鱼腥草根和叶醇提物抗氧化活性比较研究

季晓晖，李利华

（陕西理工学院化学与环境科学学院，陕西 汉中 723000）

鱼腥草根和叶醇提物抗氧化活性比较研究

季晓晖，李利华

（陕西理工学院化学与环境科学学院，陕西 汉中 723000）

对比鱼腥草根和叶的乙醇提取物抗氧化活性。分别采用70%乙醇制备鱼腥草根醇提物、叶醇提物，通过测定还原能力和对羟自由基（·OH）、超氧自由基（O2－·）、亚硝酸盐（NO2－）的清除作用，评价鱼腥草根、叶醇提物体外抗氧化活性，并测定醇提物中多糖、总黄酮和总酚含量。在不同的抗氧化体系中，鱼腥草根、叶醇提物的抗氧化能力有差异，其中叶醇提物的抗氧化活性明显强于根醇提物。多糖、总黄酮、总酚含量测定结果显示，鱼腥草根醇提物中各活性成分的含量均高于叶醇提物。鱼腥草根、叶醇提物均表现出不同程度的抗氧化活性，且抗氧化活性与活性成分含量呈正相关。

鱼腥草根和叶；抗氧化活性；清除自由基；活性成分

鱼腥草（Houttuynia cordata Thunb）又名蕺菜、侧耳根，属三百草科（Sanruraceae）蕺菜属（Houttuynia Thunb.），因全草带鱼腥味而得名，长江流域和南方省区分布广泛[1]。鱼腥草其性味辛，微寒，不仅富含人体所需的蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质等多种营养成分，同时含有鱼腥草素、月桂醛、黄酮类等多种药效成分，具有清热解毒，消痈排脓，利尿通淋等功效，是一种“药食兼用型”野生植物[2-3]。

自由基是一类上层轨道含有未配对电子的原子团或特殊状态分子。随着自由基化学的广泛关注，活性氧对机体的侵害越来越被人们所认知，如何开发利用抗氧化剂调节体内代谢，预防疾病，延缓衰老等引起人们广泛的关注，成为现今各领域的研究热点[4-5]。目前，人工合成抗氧化剂如BHT（丁基羟基甲苯）、BHA（丁基羟基茴香醚）存在直接或间接的致癌作用，在一些发达国家己禁止使用。而天然抗氧化剂由于具有来源广、抗氧化活性大、与机体亲和力强和安全性高等优点，具有广阔发展前景和深远意义[6]。本研究以70%乙醇提取鱼腥草根、叶中的活性物质，以VC试剂作为阳性对照，通过测定鱼腥草根、叶醇提物的还原能力、对羟基自由基（·OH）清除、对超氧自由基（O2－·）清除和对亚硝酸盐（NO2－）的清除作用，评价根、叶醇提物的抗氧化活性，并测定醇提物中活性成分的含量；旨在为鱼腥草作为功能性食品及天然抗氧化剂的开发提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料、试剂和仪器

新鲜鱼腥草根、叶：采挖于陕南西乡山区（经陕西理工学院生物学院植物学教研室鉴定为三白科植物鱼腥草），将鱼腥草根、叶分别洗净，低温烘干至恒重，粉碎，过40目筛备用。

无水乙醇、硫酸亚铁、邻二氮菲、邻苯三酚、铁氰化钾、亚硝酸钠、对氨基苯磺酸、盐酸萘己二胺、抗坏血酸等，以上试剂均为分析纯；芦丁标准品，购自中国药品生物制品检定所；蒸馏水为二次重蒸水。

TU-1810紫外-可见分光光度计：北京普析通用仪器有限公司；RE-52AA旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵：巩义市予华仪器有限公司；TDL-5台式离心机：上海安亭科技仪器厂；电热鼓风干燥箱101型：北京科伟永兴仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 鱼腥草根、叶醇提液的制备

取鱼腥草根、叶干粉各10.0g，分别用体积分数70%（体积分数）乙醇在75℃提取2次，每次2 h，料液比1:25（g:mL），过滤，合并滤液，减压浓缩至浸膏，真空干燥，称重，得鱼腥草根醇提物和叶醇提物。以此固体为溶质，70%（体积分数）乙醇为溶剂配制一定浓度的两种醇提物溶液，置于100 mL棕色容量瓶中，4℃保存备用，使用时稀释至适当浓度。配制相同浓度的VC溶液，作为两醇提物抗氧化性比较的对照液。

1.2.2 还原能力的测定

参考Oyaizu的方法[7]。取5支10 mL具塞比色管，在各管中依次加入不同浓度的待测液1 mL，再加入pH 6.6的磷酸盐缓冲液2.5 mL和1%铁氰化钾2.5 mL，混匀后在50℃水浴中保温20 min，急速冷却，加入10%的三氯乙酸2.5 mL，混匀，以3000 r/min离心10 min，移取上清液2.5 mL，加蒸馏水2.5 mL和0.1%三氯化铁0.5 mL，常温反应5 min后在700 nm处测吸光度，吸光度越高，还原能力越强，并用VC试剂做阳性对照。

1.2.3 对羟基自由基（·OH）清除作用

参照Fenton反应的方法建立·OH自由基产生体系模型[8]。取7支10mL具塞试管编号1～7，其中1号为未损伤管，2号为损伤管，在7只比色管中依次加入5 mmol/L的邻二氮菲溶液1 mL，pH 7.4的PBS缓冲溶液3.8mL，在3管～7管依次加入不同浓度的待测液1mL，再在2管～7管加5 mmol/L FeSO41.5 mL，最后在2管～7管中加入0.1%H2O21 mL，每加一管立即混匀，用蒸馏水将各管定容至10 mL，于37℃恒温水浴1 h，于536 nm处分别测定各管的吸光度值，计算对·OH的清除率。

·OH清除率=（A样品-A损伤）/（A未损-A损伤）×100%

1.2.4 对超氧自由基（O2-·）的清除作用

采用邻苯三酚自氧化法[9]。取5支10 mL具塞比色管，各加入0.05mol/LpH8.2的Tris-HCL缓冲溶液6mL，置于25℃水浴中预热20 min，在各管中依次加入不同浓度的待测液1 mL，再立即加入在25℃水浴中预热的7 mmol/L邻苯三酚1 mL，在30 s内定容至刻度，最后在25℃水浴中准确反应4 min，立即用8 mol/L盐酸2滴终止反应，在320 nm处测吸光度，计算对O2-·的清除率。

O2-·清除率=（A空白-A样品）/A空白×100%

1.2.5 对亚硝酸盐（NO2－）的清除作用

方法稍作改动[10]。分别移取不同浓度的待测液5 mL于25 mL具塞比色管中，加入5 μg/mL的亚硝酸钠标准溶液3 mL，pH 3.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液5 mL，于37℃水浴中反应15 min，立即加入0.4%对氨基苯磺酸溶液2 mL，混匀，静置3 min～5 min后，加入0.2%盐酸萘乙二胺溶液1 mL，加蒸馏水至刻度，混匀，静置15 min，在544 nm处测吸光度，计算对NO2-的清除率。

NO2-清除率=（A空白-A）/A空白×100%

1.2.6 鱼腥草根、叶醇提物中活性成分含量测定

多糖含量测定采用蒽酮-硫酸法[11]，以葡萄糖为标准品；总黄酮含量测定采用络合-分光光度计法[12]，以芦丁为标准品；总多酚含量测定采用福林-酚法[13]，以没食子酸为标准品。

2 结果与分析

2.1 醇提物的还原能力

鱼腥草根、叶醇提物的还原能力如图1所示。

图1 根、叶醇提物的还原能力Fig.1 Reducing power of roots and leaves alchol extracts from Houttuynia cordata Thunb

由图1可知，在所选测试浓度范围内，鱼腥草根醇提物、叶醇提物都具有较好的还原能力，并随浓度的增加而逐渐增强，且同浓度的叶醇提物的还原能力强于根醇提物；同等条件下VC的还原能力介于鱼腥草根醇提物和叶醇提物之间。

2.2 醇提物对羟基自由基（·OH）清除作用

鱼腥草根、叶醇提物对·OH的清除作用如图2所示。

图2 根、叶醇提物对·OH的清除能力Fig.2 Scavenging effect of of roots and leaves alchol extracts from Houttuynia cordata Thunb on·OH free radicals

由图2可看出，两种醇提物对Fe2+-H2O2体系产生的·OH都具有一定的清除作用，且随浓度的增加清除率增强。在实验浓度范围内，鱼腥草叶醇提液对·OH的清除作用明显强于根醇提物。对比VC可见，在实验浓度范围内，当浓度小于0.8 mg/mL时，VC对·OH的清除率高于根醇提物和叶醇提物，随着浓度的增大，VC对·OH的清除能力不及鱼腥草叶醇提物，但始终强于根醇提物的清除能力。

2.3 醇提物叶对超氧自由基（O2-·）清除作用

鱼腥草根、叶醇提物对O2-·的清除作用如图3所示。

图3 根、叶醇提物对O2-·的清除能力Fig.3 Scavenging effect of of roots and leaves alchol extracts from Houttuynia cordata Thunb on O2-·free radicals

由图3可知，鱼腥草根醇、叶醇提物对O2-·均具有明显的清除作用，并且呈明显的量效关系。当醇提物浓度达到1.0 mg/mL时，两醇提物对O2-·的清除率分别为：68.2%和78.6%，说明鱼腥草叶醇提物对O2-·的清除作用强于根醇提物，同浓度Vc的清除率为90.2%，表明鱼腥草根醇提物和叶醇提物对O2-·的清除能力不及VC。

2.4 醇提物对亚硝酸盐（NO2-）的清除作用

鱼腥草根、叶醇提物对NO2-的清除作用如图4所示。

图4 根、叶醇提物对NO2-的清除能力Fig.4 Scavenging effect of of roots and leaves alchol extracts from Houttuynia cordata Thunb on NO2-radicals

由图4可看出，随着两种醇提物浓度增加，对NO2-的清除率也逐渐增大，且同浓度的鱼腥草叶醇提物对NO2-的清除率明显高于根醇提物。同等条件下，鱼腥草根醇提物和叶醇提物对NO2-的清除能力均低于VC。

2.5 醇提物中活性成分含量测定结果

鱼腥草根、叶醇提物中活性成分含量测定结果如表1所示。

表1 鱼腥草根、叶醇提物活性成分含量Table 1 The contents of active components in each extracts mg/g

由表1可看出，鱼腥草根、叶醇提物中多糖、总黄酮、总多酚等活性成分含量较为丰富，且叶醇提物中各活性成分含量均高于根醇提物，这与鱼腥草根、叶醇提物的抗氧化活性顺序相一致。

3 讨论

用70%乙醇浸提法制得鱼腥草根、叶醇提物。抗氧化活性实验研究表明，鱼腥草根、叶醇提液具有较强的还原能力，对羟基自由基（·OH）、超氧自由基（O2-·）、亚硝酸盐（NO2-）均具有一定的清除作用；其中鱼腥草叶醇提物的抗氧化能力明显强于根醇提物。活性成分含量测定结果显示：鱼腥草叶醇提物中多糖、总黄酮和总多酚含量高于根醇提物，这与其抗氧化活性顺序相一致。

由于醇提物中活性成分的多样性，因而需进一步对醇提物中活性成分进行分离、纯化与抗氧化活性检测，进而探明活性成分结构与抗氧化活性的关系，以期为从鱼腥草根、叶中筛选出高效抗氧化活性物质提供据。

参考文献：

[1]刘咏松.从鱼腥草看蔬菜特殊性[J].食品研究与开发,2009,22(7):24-26

[2]陈庆华,邹秀丽,李芸瑛,等.鱼腥草营养成分的分析[J].浙江农业科学,2009(5):992-993

[3]陈灿,黄璜,王林辉,等.鱼腥草的研究利用现状与趋势[J].作物研究,2002,16(5):262-265

[4]LU T,FINKEL T.Free radicals and senescence[J].Experimental cell research,2008,314(9):1918-1922

[5]郑瑞生,封辉,戴聪杰,等.植物中抗氧化活性成分研究进展[J].中国农学通报,2010,26(9):85-90

[6]李磊,王岳飞,梁燕,等.天然抗氧化物质的保健功能及抗氧化活性研究进展[J].茶叶,2008,34(2):70-74

[7]Lee S C,Jeong S M,Kim S Y.Effect of far-infrared radiation and heat treatment on the antioxidant activity of water extracts from peanut hulls[J].Food chemistry,2006,94(4):489-493

[8]AMAROWICZR,ZEGARSKAZ,RAFALOWSKIR,etal.Antioxidant activity and free radical-scavenging capacity of ethanolic extracts of thyme,oregano,and marjoram[J].Eur J Lipid Sci Technol,2009,111(8):1111-1117

[9]朱广财,朱丹,王军,等.沙棘清除自由基作用的研究[J].中国食品学报,2010,10(1):36-40

[10]王莹.模拟胃酸条件下紫甘薯花色苷清除亚硝酸盐的效果[J].食品科学,2009,30(5):109-111

[11]唐建红,刘川玉,苏涵.车前子不同炮制品多糖含量测定[J].华夏医学,2009,22(3):494-496

[12]莫开菊,柳圣,程超.生姜黄酮的抗氧化活性研究[J].食品科学,2006,27(9):110-115

[13]郭娟,艾志录,崔建涛,等.苹果渣中多酚物质的福林法测定[J].食品工业科技,2006,27(2):178-180

Comparison of Antioxidant Activities of Roots and Leaves Alcohol Extracts from Houttuynia Cordata Thunb

JI Xiao-hui,LI Li-hua
（Chemical and Environmental Sciences,Shaanxi University of Technology,Hanzhong 723000,Shaanxi,China）

Compare the antioxidant activities of extracts of roots and leaves from Houttuynia cordata Thunb in vitro.The extracts of roots and leaves of Houttuynia cordata Thunb were extracted by 70 percent alcohol.The antioxidant activities of these plants were analysed by using different assays,such as reducing power,hydroxyl free radical(·OH)scavenging assay,superoxide anion free radical(O2-·)scavenging assay and nitrite(NO2-)scavenging assay.The contents of polysaccharide,flavonoids and polyphenol from extracts were also determined.A significant difference was observed in antioxidant activities among the alcohol extracts of roots and leaves in different antioxidant evaluation systems.The antioxidant activities of leaves extracts were stronger than roots extracts.The contents of polysaccharide,flavonoids and polyphenol from leaves extracts were higher than roots extracts.The alcohol extracts of roots and leaves had antioxidant capacities in different antioxidant evaluation systems,and the order of the antioxidant activities of root and leaf extracts was correlated with the contents of active components.

roots and leaves of Houttuynia cordata Thunb;antioxidant activities;free radical scavenging;active components

陕西理工学院校级重点资助科研项目（SLGKY11-09）

季晓晖（1977—），男（汉），讲师，硕士，研究方向：天然产物有效成分的分析、检测。

2012-01-11