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紫外-可见分光光度法测定川明参茎叶中总黄酮含量

2012-12-19明凯利宋芳芳陈朝霞张梅

中药与临床 2012年5期
关键词:芦丁结果表明容量瓶

明凯利,宋芳芳,陈朝霞,张梅

伞形科川明参属植物川明参Chuanminshen viloaceum Sheh et Shan为我国特有单种属植物,药用其根,是四川道地药材[1]。川明参根具有润肺化痰、和胃、生津、解毒等功效,适用于病后补虚和强壮身体,在四川及周边地区大量栽种,应用广泛。川明参茎叶通常在其根收获后作为废弃物丢弃。目前已有文献报道川明参茎叶中含有异虎耳草素、白当归脑、芦丁等香豆素类和黄酮类化学成分[2],尚未见茎叶中总黄酮的含量测定报道。因此,为了填补这一研究空白,促进川明参这一宝贵的药用资源的综合开发利用,本文参考相关文献[3~4],采用紫外-可见分光光度法建立了川明参茎叶中总黄酮的含量测定方法,该法简便、准确、可靠,为川明参茎叶的开发利用奠定了一定的实验基础。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

UV1100型紫外分光光度计(上海天美科学仪器有限公司);电子分析天平(Sartorius BP211D,十万分之一;Sartorius BP121S,万分之一);芦丁对照品(购于中国药品生物制品检定所,批号110826-200712);川明参茎叶由成都中医药大学药学院裴瑾教授鉴定为伞形科(Umbelliferae)川明参属植物川明参Chuanminshen viloaceum Sheh et Shan的茎叶。所用试剂均为分析纯,重蒸水(实验室自制)。

1.2 方法与结果

1.2.1 供试品溶液的制备 取川明参茎叶约0.5g 置于100mL烧瓶中,加20mL 60%乙醇回流提取2次,每次1h。过滤,合并滤液,挥干溶剂并用60%乙醇定容至25mL,即得供试品溶液。

1.2.2 对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量,精密称定,用60%乙醇溶解并定容,即得对照品溶液(0.265mg/mL)。

1.2.3 检测波长的选择 取对照品溶液和供试品溶液各2mL于25mL容量瓶中,加入60%乙醇至10mL,再加入5% NaNO2溶液1mL,摇匀,放置6min,加入10% Al(NO3)3溶液1mL,摇匀,放置6min,加入4% NaOH 溶液10mL,再加60% 乙醇至刻度,摇匀,放置15min,于400~800nm扫描,对照品溶液及供试品溶液均在506nm处有最大吸收(图1A,B),且峰形变化平缓,便于定量测定,故选择检测波长为506nm。

图1 对照品溶液及供试品溶液紫外扫描图谱

1.2.4 线性范围考察 分别精密吸取浓度为0.265mg/mL的芦丁对照品溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL于25mL量瓶中,加入60%乙醇至10mL,再加入5% NaNO2溶液1mL,摇匀,放置6min,加入10% Al(NO3)3溶液1mL,摇匀,放置6min,加入4%NaOH 溶液10mL,再加60% 乙醇至刻度,摇匀,放置15min,在506nm波长下测定不同浓度芦丁的吸光度值A,以浓度(C)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标作图,得到回归方程:y=11.453x +0.0122,r=0.9992。结果表明:在0.0212~0.0636mg/mL范围内,对照品芦丁的吸光度和浓度线性关系良好。结果见图2。

图2 对照品芦丁浓度与吸光度的关系

1.2.5 精密度试验 取川明参茎叶粗粉约0.5g,置于100mL烧瓶中,按1.2.1项下制备供试品溶液后,精密移取2mL于25mL容量瓶中,按照“1.2.4线性关系考察”项下方法从“加入60%乙醇至10mL”起,显色,测定吸光度,重复测定6次,其吸光度值的RSD=0.50%,结果表明精密度良好。

1.2.6 稳定性试验 取川明参茎叶粗粉约0.5g,置于100mL烧瓶中,按1.2.1项下制备供试品溶液后,精密移取2mL于25mL容量瓶中,按照“1.2.4线性范围考察”项下方法从“加入60%乙醇至10mL”起,显色,于0min、30min、60min、90min、120min分别测定其吸光度值,RSD=1.1%,结果表明供试品溶液在2小时内稳定性良好。

1.2.7 重复性试验 精密称取同一批号茎叶粗粉约0.5g,共6份,按1.2.1项下制备供试品溶液后,精密移取2mL于25mL容量瓶中,按照“1.2.4线性范围的考察”项下方法从“加入60%乙醇至10mL”起,显色,测定其吸光度并计算含量,RSD=3.1%,结果表明重复性良好。

1.2.8 加样回收试验 精密称取已知含量的川明参茎叶粗粉约0.25g,精密加入芦丁对照品适量,按1.2.1项下制备供试品溶液,显色,测定。计算得到芦丁的平均回收率为97.03%,RSD=2.3%(n=6)。结果见表1。

表1 加样回收率实验结果

1.2.9 样品测定 取不同产地川明参茎叶样品,按照拟定的含量测定条件进行测定,计算各产地样品中总黄酮含量,结果见表2。

表2 川明参茎叶中总黄酮含量测定结果(n=3)

2 讨论

2.1 在供试品溶液制备上,本实验主要对提取溶剂、提取方法和提取次数进行了考察。在提取溶剂的选择中,分别采用50%、60%和75%乙醇溶液加热进行回流提取,结果表明60%乙醇提取的总黄酮含量相对较高,且叶绿素含量相对较低,故采用60%乙醇作为提取溶剂。在提取方法的选择上,分别采用回流提取法和超声提取法进行提取,结果表明回流提取的总黄酮含量较高,故采用回流提取法进行提取。在提取次数的选择上,分别提取了1次、2次和3次。结果表明,回流提取2次样品吸光度值与提取3次样品吸光度值接近且较大,总黄酮含量较高,但提取2次较提取3次简便,故选择回流提取2次。

2.2 在对照品的选择上,考虑到中药中总黄酮含量测定时大多以芦丁为对照品,参考相关文献可知,川明参茎叶中含有该种化学成分[2],故本试验也以芦丁作为川明参茎叶总黄酮含量测定研究用对照品。

2.3 实验结果表明,川明参茎叶中总黄酮含量较高,而黄酮类成分具有止咳、祛痰、平喘等药理作用,故川明参茎叶具有一定的开发利用价值,本实验结果将为川明参的综合开发利用奠定基础。

[1]佘盂兰,单人骅.伞形科两新属—环根芹属和川明参属[J].植物分类学报,1980,18(1):45-49.

[2]王明安,彭树林,王明奎,等.川明参茎叶中的化学成分[J].高等学校化学学报,2002,(8):1539-1541.

[3]孟庆艳,刘圆,孔星芸,等.不同采收期大花罗布麻叶中黄酮的含量测定[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(15):50-52.

[4]刘文炜,沈祥春,陶玲,等.紫外分光光度法测定大蝎子草药材中总黄酮的含量[J].中国药房,2010,21(43):4088-4089.

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