高效液相色谱紫外荧光双检测器测定蔬菜中的克百威

张燕，闫磊，高文瑞，戴洋洋

（天津市乳品食品监测中心，天津 300381）

高效液相色谱紫外荧光双检测器测定蔬菜中的克百威

张燕，闫磊，高文瑞，戴洋洋

（天津市乳品食品监测中心，天津 300381）

建立一种测定农产品中克百威含量的高效液相色谱法。样品经乙腈萃取后，提取液采用固相萃取技术分离、净化，经浓缩后，采用Symmetry C18色谱柱分离，流动相为甲醇:水=35:65（体积比），紫外检测220 nm，标准曲线R=0.9999，最低检出限为0.033 mg/kg；荧光检测激发波长279 nm，发射波长307 nm，标准曲线R=0.9998，最低检出限为1.6×10-3mg/kg。平均回收率分别为95.5%。

高效液相色谱；克百威；紫外检测器；荧光检测器

克百威属高毒杀虫剂。对眼睛和皮肤无刺激作用。在试验剂量内对动物无致畸、致突变、致癌作用。对鱼、鸟高毒，对蜜蜂无毒害。适用范围适用于水稻、棉花、烟草、大豆等作物上多种害虫的防治，也可专门用作种子处理剂使用[1]。产品中克百威残留的检测标准都采用的是气相色谱方法，使用氮磷检测器分析。在采用该标准进行测定的过程中，发现氮磷检测器对克百威灵敏度低，对于低浓度定量检测困难，其检出限达不到产品的限量要求。克百威在紫外区有一定的吸收[2]，检测器上也可以得到良好的响应。本方法技术关键在于针对紫外检测器和荧光检测器，优化色谱条件，提高方法灵敏度，同时要保持良好的重现性。对于较低浓度的克百威残留，考虑用双检测器同时判定，共同定量，以提高方法的测定准确度。

1 材料与方法

1.1 试剂和材料

1.1.1 试剂

甲醇（色谱纯或更高）；去离子水；乙腈（分析纯或更高）；二氯甲烷（分析纯或更高）；氯化钠（分析纯或更高）：140℃烘烤4 h。

1.1.2 材料

固相萃取柱，氨基柱，容量6 mL，填充物500 mg；滤膜：0.2 μm，0.45 μm；克百威：标准品，不少于 99%。

1.2 标准溶液配制

准确称取一定量标准品，用甲醇稀释，逐一配制成1000 mg/L的标准储备液，贮存在-18℃以下冰箱中。使用时根据在检测器上的响应值，吸取适量的标准储备液，用甲醇稀释配制成所需的标准工作液。

1.3 测试样品

玉米，白菜，芹菜，红薯。

1.4 仪器和设备

岛津10A高效液相色谱仪（带二级管阵列检测器和荧光检测器）、梅特勒分析天平（0.0001 g）。

1.5 方法提要及原理

样品经乙腈萃取后，提取液采用固相萃取技术分离、净化，经浓缩后，使用带二级管阵列和荧光检测器的高效液相色谱同时在线进行检测，利用二级管阵列检测器的光谱扫描定性，荧光检测器定量。

1.6 测定步骤

1.6.1 提取

精确称取样品25.0 g试样放入匀浆机中，加入50.0 mL乙腈，在匀浆机中高速匀浆2 min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5 g～7 g氯化钠的100 mL具塞量筒中，收集滤液40 mL～50 mL，盖上塞子，剧烈振荡1 min，在室温下静置30 min，使乙腈相和水相分层。

1.6.2 净化

从100 mL具塞量筒中准确吸取10.00 mL乙腈相溶液，放入150 mL烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加热，杯内缓缓通入氮气或空气流，将乙腈蒸发近干；加入2.0 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）溶解残渣，盖上铝箔，待净化。

将氨基柱用4.0 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）预洗条件化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加入上述待净化溶液，用15 mL离心管收集洗脱液，用2 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）洗烧杯后过柱，并重复一次，将离心管置于氮吹仪上，水浴温度50℃，氮吹蒸发至近干，用甲醇准确定容至2 mL。在混合器上混匀后，用0.2 μm滤膜过滤，待测。

1.6.3 测定

分别取10 μL标准溶液和样品待测液注入高压液相色谱仪进行分析，得到组分的色谱峰。以保留时间和克百威标准光谱吸收曲线定性，用组分的色谱峰峰面积定量。

1.6.4 仪器条件

色谱柱：Symmetry C18柱，3.5 μm，4.6 mm×75 mm（或相当型号色谱柱）；流动相：甲醇+水（35+65）；流速：1.0 mL/min；紫外检测器：波长220nm；荧光检测器：激发波长279 nm，发射波长307 nm；进样量：10 μL。

1.6.5 空白试验

除不加式样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。

1.7 结果计算

试样中克百威含量以X表示，单位为（mg/kg），按式（1）计算。

式中：S为式样中克百威的峰面积；S0为标准溶液中克百威的峰面积；C0为标准溶液中克百威的浓度，（μg/mL）；V为样液最终定容体积，mL；m为称样质量，g；K 为稀释倍数，5。

2 实验结果

2.1 标准曲线

标准曲线见表1及图1、图2。

表1 克百威标准溶液浓度与峰面积Table 1 Carbofuran standard solution concentration and peak area

图1 克百威不同浓度标准溶液与紫外检测器峰面积线性关系Fig.1 Carbofuran different concentration of standard solution with UV detector linear relationship between peak area

图2 克百威不同浓度标准溶液与荧光检测器峰面积线性关系Fig.2 Carbofuran different concentration of standard solution and the fluorescence detector linear relationship between peak area

从图1、2中可知，此紫外和荧光检测器同时测得标准曲线的相关系数分别为R（UV）=0.9999和R（RF）=0.9998。

2.2 准确度

通过对玉米，白菜，芹菜，红薯这4种样品在不同浓度水平上（0.625、1.25、6.25 mg/kg）加标，回收率最低为86.8%，最高为112%，平均为95.5%，见表2。

表2 本方法测定4种样品的回收率Table 2 The method for determination of three kinds of samples recovery rate %

2.3 精密度

经过对4种阳性样品（玉米，白菜，芹菜，红薯）各15次平行测定得到数据的统计计算，4种阳性样品（玉米，白菜，芹菜，红薯）结果的变异系数分别为4.5%、1.1%、1.0%、4.8%，见表3。

表3 本方法测定4种阳性样品15次平行实验结果Table 3 The method for determination of four kinds of positive samples 15 parallel experiment m g/k g

2.4 检出限

按照5009.1中色谱分析的检出限计算方法，分别使用紫外和荧光检测器的标准校正曲线计算出各自的检出限：紫外法 3.3×10-2mg/kg，荧光法 1.1×10-3mg/kg，见表4及表5。

表4 紫外检测器标准校正曲线计算出的检出限Table 4 UV detector calibration curve to calculate the detection limit

表5 荧光检测器标准校正曲线计算出的检出限Table 5 Fluorescence detector calibration curve to calculate the detection limit

2.5 标准品紫外荧光两种检测器检测紫外色谱图

标准品紫外荧光两种检测器检测紫外色谱图，见图3～4。

图3 克百威标准品紫外色谱图Fig.3 Carbofuran standard UV chromatogram

图4 克百威标准品荧光色谱图Fig.4 Carbofuran Standard fluorescence chromatogram

2.6 克百威标准品及阳性样品二极管阵列检测器

克百威标准品及阳性样品二极管阵列检测器（190nm～370 nm）紫外全波长扫描光谱图，见图5～6。

3 结论及讨论

3.1 阳性的判定

通常现行测定克百威的国家、行业及其他标准液相方法中，对阳性结果判定的方法多为保留时间定性，由于样品的繁杂会造成样品中未知峰被误判为阳性峰，出现假阳性。本方法通过加入对目标峰全波长扫描，使用标准光谱图与目标峰光谱图比对，从而可以准确定性，减少误判。

3.2 灵敏度

图5 克百威标准品紫外全波长扫描光谱图Fig.5 Carbofuran standard ultraviolet wavelength scanning spectrum

图6 阳性样品紫外全波长扫描光谱图Fig.6 Positive samples ultraviolet wavelength scanning spectrum

农业部标准NY/T761-1997方法中测定克百威的检出限2.5×10-3mg/kg，本实验方法的最低检出限可以达到1.6×10-3mg/kg，故在痕量残留检测时有一定的优势。

3.3 准确度和精密度

通过实验数据可以看出，本实验方法测定样品加标有较好的回收，平行实验也有稳定结果，能够满足对蔬菜样品检测的要求。

[1]农业部农药检定所.新编农药手册[M].北京:农业出版社,1989:103-107

[2]李萍,王绪卿.肉及蛋类食品中氨基甲酸酯类农药多组分残留高效液相色谱分析[J].卫生研究,2002,31(6):465-467

High-performance Liquid Chromatography Determination of UV Fluorescence Dual Detection of Carbofuran in Vegetables

ZHANG Yan,YAN Lei,GAO Wen-rui,DAI Yang-yang
（Dairy Food Monitoring Center,Tianjin 300381,China）

To establish a determination carbofuran in vegetables content by high performance liquid chromatography.Samples with acetonitrile extraction,extraction using solid phase extraction technique for the separation,purification,after concentration,using the Symmetry C18column,mobile phase of methanol:water=35:65(volume ratio).UV detection was 220 nm,standard curve R=0.9999.The lowest detection limit was 0.033 mg/kg.In the fluorescence detection,excitation wavelength was279nm and emission wavelength was307nm.Standard curve R=0.9998,the minimum detectable limit was 1.6×10-3mg/kg.The average recoveries were 95.5%.

high-performance liquid chromatography;Carbofuran;UV detection;fluorescence detection

张燕（1979—），女（汉），工程师，本科，研究方向：主要从事光谱和液相色谱仪器的应用和研究。

2011-12-30