13.798%)。

2.2 PTP1B抑制作用的研究

将得到的罗勒籽脂肪酸进行PTP1B抑制作用的研究。结果表明，阳性对照原矾酸钠的IC50值为1.81 μg/mL，罗勒籽脂肪酸对PTP1B有较强的抑制作用，其IC50值为11.12 μg/mL。

由表1可知，罗勒籽脂肪酸中主要成分有α-亚麻酸 62.88%、亚油酸为 20.66%、棕榈酸为10.67%、硬脂酸为5.79%，其中亚油酸和亚麻酸不饱和脂肪酸的含量很高，可达80%以上，具有较高的营养价值。α-亚麻酸和亚油酸是人体必需脂肪酸，且无法由人体自行合成，必须从食物中摄取获得［14］。具有抗血栓［10］、降血脂［15］、降胆固醇［5］;促进大脑发育［16］，抑制缺血性心血管疾病等方面起重要作用［6］。

多年的临床和动物实验证明［17］，n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFA)的摄人能降低心血管疾病死亡率，降低血甘油三酯水平，升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平，减少血小板聚集，改善血管内皮功能，降低血压，改善胰岛素抵抗等。n-3多不饱和脂肪酸主要包括 α-亚麻酸(AIJA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)。在罗勒籽脂肪酸中含有62.88%的α-亚麻酸，由此可见，罗勒籽油是很好的保健食品，具有很高的食用和药用价值。

3 结论

在罗勒籽脂肪酸中，共鉴定出4种脂肪酸，其中α-亚麻酸 62.88%、亚油酸 20.66%、棕榈酸10.67%、硬脂酸5.79%。而且脂肪酸对PTP1B有较强的抑制作用，其IC50为11.12 μg/mL。

罗勒籽油中亚麻酸、亚油酸含量较多，具有良好的开发利用价值和广阔的应用前景。本文为我国新疆罗勒籽在食品及药用产品领域的开发提供了一定理论依据，并为罗勒籽的深入研究和资源利用奠定了基础。

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