杨梅果实黄酮类成分研究

彭财英，李强根，王加文，舒积成＊

（1.江西中医学院，江西 南昌 330004；2.江西省医药学校，江西 南昌 330200）

杨梅Myrica rubra Sieb.et Zucc.为杨梅科杨梅属植物，广泛分布于我国的华中、华南等地区，其果实香甜可口，为重要的水果产品之一，具有很好的药用价值［1，2］。目前国内外报道杨梅含有黄酮、酚酸、二苯庚烷等成分［3-5］，现代药理研究表明，杨梅中黄酮类化合物为主要的活性成分能降血脂、抗炎、抗菌等［6-8］。本课题对杨梅活性成分进行了研究得到的10个黄酮化合物：槲皮素（1）、槲皮苷（2）、异槲皮苷（3）、金丝桃苷（4）、槲皮素-3-O-β-D-1葡萄醛酸（5）、篇蓄苷（6）、杨梅素（7）、杨梅素-3＇-O-β-D-吡喃木糖（8）、杨梅素-7-O-β-D-半乳糖（9）、杨梅苷（10），化合物4～6，8和9为在此植物中首次分离得到。

1 仪器与材料

仪器：Boetius熔点测定仪（温度计未校正）；Bruker DRX-500及Bruker DRX-400型超导核磁共振波谱仪，TMS为内标（瑞士Bruker公司）；Agilent 1100LC／MSD Trap液相色谱—质谱联用仪（美国Agilent公司）；高效液相色谱仪（Waters公司）；三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）。

试剂：Sephadex LH-20（瑞典法玛西亚公司）；硅胶（青岛海洋化工厂）；甲醇、正丁醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、石油醚，均为分析纯。

杨梅果实于2009年6月中旬采自江西省，由江西中医学院赖学文教授鉴定，凭证标本（NO.090601），保存于江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室。

2 方法与结果

2.1 提取和分离

取阴干的杨梅果实10kg，粉碎至约60目，用80%工业乙醇在室温下浸泡12h后回流提取3次，每次2h，滤过并合并滤液，减压回收乙醇得棕色黏状提取物约750g，加适量蒸馏水捏溶后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压回收溶剂后得石油醚部位浸膏35g、乙酸乙酯部位浸膏32g、正丁醇部位浸膏40g，水部位蒸干重约合620g。取乙酸乙酯部位浸膏30g，过1.5kg硅胶（200～300目）柱色谱（2kg，Ф100mm ×L1200mm），以二氯甲烷∶甲醇（100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1，V／V）梯度洗脱，每份收集1000mL，合并TLC显示相似流分，得10个组分。Fr.2组份合并再经硅胶柱色谱（洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1，V／V），得Fr.2.1～2.22共22个流分，合并Fr.2.5～2.8流分，再反复经凝胶柱色谱（洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝1∶1），得化合物（1）22mg，合并 Fr.2.12～2.15流分，再反复经凝胶柱色谱（洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝1∶1），得化合物（7）55mg；Fr.4组份合并再经硅胶柱色谱（洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝12∶1，V／V ），得Fr.4.1～4.42共42个流分，合并Fr.4.10～4.14流分，再反复经凝胶柱色谱（洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝1∶1），得化合物（2）12mg和化合物（4）8mg，合并Fr.4.18～4.22流分，再反复经凝胶柱色谱（洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝1∶1），得化合物（3）9mg；Fr.7组份合并再经硅胶柱色谱（洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝7∶1，V／V ），得Fr.7.1～7.26共26个流分，合并Fr.7.8～7.14流分，再反复经凝胶柱色谱（洗脱剂为甲醇），得化合物（6）8mg，合并Fr.7.17～7.21流分，再反复经凝胶柱色谱（洗脱剂为甲醇），得化合物（9）7mg。取正丁醇部位浸膏35g，过1kg大孔树脂柱色谱，收集60%乙醇洗脱，浓缩后再经硅胶柱色谱（洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝5∶1，V／V），得Fr.1～36共36个流分，合并Fr.6～10流分，再反复经凝胶柱色谱（洗脱剂为甲醇），得化合物（8）12mg，合并Fr.18～22流分，再反复经凝胶柱色谱（洗脱剂为甲醇），得化合物（10）21mg，合并Fr.28～30流分，再反复经凝胶柱色谱（洗脱剂为甲醇），得化合物（5）6mg。

2.2 结构鉴定

2.2.1 化合物1

黄色针晶（甲醇）。ESI-MS m／z：303［M+H］+。1HNMR（DMSO-d6）δH：12.48（1H，s，5-OH），10.76（1H，s，7-OH），9.56（1H，s，4＇-OH），9.33（1H，s，3＇-OH），9.26（1H，s，3-OH），7.66（1H，d，J＝2.1Hz，H-2＇），7.52（1H，dd，J＝2.1，8.0Hz，H-6＇），6.86（1H，d，J＝8.0Hz，H-5＇），6.39（1H，d，J＝2.0Hz，H-8），6.16（1H，d，J＝2.0Hz，H＝6）。与文献［9］对照，化合物1鉴定为槲皮素。

2.2.2 化合物2

黄色粉末（甲醇）。ESI-MS m／z：449［M+H］+。1HNMR（DMSO-d6）δH：12.67（1H，s，5-OH），10.86（1H，s，7-OH），9.69 （1H，s，4＇-OH），9.32 （1H，s，3＇-OH），7.29（1H，d，J＝2.0Hz，H-2＇），7.26 （1H，dd，J＝2.0，8.5Hz，H-6＇），6.88 （1H，d，J＝2.0Hz，H-5＇），6.40 （1H，d，J＝2.0Hz，H-8），6.22 （1H，d，J＝2.0Hz，H-6），5.26 （1H，d，J＝1.6Hz，rha-H-1），3.22～3.97 （4H，m，rha-H-2～5），0.83（3H，d，J＝6.5Hz，rha-H-6）。13H-NMR （DMSO-d6）δC：177.5（C-4），163.9（C-7），161.0（C-5），157.4（C-9），156.1（C-2），148.2（C-4＇），144.9（C-3＇），134.1（C-3），120.5（C-6＇），120.8（C-1＇），115.4（C-5＇），115.1 （C-2＇），101.4 （rha-C-1），98.4（C-6），93.3 （C-8），71.0 （rha-C-4），70.2 （rha-C-3），70.0（rha-C-2），69.7（rha-C-5），17.3（rha-C-6）。与文献［9］对照，化合物2鉴定槲皮苷。

2.2.3 化合物3

黄色粉末（甲醇）。ESI-MS m／z：465［M+H］+。1HNMR（DMSO-d6）δH：7.71（1H，d，J＝2.0Hz，H-2＇），7.68（1H，dd，J＝2.0，8.2Hz，H-6＇），6.96（1H，d，J＝8.2Hz，H-5＇），6.53（1H，d，J＝2.1Hz，H-8），6.32 （1H，d，J＝2.1Hz，H-6），5.53（1H，d，J＝7.5Hz，glc-H-1），3.23～3.80 （6H，m，glc-H-2～6）。13C-NMR（DMSO-d6）δC：179.6（C-4），165.9（C-7），162.8（C-5），157.9（C-2），157.3（C-9），149.8（C-4＇），146.1（C-3＇），134.7（C-3），122.8（C-1＇），122.4（C-6＇），117.4（C-5＇），116.6 （C-2＇），105.0（C-10），102.5 （glc-C-1），100.1（C-6），94.9 （C-8），78.7 （glc-C-5），77.4 （glc-C-3），75.5（glc-C-2），71.4（glc-C-4），62.2（glc-C-6）。与文献［10］对照，化合物3鉴定为异槲皮苷。

2.2.4 化合物4

黄色粉末（甲醇）。ESI-MS m／z：465［M+H］+。1HNMR（DMSO-d6）δH：7.67（1H，d，J＝8.2Hz，H-6＇），7.57（1H，br.s，H-2＇），6.86（1H，d，J＝8.2Hz，H-5＇），6.45（1H，br.s，H-8），6.23 （1H，br.s，H-6），5.36 （1H，d，J＝7.6Hz，glc-H-1），3.45～3.84 （6H，m，glc-H-2～6）。13CNMR（DMSO-d6）δC：178.6（C-4），165.2（C-7），162.5（C-5），157.4（C-2），157.2 （C-9），149.6 （C-4＇），146.1 （C-3＇），134.5（C-3），122.6（C-1＇），122.2（C-6＇），118.3（C-5＇），116.2（C-2＇），105.0 （C-10），102.1 （glc-C-1），99.8 （C-6），94.6（C-8），78.5（glc-C-5），77.5（glc-C-3），75.4（glc-C-2），71.6（glc-C-4），61.2 （glc-C-6）。与文献［11］对照，化合物4鉴定为金丝桃苷。

2.2.5 化合物5

黄色粉末（甲醇）。ESI-MS m／z：477［M-H］-。1HNMR（DMSO-d6）δH：12.45（1H，s，5-OH），9.53（2H，br.s，3＇，4＇-OH），7.79（1H，d，J＝2.1Hz，H-2＇），7.50 （1H，dd，J＝2.1，8.2Hz，H-6’），6.87 （1H，d，J＝8.2Hz，H-5＇），6.30（1H，d，J＝2.0Hz，H-8），6.11 （1H，d，J＝2.0Hz，H-6），5.21（1H，d，J＝6.5Hz，glc-H-1），3.15～3.50 （4H，m，glc-H-2～5）。13C-NMR （DMSO-d6）δC：177.8（C-4），172.6（glc-C-6），165.1 （C-7），161.1 （C-5），157.2 （C-9），156.5（C-2），148.6（C-4＇），145.0（C-3＇），134.1 （C-3），121.3 （C-6＇），120.8（C-1＇），117.5 （C-5＇），115.5 （C-2＇），103.8 （C-4），102.6（glc-C-1），99.0 （C-6），93.9 （C-8），76.6 （glc-C-3），74.5（glc-C-5），74.1（glc-C-2），71.9（glc-C-4）。与文献［12］对照，化合物5鉴定为槲皮素-3-O-β-D-葡萄醛酸。

2.2.6 化合物6

黄色粉末（甲醇）。ESI-MS m／z：435［M+H］+。1HNMR（MeOH-d4）δH：7.50（1H，s，H-2＇），7.46（1H，d，J＝8.0Hz，H-6＇），6.87（1H，d，J＝8.0Hz，H-5＇），6.38 （1H，br.s，H-8），6.18（1H，d，J＝2.0Hz，H-6），5.44 （1H，br.s，ara-H-1），4.30 （1H，br.s，ara-H-2），3.82～3.88 （2H，m，ara-H-4，5），3.49（2H，br.s，ara-H-3）。13C-NMR （MeOH-d4）δC：180.5（C-4），166.5（C-7），163.6（C-5），159.8（C-2），158.9（C-9），150.4（C-4＇），146.8（C-3＇），135.3（C-3），123.5（C-1＇），123.4（C-6＇），117.4（C-2＇），116.8（C-5＇），109.9（ara-C-1），105.9 （C-10），100.4 （C-6），95.2 （C-8），88.5（ara-C-2），83.8（ara-C-3），79.2（ara-C-4），63.0 （ara-C-5）。与文献［13］对照，化合物6鉴定为篇蓄苷。

2.2.7 化合物7

黄色粉末（甲醇），ESI-MS m／z：319［M+H］+。1H NMR（DMSO-d6）δH：12.48（1H，s，5-OH），10.77（1H，s，7-OH），9.30（1H，s，3-OH），9.20 （2H，s，5＇，3＇-OH），8.77（1H，s，4＇-OH），7.24 （2H，s，H-2＇，6＇），6.37 （1H，br s，H-6），6.17（1H，br s，H-8）。13C-NMR（DMSO-d6）δC：176.1（C-4），164.2 （C-7），161.1 （C-5），156.4 （C-9），147.1 （C-2），146.1（C-3＇，5＇），136.2（C-3），121.1 （C-1＇），107.6 （C-2＇，6＇），103.3 （C-10），98.5 （C-6），93.6 （C-8）。与文献［3］对照，化合物7鉴定为杨梅素。

2.2.8 化合物8

黄色粉末（甲醇），ESI-MS m／z：451［M+H］+。1H NMR（DMSO-d6）δH 7.49（2H，s，H-2＇，6＇），6.41 （1H，d，J＝2.2Hz，H-8），6.19（1H，d，J＝2.2Hz，H-6），4.72 （1H，d，J＝7.5Hz，xyl-H-1），3.18-3.82 （5H，m，xyl-H-2，3，4，5）.13C-NMR （DMSO-d6）δC 176.5（C-4），164.6（C-7），161.6（C-5），156.8（C-9），146.9（C-2），146.4（C-5＇），146.3（C-4＇），138.4（C-3＇），136.8（C-3），121.7（C-1＇），111.2 （C-6＇），109.0（C-2＇），103.9 （C-10），103.2 （xyl-C-1），99.0 （C-6），94.1（C-8），76.5（xyl-C-3），73.8 （xyl-C-2），70.2 （xyl-C-4），66.4 （xyl-C-5）。与文献［14］对照，化合物8鉴定为杨梅素-3＇-O-β-D-吡喃木糖。

2.2.9 化合物9

黄色粉 末 （甲 醇），ESI-MS：m／z 479［M-H］-。1H NMR （MeOH-d4）δH：7.29（1H，s，H-2＇，6＇），6.28（1H，d，J＝2.1Hz，H-8），6.09（1H，d，J＝2.1Hz，H-6），5.09（1H，d，J＝7.8Hz，H-1"），3.43-3.79 （6H，m，gal-2，3，4，5，6）.13C-NMR（MeOH-d4）δC：179.6（C-4），166.2（C-7），163.0（C-5），158.8（C-2），158.4（C-9），146.5 （C-3′，5′），138.2（C-4′），136.1（C-3），121.8（C-1′），110.0（C-2′，6′），105.7（gal-C-1），100.0 （C-6），94.8 （C-8），77.3 （gal-C-5），75.2（gal-C-3），73.5（gal-C-2），70.1 （gal-C-4），62.0 （gal-C-6）。与文献［15］对照，化合物9鉴定为杨梅素-7-O-β-D-半乳糖。

2.2.10 化合物10

黄色粉 末 （甲 醇），ESI-MS：m／z 463［M-H］-。1H NMR （DMSO-d6）δH：6.91（1H，s，H-2＇，6＇），6.39（1H，d，J＝2.1Hz，H-6），6.21 （1H，d，J＝2.1Hz，H-6），5.21（1H，d，J＝2.0Hz，rha-H-1），3.20-4.01 （4H，m，rha-H-2，3，4，5），0.87（3H，d，J＝6.3Hz，rha-H-6）.13C NMR （DMSO-d6）δC：178.1（C-4），164.5（C-7），161.7（C-5），156.7（C-2），157.9（C-9），146.0（C-3′，5′），136.8（C-4′），134.6（C-3），121.0 （C-1′），108.2 （C-2′，6′），104.4 （C-10），102.3（rha-C-1），99.0 （C-6），94.0（C-8），71.5 （rha-C-4），70.9（rha-C-3），70.6 （rha-C-2），70.3 （rha-C-5），17.9 （rha-C-6）。与文献［3］对照，化合物10鉴定为杨梅苷。

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