哈蟆油降血脂、耐缺氧和抗疲劳的功能研究

王涵，赵雨，张梅，杨士慧，张鑫

（长春中医药大学中医药与生物工程研发中心，吉林 长春 130117）

哈蟆油降血脂、耐缺氧和抗疲劳的功能研究

王涵，赵雨*，张梅，杨士慧，张鑫

（长春中医药大学中医药与生物工程研发中心，吉林 长春 130117）

研究哈蟆油降血脂、耐缺氧和抗疲劳功能。运用酶法测大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量；观察小鼠常压耐缺氧存活时间及负重游泳时间，测定小鼠血乳酸含量。结果显示哈蟆油能显著降低大鼠TC和TG的含量；显著延长小鼠常压缺氧存活时间及负重游泳时间，显著降低其血乳酸含量。说明哈蟆油具有辅助降血脂、抗疲劳和耐缺氧功能。

哈蟆油；降血脂；耐缺氧；抗疲劳

中国林蛙（Rana temporaria chensinensis David），又称哈什蟆，属两栖纲无尾目蛙科蛙属，为国家二级保护动物，主要分布于我国东北地区。其雌性的输卵管被称为哈蟆油（Oviductus Ranae），俗称哈什蟆油[1-2]。据《中国药典》（2005年版）Ⅰ部收载，具有补肾益精、润肺养阴的功效，用于治疗阴虚体弱、神疲乏力、心悸失眠、盗汗不止、痨嗽咳血等症[3]。高血脂患者往往从血液中总胆固醇、甘油三酯及高密度脂蛋白胆固醇含量来判断：缺氧对机体是一种紧张性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化供能，最终会导致机体的心、脑等重要器官缺氧或损伤，引起氧供应能力不足而导致死亡[4]；通常运动引起肌肉及体液内乳酸的增加是肌肉产生疲劳的主要原因，也是影响肌肉活动能力的重要因素[5]，本文从以上三个方面对哈蟆油降血脂、耐缺氧及抗疲劳的功能进行了研究。目前的研究[6-7]主要是针对哈蟆油的复方及不同剂型的产品。为更好地开发和利用哈蟆油，使之更有效地应用于临床，本研究为哈蟆油药理作用研究及产品开发提供了理论参考。

1 材料

1.1 药材与试剂

哈蟆油购自于吉林省白山市北亚药业，经长春中医药大学中药鉴定教研室姜大成教授鉴定为中国林蛙（Rana temporaria chensinensis David）雌蛙的干燥输卵管；血清总胆固醇（TC）试剂盒、甘油三酯（TG）试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒：上海科欣生物技术研究所。

1.2 试验动物

SPF级BALB/C种雄性小鼠120只，体重为（20±2）g，Wistar雄性大鼠 60 只，体重为（180±20）g，购于吉林大学实验动物中心。

2 方法

2.1 哈蟆油辅助降血脂试验

2.1.1 大鼠分组与给药

大鼠适应性饲养观察5 d，取尾静脉血测定TC、TG和HDL-C等各项血脂指标。根据TC水平，采用随机抽样方法将大鼠分为5组，每组12只，并适当调整使各组大鼠的TG、HDL-C及初始体重尽可能均衡。设低、中、高3个剂量的试验组，剂量分别为0.05、0.1、0.2 g/kg，另设一个基础饲料对照组（基础对照）和一个高脂模型对照组（高脂对照）。开始试验后，基础饲料对照组给予合成鼠料，高脂组给予高脂饲料，各剂量组在给予高脂饲料的同时给予受试药物。每周称重一次，并根据体重调整给药量。灌胃给药，每天1次，连续给药30 d。

2.1.2 测定指标

依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》2003版[6]，采用脂代谢紊乱模型法－预防性给受试样品，试验至第30天摘眼球取血，采用酶联法测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量，采血前动物禁食16 h，记录试验数据并进行方差分析。

2.2 哈蟆油常压耐缺氧和抗疲劳试验

2.2.1 小鼠分组与给药

小鼠120只，随机分为3大组，分别用于耐缺氧试验和负重游泳试验及血乳酸试验。每大组分为4小组（n=10），即低剂量组（0.25 g/kg）、中剂量组（0.50 g/kg）、高剂量组（1.0 g/kg）和空白对照组，空白对照组给予等体积蒸馏水。灌胃给药，每天1次，连续给药30 d。每6天称体重1次，根据体重调整给药量。

2.2.2 哈蟆油常压耐缺氧试验

末次给药1 h后，将各组小鼠逐只放入盛有5 g钠石灰的250 mL磨口瓶内，每瓶1只，加盖，以凡士林密封瓶口，旋紧密封，立即计时，以呼吸停止时间为指标，观察小鼠因缺氧而死亡时间，记录试验数据并进行方差分析。

2.2.3 哈蟆油对小鼠抗疲劳试验

2.2.3.1 负重游泳试验

末次灌胃给药30 min后开始试验，于小鼠尾部加上相当于5%体重的铅丝，放在水温（25±1）℃，水深30 cm，池壁光滑的水池中。计录小鼠自游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间，记录试验数据并进行方差分析。

2.2.3.2 小鼠运动后血液疲劳代谢血乳酸指标的测定

末次灌胃给药30min后，放入游泳箱中游泳10min后取出，休息20 min，从内眦静脉丛采血20 μL，测定血清中血乳酸（BLA）指标[6]，记录试验数据并进行方差分析。

3 结果

3.1 哈蟆油对大鼠体重及TC、TG、HDL-C含量的影响

哈蟆油对大鼠体重及TC、TG、HDL-C含量的影响，见表1。由表1可见，大鼠在试验前的体重和血脂相关的各项指标基本平衡，在统计学上没有显著性差异（P<0.05）。试验至第30天，高脂对照组TC、TG含量均高于基础对照组，且差异有统计学意义（P<0.05），表明高脂模型建模成功。

表1 哈蟆油对大鼠体重及TC、TG、HDL-C含量的影响（n=12Table 1 Effects of Oviductus Ranae on mice body weight TC,TG,HDL-C content（n=12,

表1 哈蟆油对大鼠体重及TC、TG、HDL-C含量的影响（n=12Table 1 Effects of Oviductus Ranae on mice body weight TC,TG,HDL-C content（n=12,

注：*与高脂模型组相比P<0.05；#与基础对照组相比P<0.05；表示差异显著。

大鼠体重在试验后与高脂组比较无显著性差异。各剂量组实验后TC、TG含量与高脂组比较均明显降低，且具有统计学意义（P<0.05）。表明哈蟆油具有辅助降血脂的作用。

3.2 哈蟆油对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响

哈蟆油对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响，见表2。

表2 哈蟆油对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响（x±s）Table 2 Effects of Oviductus Ranae on mice atmospheric antianoxia survival time

表2 哈蟆油对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响（x±s）Table 2 Effects of Oviductus Ranae on mice atmospheric antianoxia survival time

注：*与对照组相比P＜0.05，表示差异显著；**与对照组相比P<0.01，表示差异非常著性。

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由表2可见，哈蟆油各剂量组小鼠常压耐缺氧存活时间比对照组明显延长，且低剂量组差异显著（P＜0.05），中、高剂量组差异非常显著（P<0.01）。表明哈蟆油具有提高小鼠心脑耐缺氧能力。

3.3 哈蟆油对小鼠负重游泳时间及血乳酸含量的影响

哈蟆油对小鼠负重游泳时间及血乳酸含量的影响，见表3。

表3 哈蟆油对小鼠负重游泳时间及血乳酸含量的影响（n=10Table 3 Effect of Oviductus Ranae on swimming time on burdened mice,and the content of blood lactate of the mice(n=15

表3 哈蟆油对小鼠负重游泳时间及血乳酸含量的影响（n=10Table 3 Effect of Oviductus Ranae on swimming time on burdened mice,and the content of blood lactate of the mice(n=15

注：*与对照组相比P<0.05，表示差异显著。

组别剂量/（g/kg）负重游泳时间/min全血LAC含量/(mmol/L)对照组 — 5.30±1.2 1.25±0.37低剂量组 0.25 29.8±2.3* 0.93±0.28*中剂量组 0.5 9.8±2.8 0.86±0.39*高剂量组 1.0 9.8±2.6 0.85±0.31*

由表3可见，各剂量组与对照组比较均能延长小鼠负重游泳时间，且低剂量组具有显著性差异（P＜0.05）。各剂量组比对照组比较均能降低小鼠血乳酸含量，且具有显著性差异（P＜0.05）。表明哈蟆油具有提高机体耐受能力及抗疲劳作用。

4 结论与讨论

本研究表明哈蟆油能量显著降低大鼠TC和TG的含量；各剂量组均能显著延长小鼠常所压缺氧存活时间；低剂量组可延长小鼠负重游泳时间；各剂量组均能降低其血乳酸含量。

实验结果表明了哈蟆油可以降低由于高脂膳食所致的血清总胆固醇和甘油三酯含量升高，证明哈蟆油具有辅助降血脂功能。常压耐缺氧实验表明哈蟆油能显著延长小鼠在密闭缺氧条件下的存活时间，这说明哈蟆油能增强小鼠心肌功能和氧得用率，增强机体在缺氧条件下的应激能力。负重游泳实验表明低剂量组哈蟆油的小鼠能显著延长游泳时间。各剂量组小鼠游泳后20 min其血液中乳酸含量均比对照组降低，证明哈蟆油能提高机体抗疲劳能力。综上所述，本研究表明哈蟆油具有辅助降血脂、抗疲劳及提高机体耐缺氧能力作用，本实验结果为进一步深入开发哈蟆油保健品提供了理论依据。

[1]张颖才.哈什蟆油[J].中药通报,1956,2(5):205-207

[2]中国医学科学院药物研究所.中药志[M].北京:人民卫生出版社,1961:513

[3]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:179

[4]毛焕新,尤秀新,程光惠,等.林蛙油软胶囊抗疲劳作用的试验研究[J].华南预防医学,2005,31(6):40-41

[5]王高学,姚嘉斌.哈士蟆油复方抗疲劳作用研究[J].中草药,2008,30(1):120-122

[6]中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[S].2003:36-39

[7]程敏,叶小弟,缪云萍,等.注射用舒血宁对小鼠耐缺氧能力的影响[J].中国实验方剂学杂志,2009(6):89-90

[8]孙冬菊,黄德苓,张兆强,等.无花果水提取物对小鼠抗疲劳、耐缺氧作用的实验研究[J].职业与健康,2007,23(13):1105-1106

[9]李军,金圣煊,雷荣剑,等.今幸胶囊抗疲劳作用的实验研究[J].中国现代应用药学杂志,2009,26(4):273-276

Effect of Oviductus Ranae on Reducing Serum Lipid and Ability of Anti-Anoxia and Anti-Fatigue

WANG Han,ZHAOYu*,ZHANG Mei,YANG Shi-hui,ZHANG Xin
（Center for New Medicine Research of Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,Jilin,China）

Study the effect of Oviductus Ranae on reducing serum lipid and ability of anti-anoxia and antifatigue.Enzymatic detection of serum total cholesterol(TC),triglyceride(TG),high density lipoprotein cholesterol(HDL-C).The mice in each group was observed atmospheric anti-anoxia survival time and loaded swimming time,determined blood lactic acid.Oviductus Ranae can significantly reduce TC and TG levels in rats,and significantly increase in mice atmospheric anti-anoxia survival time and loaded swimming time and significantly decrease the increase in serum lactate.Oviductus Ranae have the function of reducing serum lipid and antianoxia and anti-fatigue.

Oviductus Ranae;reducing serum lipid;anti-anoxia;anti-fatigue

*通信作者：赵雨，研究员，从事蛋白组学研究工作。

国家“十一五”科技支撑项目（2007BAI38B06）

王涵（1985—），女（汉），硕士研究生，主要从事中药有效成分与应用开发研究的工作。

2011-12-06